BD Trypticase Soy Agar II With 5% Sheep Blood

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254053.07
Rev.: April 2013
BD Trypticase Soy Agar II With 5% Sheep Blood
USO PREVISTO
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood es un medio nutritivo de uso general para el
aislamiento y el cultivo de microorganismos exigentes y no exigentes procedentes de muestras
clínicas y para la detección de reacciones hemolíticas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Dada su composición nutritiva, el agar de soja Trypticase (TSA) se ha convertido en un medio
de uso muy extendido, ya sea sin suplementos o como base de medios con sangre1. BD
Trypticase Soy Agar II es una versión mejorada, que proporciona zonas hemolíticas más
definidas que el agar de soja Trypticase (TSA) suplementado con sangre de carnero al 5%.
Ofrece crecimiento excelente y beta-hemólisis de estreptococos hemolíticos y otros
organismos2-4. Es adecuado para la realización de la prueba de CAMP (formación de una zona
de hemólisis completa y sinérgica en la intersección de los inóculos extendidos
perpendiculares de Staphylococcus aureus y los estreptococos del grupo B) para la
identificación presuntiva de Streptococcus agalactiae y para uso con discos de bacitracina de
baja concentración (0,04 de unidad) (discos BD Taxo A) para identificación presuntiva de
estreptococos del grupo A (S. pyogenes)2,3,5,6.
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood no es el medio apropiado para el
aislamiento primario de organismos anaerobios exigentes.
La combinación de caseína y peptonas de soja en la base del agar de soja Trypticase (TSA II)
hace que el medio de agar sangre sea altamente nutritivo, al suministrar nitrógeno orgánico,
en especial aminoácidos y péptidos de cadena más larga. El cloruro sódico mantiene el
equilibrio osmótico. Otros factores de crecimiento patentados mejoran las reacciones
hemolíticas. La sangre de carnero desfibrinada es la sangre utilizada con mayor frecuencia
para enriquecer los medios con base de agar1.
REACTIVOS
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood
Fórmula* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína
14,5 g
Digerido papaico de harina de soja
5,0
Cloruro sódico
5,0
Factores de crecimiento
1,5
Agar
14,0
Sangre de carnero desfibrinada
5%
pH 7,3 ± 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
PA-254053.07
-1-
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre
que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas inoculadas a una
temperatura de 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia suplementada con dióxido de carbono.
Examinar las placas después de un período entre 18 y 24 h para comprobar la extensión del
crecimiento, el tamaño de la colonia y las reacciones hemolíticas.
Cepas
Escherichia coli ATCC 25922
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Shigella flexneri ATCC 12022
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Streptococcus agalactiae ATCC 12386
Streptococcus pneumoniae ATCC 6305
Streptococcus pyogenes ATCC 19615
Sin inocular
Resultados del crecimiento
Crecimiento de bueno a excelente; posiblemente betahemolítico
Crecimiento de bueno a excelente
Crecimiento de bueno a excelente
Crecimiento entre bueno y excelente, beta-hemólisis
Crecimiento entre bueno y excelente, beta-hemólisis
(débil)
Crecimiento de bueno a excelente de colonias de color
gris verdoso; alfa-hemólisis
Crecimiento de bueno a excelente; beta-hemólisis
Rojo (color sangre)
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Se trata de un medio de aislamiento universal en bacteriología aerobia que se puede utilizar
con todo tipo de muestras clínicas (véase también CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con
flora mixta.
Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en
una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Para
aumentar la detección de todos los patógenos en una muestra, ésta también debe extenderse
en medios selectivos apropiados1,4.
Dado el alto número de patógenos que requieren dióxido de carbono para su aislamiento
primario, las placas deben incubarse en una atmósfera que contenga aproximadamente de 3 a
10% de CO2. Incubar las placas a una temperatura entre 35 y 37 °C durante un período de 18
a 24 horas o más si es necesario.
Prueba de CAMP: Los aislados presuntivos de Streptococcus agalactiae pueden ser
analizados mediante la prueba de CAMP para lograr una identificación presuntiva. El inóculo
puede seleccionarse a partir de una placa de agar sangre. Realizar una sola extensión de
Staphylococcus aureus ATCC 33862 por el centro de la placa. Si se utiliza un asa, no usarla
en paralelo a la superficie del agar, dado que se producirá una extensión muy ancha y el
resultado no será satisfactorio. Las cepas de prueba estreptocócicas se inoculan realizando
una sola extensión perpendicular a la línea de S. aureus y lo más cerca posible (2 – 3 mm),
pero sin tocarla. Se pueden analizar varios aislados en la misma placa. Las extensiones
PA-254053.07
-2-
perpendiculares de muestras estreptocócicas deben estar a 5 – 8 mm de distancia. Se
recomienda incluir S. agalactiae ATCC 12386 junto con los aislados de muestras de pacientes
para verificar resultados satisfactorios y S. pyogenes ATCC 19615 como control negativo. El
procedimiento debe realizarse con cultivos conocidos antes de utilizarlo para identificar
aislados desconocidos.
Nota: Los estudios con la prueba de CAMP han demostrado que la reacción es más fiable en
la primera etapa de la vida útil de algunos lotes de medio preparado en placa.
Para la prueba de CAMP, incubar las placas en atmósfera aerobia a 35 ± 2 °C durante 18 – 24
h. No incubar en atmósfera anaerobia ni en incubadora de CO2, dado que así se pueden
generar resultados positivos falsos con los estreptococos del grupo A2,3,5,6.
Resultados
Después de la incubación aparecerá en la mayoría de las placas una sección donde confluye el
crecimiento. Dado que el procedimiento de extensión de la muestra es, de hecho, una técnica
de “dilución”, se depositan cada vez menos microorganismos en las áreas en que se realiza.
Por consiguiente, una o más de estas áreas presentarán colonias aisladas de los organismos
que contenga la muestra. Por otra parte, el crecimiento de cada microorganismo podrá medirse
semi-cuantitativamente basándose en el crecimiento ocurrido dentro de las áreas en que se
realiza la extensión. Se requiere efectuar una diferenciación adicional de los organismos
aislados mediante pruebas bioquímicas o serológicas. Consultar las referencias pertinentes con
relación al aspecto y las pruebas adicionales de diferenciación de los organismos aislados2,3,7,8.
Prueba de CAMP: Una reacción positiva de la prueba de CAMP se indica mediante un área
con forma de punta de flecha o triángulo con mayor hemólisis, que se crea alrededor del
extremo de la línea de la extensión estreptocócica más cercana al crecimiento de S. aureus. El
crecimiento estreptocócico debe encontrarse dentro de la zona ancha de hemólisis parcial que
rodea el crecimiento de S. aureus. Los aislados que muestran la hemólisis descrita con forma
de cabeza de flecha pueden identificarse presuntivamente como Streptococcus agalactiae
pero deben confirmarse como estreptococos de grupo B Lancefield mediante procedimientos
inmunológicos o serológicos adicionales. Una reacción negativa puede aparecer como una
zona de mayor hemólisis con forma de bala o no presentar mayor hemólisis.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood es un medio habitual para el aislamiento y
cultivo de muchos microorganismos de crecimiento aerobio, como Enterobacteriaceae,
Pseudomonas y otros bacilos gram negativos no fermentadores, estreptococos, estafilococos,
corineformes, especies de Candida, y muchos más1,4.
Dado que la sangre de carnero contiene NADasa que destruye el NAD, el medio carece de
factor V (dinucleótido de nicotinamida adenina, NAD). Por esta razón, Haemophilus influenzae
que requiere los factores X y V no crece en este medio. Neisseria gonorrhoeae no crece bien
en este medio. En su lugar, para la recuperación de esta especie se debe utilizar BD
Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX).
El medio tampoco es apropiado para el aislamiento y el crecimiento de Mycobacterium,
Legionella, Bordetella y otros microorganismos con necesidades nutricionales altamente
específicas.
El número y los tipos de especies bacterianas que se dan como agentes infecciosos es muy
alto. Por tanto, antes de utilizar sistemáticamente el medio para microorganismos de reciente
descripción o raramente aislados, el usuario debe analizar su conveniencia mediante cultivos
puros del microorganismo en cuestión.
Ciertas pruebas diagnósticas de diagnóstico pueden efectuarse directamente en este medio; no
obstante, para lograr la identificación total se recomienda efectuar pruebas bioquímicas, y (si así
se indica) pruebas inmunológicas usando cultivos puros. Consultar las referencias
correspondientes para mayor información4-7.
Para obtener los detalles acerca del uso de los discos BD Taxo en este medio, consultar las
Instrucciones de uso correspondientes.
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood no es el medio apropiado para el
aislamiento primario de organismos anaerobios exigentes.
PA-254053.07
-3-
REFERENCIAS
1. Vera, H.D., and D.A. Power. 1980. Culture media, p. 969. In: E.H. Lennette, A. Balows,
W.J. Hausler, Jr., and J.P. Truant (ed.), Manual of clinical microbiology, 3rd ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
2. Facklam, R.R., and J.A. Washington II. 1991. Streptococci and related catalase-negative
gram-positive cocci, p. 238-257. In: A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D.
Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Ruoff, K.L., R.A. Whiley, and D. Beighton.2003. Streptococcus. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
4. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
5. Bernheimer, A.W., R. Linder, and L.S. Avigad. 1979. Nature and mechanism of action of
the CAMP protein of group B streptococci. Infect. Immun. 23:838-844.
6. Darling, C.L. 1975. Standardization and evaluation of CAMP reaction for prompt,
presumptive identification of Streptococcus agalactiae (Lancefield group B) in clinical
material. J. Clin. Microbiol. 1:171-174.
7. Isenberg, H. D. (ed.). 1992. Interpretation of aerobic bacterial growth on primary culture
media, Clinical microbiology procedures handbook, vol.1, p. 1.6.1-1.6.7. American Society
for Microbiology, Washington, D.C.
8. Baron, E. J, L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic
microbiology, 9th ed., p. 415. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Trypticase Soy Agar II with 5% Sheep Blood
Nº de cat. 254053
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 254087
Medios en placa listos para usar, 120 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD
PA-254053.07
-4-