SAN LUIS, 3 de Marzo de 2010 VISTO:

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN LUIS
RECTORADO
SAN LUIS, 3 de Marzo de 2010
VISTO:
El EXP-USL: 5256/2009, mediante el cual se solicita la protocolización
del Curso de Posgrado: “PROTEÓMICA Y SÍNTESIS DE PÉPTIDOS”; y
CONSIDERANDO:
Que el mencionado Curso se dictó en el ámbito de la Facultad de
Química, Bioquímica y Farmacia del 22 al 26 de febrero de 2010, bajo la
responsabilidad de la Dra. Fanny GUZMÁN QUIMBAYO de la Universidad Católica
de Valparaíso (Chile) y como ;Co-Responsable y Coordinadora la Dra. Sonia Esther
BARBERIS de la Universidad Nacional de San Luis, con un crédito horario total de 60
horas presenciales.
Que el Curso “Proteómica y Síntesis de Péptidos” forma parte de las
actividades planificadas en el Proyecto: “Aplicación Industrial de Enzimas Proteolíticas
de Vegetales Superiores”. Subprograma 4: Biomasa como Fuente de Productos
Químicos y Energía. CYTED.
Que el Comité Científico del Programa de Posgrado de Bioquímica y Ciencias
Biológicas considerando que el tema propuesto es de interés y novedoso; que los
responsables acreditan antecedentes en el tema y que el Curso posee parte práctica, el
Comité aconseja su aprobación.
Que el Consejo de Posgrado de la Universidad Nacional de San Luis en
su reunión del día 23 de febrero de 2010, luego de su tratamiento aprueba el dictado del
mismo como Curso de Posgrado de Perfeccionamiento.
Que corresponde su protocolización.
Por ello y en uso de sus atribuciones
EL RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN LUIS
RESUELVE:
Cpde RESOLUCIÓN Nº 88/10
nnh
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN LUIS
RECTORADO
ARTÍCULO 1º.- Protocolizar el dictado del Curso de Posgrado de Perfeccionamiento:
“PROTEÓMICA Y SÍNTESIS DE PÉPTIDOS” en el ámbito de la Facultad de
Química, Bioquímica y Farmacia del 22 al 26 de febrero de 2010, bajo la
responsabilidad de la Dra. Fanny GUZMÁN QUIMBAYO (Pasaporte: 41726091) de
la Universidad Católica de Valparaíso (Chile) y como Co-Responsable y Coordinadora
la Dra. Sonia Esther BARBERIS (DNI Nº 14.668.813) de la Universidad Nacional de
San Luis, con un crédito horario total de 60 horas presenciales.ARTÍCULO 2º.- Aprobar el programa del Curso de referencia, de acuerdo al ANEXO
de la rpesente disposición.ARTÍCULO 3º.- Comuníquese, insértese en el Libro de Resoluciones y archívese.RESOLUCIÓN Nº 88/10
nnh
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RECTORADO
ANEXO
DENOMINACIÓN DEL CURSO: “PROTEÓMICA Y SÍNTESIS DE PÉPTIDOS”
UNIDAD ACADÉMICA RESPONSABLE: Facultad de Química, Bioquímica y
Farmacia
RESPONSABLE: Dra. Fanny GUZMÁN QUIMBAYO
CO-RESPONSABLE y COORDINADORA : Dra. Sonia Esther BARBERIS
MODALIDAD DE DICTADO: Presencial.
CRÉDITO HORARIO: 60 horas.
DESTINATARIOS: Doctorandos, tesistas e investigadores cuyos trabajos estén
vinculados a los temas a tratar en el Curso.
CUPO: 10 alumnos.
CALENDARIO DE ACTIVIDADES:
FECHA DICTADO DEL CURSO: 22 al 26 de febrero de 2010.
22 de febrero de 2010: Estructura de péptidos y proteínas. Aminoácidos: propiedades
Enlace peptídico: estructura primaria. Estructura secundaria. Estructura tridimensional.
Relación estructura-funcionalidad en péptidos bioactivos. Síntesis de péptidos y
proteínas. Fundamento de síntesis química. Análisis comparativo de las diferentes
estrategias para la síntesis de péptidos y proteínas.
23 de febrero de 2010: Síntesis química de péptidos. Síntesis en solución y en fase
sólida. Estrategias de síntesis de péptidos en fase sólida: síntesis secuencial y síntesis
convergente. Soportes para síntesis en fase sólida: características y clasificación.
Esquemas de protección de grupos amino y cadenas laterales: t-Boc y Fmoc.
Espaciadores y enlazadores: clasificación y propiedades. Métodos de acopleActivadores. Remoción del soporte y de los grupos protectores.
24 de febrero de 2010: Técnicas analíticas: dicroísmo circular, resonancia magnética
nuclear, espectrometría de masas, cromatografía líquida de alta resolución.
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Aplicaciones. Síntesis de péptidos de relevancia terapéutica: T20, P41; Spf66. Otras
aplicaciones.
Parte Experimental: Definición de la secuencia del péptido a sintetizar que es un péptido
que tiene estructura alfa hélice por dicroismo y por RMN. Manejo del software para
síntesis de péptidos. Seguridad en el manejo de reactivos y materiales para la síntesis de
péptidos. Unión del primer aminoácido a resinas amino y carboxi. Determinación del
grado de sustitución de la resina. Elongación de la cadena peptídica y determinación de
fin de acople mediante test de ninhidrina (tres aminoácidos diarios). Clivaje del péptido
sintetizado. Liofilización del péptido. Caracterización del péptido sintetizado por RPHPLC y espectrometría de masas.
25 de febrero de 2010: Síntesis enzimática de péptidos. Enzimas proteolíticas:
clasificación y mecanismos catalíticos. Proteasas en la síntesis de péptidos. Síntesis bajo
control termodinámico. Síntesis bajo control cinético. Estrategias de síntesis enzimática
de péptidos. Ingeniería de medios: sistemas homogéneos, macroheterogéneos,
microheterogéneos. Ingeniería del biocatalizador. Ingeniería de los sustratos. Avances y
desafíos en la síntesis enzimática de péptidos.
26 de febrero de 2010: Evaluación. Exposiciones orales sobre distintos temas abordados
en el curso.
LUGAR DE DICTADO: Laboratorio de Bromatología. Facultad de Química,
Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis.
FECHA PREVISTA PARA ELEVAR LA NÓMINA DE ALUMNOS APROBADOS:
10 de marzo de 2010.
OBJETIVOS:
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El objetivo general de este curso es abordar los principales conceptos de la estructura de
los péptidos y proteínas, así como también describir las estrategias de síntesis de
péptidos por vía química y enzimática, y comparar las ventajas y desventajas de ambas
tecnologías.
Específicamente, se van a:
-
Describir las diferentes estrategias de síntesis química de péptidos en fase sólida:
síntesis secuencial y síntesis convergente.
-
Desarrollar las estrategias de síntesis enzimática de péptidos.
-
Revisar la ingeniería de medios, del biocatalizador y de los sustratos en las
reacciones de síntesis de péptidos en medios no acuosos.
-
Revisar las técnicas analíticas más relevantes para la separación e identificación de
las secuencias obtenidas.
-
Sintetizar péptidos de relevancia terapéutica.
CONTENIDOS MÍNIMOS: están descriptos en el programa.
PROGRAMA:
Parte Teórica:
1. Estructura de péptidos y proteínas
1.1. Aminoácidos: propiedades
1.2. Enlace peptídico: estructura primaria
1.3. Estructura secundaria
1.4. Estructura tridimensional
1.5. Relación estructura-funcionalidad en péptidos bioactivos
2. Síntesis de péptidos y proteínas
2.2 Fundamento de síntesis química
2.3 Análisis comparativo de las diferentes estrategias para la síntesis de péptidos
y proteínas.
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3. Síntesis química de péptidos
3.1. Síntesis en solución y en fase sólida
3.2. Estrategias de síntesis de péptidos en fase sólida: síntesis secuencial y
síntesis convergente
3.3. Soportes para síntesis en fase sólida: características y clasificación
3.4. Esquemas de protección de grupos amino y cadenas laterales: t-Boc y Fmoc
3.5. Espaciadores y enlazadores: clasificación y propiedades
3.6. Métodos de acople-Activadores
3.7. Remoción del soporte y de los grupos protectores
3.8. Técnicas analíticas: dicroísmo circular, resonancia magnética nuclear,
espectrometría de masas, cromatografía líquida de alta resolución
4. Aplicaciones
4.1. Síntesis de péptidos de relevancia terapéutica: T20, P41; Spf66
4.2. Otras aplicaciones
5. Síntesis enzimática de péptidos.
5.1. Enzimas proteolíticas: clasificación y mecanismos catalíticos.
5.2. Proteasas en la síntesis de péptidos.
5.3. Síntesis bajo control termodinámico.
5.4. Síntesis bajo control cinético
5.5. Estrategias de síntesis enzimática de péptidos.
5.6. Ingeniería de medios: sistemas homogéneos, macroheterogéneos,
microheterogéneos.
5.7. Ingeniería del biocatalizador.
5.8. Ingeniería de los sustratos.
5.9. Avances y desafíos en la síntesis enzimática de péptidos.
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Parte Experimental:
1.
Definición de la secuencia del péptido a sintetizar que es un péptido que tiene
estructura alfa hélice por dicroismo y por RMN.
2.
Manejo del software para síntesis de péptidos.
3.
Seguridad en el manejo de reactivos y materiales para la síntesis de péptidos
4.
Unión del primer aminoácido a resinas amino y carboxi.
5.
Determinación del grado de sustitución de la resina
6.
Elongación de la cadena peptídica y determinación de fin de acople mediante
test de ninhidrina (tres aminoácidos diarios)
7.
Clivaje del péptido sintetizado.
8.
Liofilización del péptido.
9.
Caracterización del péptido sintetizado por RP-HPLC y espectrometría de
masas.
Materiales y Equipos Requeridos:

Resinas, una para amino y una para carboxi

Aminoácidos Fmoc (los que la secuencia requiera)

Solventes: DMF o DMA, DCM, IPA y NMP

Reactivo de desprotección del grupo amino: Piperidina

DIEA (Diisopropietilamina)

Reactivos de acople: DCC, TBTU, HOBT, DIEA

Reactivos de clivaje: TFA, TIS, etanoditiol, agua

Reativos de ninhidrina: KCN, ninhidrina, etanol absoluto, piridina, fenol

Jeringas con filtro de polipropileno

Un agitador reciprocante.

Un espectrofotómetro.

Un liofilizador.
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
Un cromatografo HPLC, columna C18, ACN

Servicio de espectrometría de masas

Un bloque a 100 ºC y termómetro

Micropipetas de 100 uL a 1 mL.

Material menor de plástico (ependorf de 1.5 ml y 0,5ml y tubos cónicos de 15
ml).
SISTEMA DE EVALUACIÓN: Exposiciones orales sobre distintos temas abordados
en el curso.
-
-
BIBLIOGRAFÍA:
Noya O., M.E. Patarroyo, F. Guzman and B. Alarcon de Noya. Immunodiagnosis
of Parasitic Diseases with Synthetic Peptides Current Protein and Peptide Science,
Vol. 4, No. 4, 2003Pp.299-308
- Torres MH, Salazar LM, Vanegas M, Guzman F, Rodriguez R, Silva Y, Rosas J,
Patarroyo ME. Related Articles, Links. Modified merozoite surface protein-1
peptides with short alpha helical regions are associated with inducing
protection against malaria. Eur J Biochem. 2003 Oct;270(19):3946-52.
- Albericio, Fernando. Developments in peptide and amide synthesis. Current
Opinion in Chemical Biology (2004), 8(3), 211-221.
- Bruckdorfer, Thomas; Marder, Oleg; Albericio, Fernando. From production of
peptides in milligram amounts for research to multi-tons quantities for drugs
of the future. Current Pharmaceutical Biotechnology (2004), 5(1), 29-43.
- Albericio, Fernando; Chinchilla, Rafael; Dodsworth, David J.; Najera, Carmen.
New trends in peptide coupling reagents. Organic Preparations and Procedures
International (2001), 33(3), 203-303.
Albericio, Fernando. Orthogonal protecting groups for N -amino and Cterminal carboxyl functions in solid-phase peptide synthesis.
Biopolymers
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- White, Peter D.; Chan, Weng C. Basic principles of Fmoc solid phase synthesis.
Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis (2000).
- Mayo, K. H. Recent advances in the design and construction of synthetic
peptides: for the love of basics or just for the technology of it.
Trends in
Biotechnology (2000), 18(5), 212-217.
- Barlos, Kleomenis; Gatos, Dimitrios. 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl/tbutylbased convergent protein synthesis. Biopolymers (1999), 51(4), 266-278.
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-
Paul Lloyd-Williams, Fernando Albericio, and Ernest Giralt.
Chemical
Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC, Boca Raton (FL,
USA), 1997.
ARANCEL: 100 $. Para alumnos de otras universidades.
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