DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE FORRAJES Y CONCENTRADOS: EFECTO DE LA RACIÓN DE LOS ANIMALES DONANTES DE LÍQUIDO RUMINAL IN VITRO DIGESTIBILITY OF FORAGES AND CONCENTRATES: EFECT OF THE DIET OF DONOR ANIMALS Bochi-Brum, O., M.D. Carro*, C. Valdés, J.S. González y S.López Departamento de Producción Animal I. Universidad de León. 24007 León. España. *E-mail: [email protected] PALABRAS CLAVE ADICIONALES ADDITIONAL KEYWORDS Fermentación ruminal. Ovino. Relación forraje: concentrado. Ruminal fermentation. Sheep. Forage: concentrate ratio. RESUMEN El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la relación forraje: concentrado en la ración de los animales donantes de líquido ruminal sobre la digestibilidad in vitro (DIV) de varios alimentos. El método in vitro empleado consiste en una incubación de los alimentos con líquido ruminal durante 48 h, seguida del tratamiento del residuo con una solución neutro-detergente. Se determinó la DIV de 5 concentrados (cebada, maíz, harina de soja, harina de pescado y pulpa de remolacha) y de 15 forrajes (incluidos 11 henos cuya digestibilidad in vivo había sido determinada previamente), utilizando como inóculo líquido ruminal procedente de ovejas alimentadas con cuatro raciones de distinta relación forraje:concentrado: C20 (80:20), C40 (60:40), C60 (40:60) y C80 (20:80). Como forraje se utilizó heno de alfalfa picado y como concentrado una mezcla de harina de soja, cebada y maíz. El líquido ruminal se obtuvo 1,5 h tras la administración de la comida de la mañana y se determinó inmediatamente su pH, cuyos valores fueron 6,25, 6,05, 5,90 y 5,75 para las raciones C20, C40, C60 y C80, respectivamente. El tipo de inóculo afectó negativamente (p<0,05) a la DIV de varios forrajes, correspondiendo los valores más bajos a la ración C80. Por el contrario, el tipo de inóculo no afectó a la DIV de ninguno de los alimentos concentrados. Estos resultados se discuten en relación con posibles cambios la flora celulolítica ruminal como consecuencia de la administración de altas proporciones de concentrado en la ración. Adicionalmente, en este trabajo se estudian las relaciones entre la DIV de los 11 henos y su digestibilidad in vivo. SUMMARY The objective of this work was to study the influence of concentrate level in the diet of donor animals on the in vitro digestibility (DIV) of several feeds. A two stage in vitro procedure was performed, with a 48 h incubation in buffered Arch. Zootec. 48: 51-61. 1999. BOCHI-BRUM ET AL. rumen fluid followed by an extraction with a neutral-detergent solution. Rumen fluid from sheep fed four diets differing in their forage:concentrate ratio (C20 (80:20), C40 (60:40), C60 (40:60) and C80 (20:80)) was used as inoculum to determine the DIV of 5 concentrates (barley, corn, soyabean meal, fish meal and sugar beet pulp) and 15 forages, which included 11 hays of known in vivo digestibility. Alfalfa hay was used as forage and concentrate was based on soyabean meal, barley and corn. Rumen fluid was collected 1.5 h after morning feeding and the pH was inmediately measured. Values of pH were 6.25, 6.05, 5.90 and 5.75 for C20, C40, C60 and C80 diets, respectively. The DIV of some forages was negatively affected (p<0.05) by the level of concentrate in the diet of donor animals, corresponding the lowest values to C80 diet, whereas DIV of concentrates was not affected (p>0.05) in any case. These results are discussed in relation to the changes produced in ruminal cellulolytic flora when animals are fed diets with high proportions of concentrates. In addition, the relationships between the DIV and the in vivo digestibility of the 11 hays are studied. INTRODUCCIÓN El conocimiento de la digestibilidad de los alimentos es básico para establecer su valor nutritivo y, por tanto, para la formulación de raciones para los animales rumiantes. Sin embargo, la determinación in vivo de la digestibilidad es un proceso laborioso y costoso, y que requiere el empleo de grandes cantidades de alimento, por lo que se han propuesto distintos métodos in vitro para su estimación. El procedimiento propuesto por Tilley y Terry (Tilley and Terry, 1963) es, con ligeras modificaciones, el más ampliamente utilizado en la mayoría de los laboratorios. Sin embargo, la técnica deArchivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 52. sarrollada por Van Soest y sus colaboradores (Van Soest et al., 1966) supone una alternativa al método de Tilley y Terry, ya que permite una valoración más rápida de los alimentos sin afectar negativamente a la precisión del valor obtenido (Van Soest, 1994). Este procedimiento consiste en una incubación de los alimentos con líquido ruminal durante 48 h a 39°C, seguida del tratamiento del residuo obtenido con una solución neutro-detergente durante 1 h a 100°C, y los valores obtenidos se consideran una estimación de la digestibilidad real de los alimentos (Van Soest et al., 1966). La digestibilidad in vivo de los alimentos se ve afectada por numerosos factores, entre los que destacan el tipo de ración, el nivel y pauta de ingestión de los alimentos, la especie animal y el estado fisiológico de los animales (Schneider and Flatt, 1975). De todos los factores relacionados con el tipo de ración administrada a los animales, el efecto de la relación forraje: concentrado ha sido uno de los más estudiados. Así, en experimentos realizados con ganado ovino (Ramanzin et al., 1997), vacuno (Jaakola and Huhtanen, 1993) y caprino (Kawas et al., 1991; Ramanzin et al., 1997), se observó que a medida que aumentaba la proporción de concentrado en la ración se producía un aumento paralelo de la digestibilidad in vivo de la materia seca (MS) y de la materia orgánica (MO), así como una disminución de la digestibilidad de los componentes de la pared celular. Huhtanen y Jaakola (1993) observaron que estos efectos eran producidos fundamentalmente por cambios en la digestión en el rumen, mientras que el efecto ob- DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE ALIMENTOS Tabla I. Composición química (g/kg materia seca (MS) de las raciones. (Chemical composition (g/kg dry matter) of the diets). Ración C20 C40 C60 C80 Materia orgánica Proteína bruta Fibra neutro-detergente Fibra ácido-detergente Lignina 867 180 332 209 35 878 176 287 171 27 888 172 241 133 20 899 168 195 95 13 dad de los microorganismos ruminales y que, consecuentemente, pueden afectar a los valores de la DIV de los alimentos (Weiss, 1994). El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la inclusión de distintas proporciones de concentrado en la ración de los animales empleados como donantes de líquido ruminal sobre la DIV de varios forrajes y alimentos concentrados. MATERIAL Y MÉTODOS servado en los tramos posteriores del tracto digestivo era muy pequeño. En relación con este aspecto, Alvir y González (1992) y Giráldez et al. (1994), utilizando la técnica de las bolsas de nylon, observaron que los ritmos de degradación ruminal de diversos alimentos eran más lentos cuando los animales eran alimentados con raciones que incluían concentrado que cuando recibían raciones constituidas exclusivamente por forraje. La proporción de concentrado en la ración afecta a la digestión ruminal a través de diversos mecanismos, entre los que destacan las modificaciones que produce en el crecimiento y/o actividad de los microorganismos ruminales (Mould, 1988). Debido a que la población microbiana ruminal se ve afectada por numerosos factores, la procedencia del inóculo ruminal se considera la mayor fuente de variación en la determinación de la digestibilidad in vitro (DIV; Marten and Barnes, 1980). En este sentido, la ración ingerida por los animales empleados como donantes ha sido señalada como uno de los principales factores que afectan al número y activi- Para la realización de este estudio se dispuso de ocho ovejas adultas de raza Merina provistas de una cánula ruminal (peso vivo inicial 53,8 ± 4,08 kg). Los animales se dividieron en cuatro grupos y a cada uno de ellos les fue asignado uno de los cuatro tratamientos experimentales. Los tratamientos experimentales consistieron en cuatro raciones, cuyas relaciones forraje: concentrado (expresadas en materia fresca (MF)) fueron 80:20 (C20), 60:40 (C40), 40:60 (C60) y 20:80 (C80). Como forraje se utilizó heno de alfalfa picado y como concentrado una mezcla de maíz aplastado, cebada aplastada y harina de soja en proporciones 44:39:17 (en MF). La composición química de cada una de las raciones se presenta en la tabla I. Todos los componentes de las raciones fueron mezclados en las proporciones anteriormente descritas para ser administrados a los animales de forma conjunta. Cada animal recibió 1 kg de materia seca (MS) de la ración correspondiente, administrado en dos porciones iguales a las 9:00 y 21:00 horas. El experimento se realizó en dos Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 53. BOCHI-BRUM ET AL. Tabla II. Composición química (g/kg materia seca (MS) de los substratos empleados en las incubaciones in vitro y digestibilidad in vivo de la materia seca (DMS; p.100) de los henos. (Chemical composition (g/kg dry matter(DM)) of substrates incubated in vitro and DM in vivo digestibility (DMS; percent) of the hays). Materia orgánica Henos Alfalfa I Alfalfa II Prado permanente I Veza-cereal Trébol rojo Prado permanente II Gramíneas-leguminosas Gramíneas Prado permanente III Prado permanente IV Prado permanente V Otros forrajes Erica arborea Genista florida Paja de cebada Nardus stricta Concentrados Harina de pescado Maíz Harina de soja Cebada Pulpa de remolacha Proteína bruta Fibra neutrodetergente Fibra ácidodetergente Lignina DMS 926 898 905 929 938 907 907 922 930 919 936 207 169 126 97 113 105 129 106 69 78 70 428 489 553 563 566 579 581 618 664 680 696 313 357 315 351 419 331 375 313 371 380 401 80 85 63 84 117 60 88 35 65 60 86 66,8 60,4 65,3 61,6 58,2 63,2 62,6 67,8 53,1 53,0 50,3 980 966 929 971 49 105 54 51 616 738 738 856 494 416 387 414 150 90 81 72 - 841 982 923 966 967 753 98 467 114 116 131 138 154 460 16 70 40 237 7 6 6 40 - periodos consecutivos de 24 días de duración cada uno, utilizando un diseño cruzado para obtener un total de cuatro animales por tratamiento. En cada uno de los dos períodos, transcurridos 21 días de adaptación a la dieta, se recogió líquido ruminal de cada animal 1,5 horas después de la comida de la mañana. El líquido ruminal se filtró a través de cuatro capas de gasa, se determinó inmediatamente su pH y Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 54. se procedió a la mezcla (a partes iguales) del líquido ruminal procedente de los dos animales que recibían la misma ración. Cada una de las cuatro mezclas de líquido ruminal se utilizó como inóculo para determinar la DIV de 20 alimentos, la mayoría de ellos utilizados comúnmente en la alimentación de los animales rumiantes. Los alimentos fueron seleccionados para cubrir un amplio rango de composi- DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE ALIMENTOS ción química, e incluyeron 11 henos cuya digestibilidad in vivo había sido determinada previamente (Carro et al., 1994). La composición química de los alimentos incubados, así como la digestibilidad in vivo de los henos, figuran en la tabla II. Todas las muestras de alimentos se molieron en un molino tipo Culatti empleando una malla de 1 mm antes de ser incubadas. Para estimar la DIV de los alimentos se utilizó la técnica descrita por Goering y Van Soest (1970), siguiendo la modificación metodológica propuesta por Ankom Tecnology Corporation. Las muestras (250 mg) se incubaron en el interior de bolsitas de material sintético poroso, introducidas en recipientes de vidrio de 4 l de capacidad en los que se añadieron 2 l de una mezcla de líquido ruminal y del medio de cultivo (1:4 v/v) descrito por Goering y Van Soest (1970). La preparación del medio de cultivo y su mezcla con el líquido ruminal se realizaron en condiciones anaerobias (gaseado continuo con CO2) y manteniendo la temperatura constante a 39°C. El incubador utilizado (Daisy II; Ankom Tecnology Corporation) disponía de cuatro recipientes, por lo que en cada incubación se utilizó uno de ellos para cada tipo de inóculo. En cada recipiente se introdujo una bolsa de cada uno de los alimentos (20 en total), dos bolsas vacías (blanco) y dos bolsas con una paja de cebada de DIV conocida utilizada rutinariamente como estándar en nuestro laboratorio. Una vez cerrados los recipientes se introdujeron en el incubador durante 48 h, bajo agitación continua y a una temperatura constante de 39°C. Transcurri- do este tiempo se extrajeron las bolsitas de los recipientes y se sometieron a la acción de una solución neutro-detergente durante 1 h a 100°C. Esta segunda fase se llevó a cabo empleando el analizador de fibra Ankom 220 (Ankom Tecnology Corporation). Posteriormente, las bolsas se sometieron a tres lavados sucesivos con agua destilada a 100°C y se secaron a 60°C durante 48 h para determinar la desaparición de MS. En cada período experimental se realizaron dos series de incubación separadas por un intervalo de dos días. Las determinaciones de MS, cenizas y nitrógeno (N) se realizaron siguiendo las normas de la A.O.A.C. (1990). El contenido en fibra neutrodetergente (FND), fibra ácido-detergente (FAD) y lignina de los alimentos se determinó según la metodología descrita por Goering y Van Soest (1970). Dado que el período experimental no ejerció un efecto estadísticamente significativo (p>0,05) sobre la DIV de los alimentos, y que no existieron diferencias estadísticamente significativas entre períodos en los valores de DIV de la paja de cebada utilizada como estándar, el efecto de la ración ingerida por los animales donantes de líquido ruminal se estudió para cada alimento mediante análisis de varianza simple (Steel and Torrie, 1980). Las relaciones entre la digestibilidad in vivo y la DIV de los 11 henos se estudiaron mediante análisis de correlación (Steel and Torrie, 1980). Todos los análisis estadísticos se llevaron a cabo utilizando los procedimientos ANOVA y CORR del paquete estadístico de software S.A.S. (1997). Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 55. BOCHI-BRUM ET AL. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los valores de digestibilidad in vitro obtenidos mediante el método empleado en este trabajo se pueden interpretar como estimaciones de la digestibilidad real de los alimentos (Van Soest, 1994). Así, aunque el residuo resultante de la incubación en líquido ruminal durante 48 h es una mezcla de alimento no digerido y de microorganismos ruminales, el tratamiento de este residuo con una solución neutro-detergente solubiliza los microorganismos ruminales y los posibles restos del contenido celular, de tal forma que el residuo final obtenido está constituido mayoritariamente por FND indigestible por los microorganismos ruminales. Ya que el contenido celular de los alimentos es completamente digestible (Van Soest, 1994), el contenido en pared celular de los alimentos y la amplitud de la degradación ruminal de ésta, condicionarán el valor de la DIV de los alimentos. Por ello, cabría esperar que el efecto de la actividad microbiana del inóculo sobre la DIV de los alimentos fuera más acusado en alimentos con un alto contenido en pared celular (forrajes) que en aquellos otros que presentan un menor contenido (concentrados). En efecto, los valores de DIV de los concentrados fueron más elevados que los de los forrajes, y no se vieron afectados significativamente (p>0,05) por el tipo de inóculo ruminal empleado (tabla III). Por el contrario, la ración de los animales donantes de líquido ruminal sí afectó a la DIV de algunos de los forrajes estudiados (tabla III). Los valores obtenidos utiliArchivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 56. zando como inóculo el líquido ruminal procedente de los animales que recibieron la ración C80 fueron numéricamente inferiores a los correspondientes al resto de los inóculos en la mayoría de los forrajes, aunque las diferencias sólo alcanzaron el nivel de significación estadística (p<0,05) en algunos de ellos. De hecho, cuando los resultados correspondientes a los 11 henos se analizaron de forma conjunta, el inóculo correspondiente a la ración C80 produjo un valor significativamente (p<0,05) inferior (valor medio 69,5 p.100) a los presentados por el resto de las raciones (72,6, 73,3 y 73,6 para las raciones C20, C40 y C60, respectivamente). Numerosos autores han señalado que la inclusión de suplementos amiláceos en la dieta reduce el pH del líquido ruminal y puede llegar a reducir la actividad de la flora celulolítica (Mould, 1988; Archimède et al., 1996). La actividad de la flora celulolítica disminuye considerablemente cuando los valores de pH se encuentran en la zona comprendida entre 6,3 y 6,0, y sufre una reducción drástica al alcanzar valores inferiores a 6,0 (Stewart, 1977). Nuestros resultados muestran una influencia negativa de la proporción de concentrado en la ración sobre el pH del líquido ruminal (tabla III), aunque el valor de este parámetro sólo alcanzó un valor inferior a 6,0 en los animales alimentados con la dietas C60 y C80. Sin embargo, durante las incubaciones in vitro el líquido ruminal se diluye en una disolución amortiguadora que permite mantener el pH en valores próximos a la neutralidad durante el transcurso de la incubación. En este experimento no se determinó el pH del DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE ALIMENTOS medio de incubación tras las 48 horas de incubación, pero en otras pruebas realizadas en nuestro laboratorio bajo condiciones similares el pH final fue siempre superior a 6,5. Por ello, no cabe atribuir la reducción observada en la DIV de los forrajes para la ración C80 a un bajo pH del medio de incubación. Simultáneamente a la realización de este experimento se hicieron otras determinaciones, que incluyeron la medida del pH ruminal en cada uno de los animales cada 2 h durante un perío- Tabla III. Efecto de la proporción de concentrado en la ración sobre el pH del inóculo ruminal y sobre la digestibilidad in vitro (p.100) de los substratos incubados. (Effect of proportion of concentrate in the diet on the pH of the ruminal inoculum and on the in vitro digestibility (percent) of incubated substrates). Ración pH Heno Alfalfa I Alfalfa II Prado permanente I Veza-cereal Trébol rojo Prado permanente II Gramíneas-leguminosas Gramíneas Prado permanente III Prado permanente IV Prado permanente V Otros forrajes Erica arborea Genista florida Paja de cebada Nardus stricta Concentrados Harina de pescado Maíz Harina de soja Cebada Pulpa de remolacha C20 C40 C60 C80 e.e.d.1 6,25 a 6,05 ab 5,90bc 5,75c 0,058 79,1b 73,8ab 80,7 a 74,2 a 69,2 71,3 76,3ab 84,6ab 66,1 b 60,4 62,3ab 79,3 b 74,2 a 78,9 a 74,5 a 70,2 76,2 77,3 a 85,6ab 68,7 a 57,9 63,4ab 80,4 a 74,7 a 77,3 a 75,5 a 70,3 74,5 77,9 a 86,0 a 67,9ab 60,2 65,1 a 79,0 b 72,1 b 70,7 b 72,5 b 69,1 69,5 74,9 b 82,5 b 62,5 c 56,3 55,4 b 0,29 0,60 1,69 0,46 0,78 2,80 0,64 1,33 0,70 1,92 1,62 49,8 55,4 70,4 49,0 50,2 56,8 72,8 52,2 51,4 57,6 71,1 52,0 50,1 52,5 68,8 45,7 0,91 2,06 1,84 2,56 97,8 98,5 97,3 91,5 92,5 97,0 98,3 97,1 91,8 92,4 95,2 98,7 97,0 92,2 92,6 94,1 97,4 96,3 89,9 92,4 2,16 0,78 0,37 2,03 0,67 1 e.e.d.: error estándar de la diferencia Dentro de la misma fila, la diferencia entre valores con distinto superíndice es estadísticamente significativa (p<0,05). a,b,c Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 57. BOCHI-BRUM ET AL. Tabla IV. Parámetros, coeficientes de determinación, nivel de significación y desviación estándar residual (DSR) de las ecuaciones de regresión obtenidas entre las digestibilidades in vivo e in vitro (DIV) de los henos. (Parameters, regression coefficients, levels of significance and residual standard deviation (RSD) of the regression equations between in vivo and in vitro (DIV) digestibilities of the hays). Variable X (DIV) DIVC20 DIVC40 DIVC60 DIVC80 R2 Ecuación de regresión 6,97 8,70 4,74 15,29 + + + + 0,734 0,703 0,753 0,646 (0,0830) (0,0919) (0,0977) (0,0822) DIVC20 DIVC40 DIVC60 DIVC80 0,897*** 0,867*** 0,869*** 0,873*** DSR 1,999 2,272 2,255 2,545 ***p<0,001 do de 24 h (Carro et al., 1998). A partir de los valores obtenidos se calculó el período de tiempo (h/día) durante el cual el pH permaneció por debajo de los valores críticos de 6,3 y 6,0 en los animales que recibían cada una de las raciones, considerando para ello una evolución lineal del pH entre los tiempos de muestreo. El pH permaneció por debajo de 6,3 durante períodos más largos (p<0,05) en los animales que recibieron la ración C80 (22,8 h) que en los que recibieron el resto de las raciones (16,4, 9,7 y 8,0 h para las raciones C60, C40 y C20, respectivamente), y se obtuvieron resultados similares cuando se consideraron los períodos durante los cuales el pH permaneció por debajo de 6,0 (14,6, 8,0, 4,2 y 1,7 h para las raciones C80, C60, C40 y C20, respectivamente). Asimismo, la desaparición in situ de heno de alfalfa y de paja de cebada incubadas en el rumen de los animales durante 48 horas fue inferior (p<0,05) en los animales que recibieron la ración C80 que en los que recibieron las otras tres Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 58. raciones (Carro et al., 1998). Estos resultados indican que en los animales que ingirieron la ración C80 se produjo una reducción en la cantidad y/o actividad de la flora celulolítica del rumen, lo que previsiblemente se tradujo en un menor número de bacterias en el inóculo ruminal procedente de estos animales y, como consecuencia de ello, en valores inferiores de DIV. Por otra parte, Mould y Ørskov (1983) observaron que en animales en los que el pH ruminal alcanzaba valores muy bajos como consecuencia del consumo de alimentos concentrados, la recuperación de valores óptimos de pH no logró incrementar ni la flora celulolítica ni la degradación ruminal del alimento ingerido. De acuerdo con estas observaciones, en las incubaciones in vitro no se produciría una recuperación de la flora celulolítica a pesar del restablecimiento de un pH próximo a la neutralidad tras el mezclado del líquido ruminal con el medio de cultivo. De acuerdo con lo expuesto hasta DIGESTIBILIDAD IN VITRO DE ALIMENTOS el momento, el efecto de la proporción de concentrado en la ración de los animales donantes de líquido ruminal sobre la DIV no se observaría en el caso de los alimentos concentrados, ya que la flora amilolítica y proteolítica que produce su digestión ruminal no se ve afectada por los descensos de pH observados en nuestro estudio. En cuanto a los forrajes, cabría esperar que dicho efecto fuera más acusado en aquellos que presentasen un mayor contenido en pared celular. Sin embargo, la DIV de E. arborea, G. florida, N. stricta y de la paja de cebada no se vio afectada (p>0,05) por el tipo de inóculo, a pesar del alto contenido en pared celular de estos substratos (entre 616 y 856 g/kg MS). Una posible explicación a estos resultados es que la digestibilidad de estos substratos esté limitada por alguna característica inherente a los mismos. Así, la presencia de compuestos secundarios, tales como taninos, compuestos fenólicos, etc., puede limitar la acción de los microorganismos celulolíticos, incluso cuando el número y actividad de los mismos no se ve limitado (Silanikove et al., 1994). Por otra parte, la falta de significación estadística del efecto depresor del aumento de concentrado en la ración sobre la DIV de algunos forrajes puede también ser debida a la amplia variabilidad que muestran los datos experimentales, puesta de manifiesto por los elevados valores del error estándar de la diferencia (p.e. prado permanente II, G. florida y N. stricta). En la tabla IV figuran las ecuaciones de regresión obtenidas entre la digestibilidad in vivo de la MS y la DIV obtenida para cada una de las raciones en los 11 henos incubados. Como puede observarse, los coeficientes de determinación fueron estadísticamente significativos (p<0,001) para todas las ecuaciones obtenidas. Los valores de la desviación estándar residual (DSR) oscilaron entre 1,999 y 2,218, correspondiendo el valor inferior a la ecuación obtenida para la ración C20. Estos valores son similares a los obtenidos para las mismas muestras (Carro et al., 1994) cuando se utilizaron otras técnicas in vitro, como el método clásico de Tilley y Terry (DSR= 2,377) y diferentes procedimientos (DSR = 0,933 - 2,452) que implican la incubación en soluciones enzimáticas (celulasas). La técnica de DIV utilizada en el presente trabajo es una técnica rápida y fácil, cuya validez predictora de la digestibilidad ha sido señalada para una gran variedad de forrajes (Van Soest, 1994). Los resultados obtenidos en este trabajo parecen confirmar esta afirmación. No obstante, dado el limitado número de henos utilizado y su gran heterogeneidad botánica, parece arriesgado establecer como definitiva ninguna de las ecuaciones de predicción obtenidas. Por otra parte, los resultados obtenidos indican que el valor de la DIV de forrajes determinada por el método de Goering y Van Soest (1970) puede verse afectado negativamente por una alta proporción de alimentos concentrados en la ración de los animales donantes de líquido ruminal. Este hecho podría ser atribuido al menor número de microorganismos celulolíticos en el inóculo ruminal procedente de estos animales, como consecuencia del descenso del pH ruminal ocasionado por el consumo de altas cantidades de concentrado. Archivos de zootecnia vol. 48, núm. 181, p. 59. BOCHI-BRUM ET AL. AGRADECIMIENTOS Este trabajo ha sido financiado por la C.I.C.Y.T. (Proyecto AGF94-0026) y por la Junta de Castilla y León (Proyecto LE 29/98). 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