Las Cepas ATCC - labcare de colombia

LAS CEPAS ATCC
Herramienta indispensable en el Control
de Calidad Interno en Microbiología.
MARIA ISABEL MONTOYA ROMERO
Especialista en Microbiología Clínica
Directora Técnica – Coordinadora de Calidad
Instituto Colombiano de Medicina Tropical
TEMAS DE INTERES
Definición y
Generalidades Cepas ATCC
Historia ATCC – MicroBiologics
Clasificación
Reconstitución y Almacenamiento
Registro y control
Usos en el control de Calidad interno
Ventajas de ingresar a un programa de
licencia derivada.
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Que son las Cepas Referencia
es un material
biológico de referencia certificado.
La colección certifica que se suministra
una determinada cepa, que es un cultivo
puro, y que se han observado las
convenientes pruebas morfológicas,
bioquímicas y moleculares
correspondientes.
Cepas Certificadas:
Adquisición de las Cepas de Referencia
Obtención directa a partir de una colección nacional e
internacional reconocida, con su respectivo Registro y
Certificado.
CEPAS NCTC: National Collection of type Cultures. Londres.
CNCM: Colection Nationale de Cultures of Microorganismes. Paris,
Francia.
ATCC: American Type Culture Collection. Rockville, EU
CCTM: Collection Nationale de Cultures de Microorganismes. Institut
Pasteur
NCYC: National Collection of Yeast Cultures. Norwik UK.
NCIBM: National Collections of industrial and Marine Bacteria.
CECT: Colección española de cultivos tipos.
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Generalidades de la ATCC
La colección que almacena la ATCC se inició en
1925, sobre una colección de bacteriología
iniciada en 1911. Es una organización en la que
participan actualmente 21 sociedades
científicas.
En la actualidad mantiene colecciones de
Bacteriología, Cultivos celulares, Plásmidos,
Ácidos nucleicos y Genotecas, Micología y
Botánica, Protistología y Virología.
Quien es
?
El primer fabricante de productos Biologicos
(microorganismos liofilizados) para el control de calidad,
con licencia aprobada por ATCC®
®
Patente de distribución ATCC desde el año 2004
35 Años en el Mercado
- Laboratorio Comercial (1971)
- Fabricante de Medios de Cultivo Preparados (1975)
- Microorganismos para el Control de Calidad (1982)
- 100% Devoción a los Productos para el Control de
Calidad Microbiológico (1996).
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PRINCIPIO DEL SISTEMA DE LIOFILIZACIÓN
Gelatina: medio transporte
Leche descremada,acido ascórbico, dextrosa y
carbón activado: Agentes Crioprotectores
(preservan pared celular, evitan deshidratación
por congelación).
Carbón Vegetal: Neutraliza sustancias toxicas
generadas por la liofilización
El Certif icado es entregado
personalmente por LABCARE a
los Usuarios Finales de
MicroBioLogics para que el
laboratorio lo presente como
soporte mientras las Cepas estén
siendo utilizadas exclusiv amente
en los procedimientos del Control
de Calidad.
El Certif icado v alida la trazabilidad
y autenticidad de las
metodologías y controles hechos
por los Usuarios Finales clínicos e
industriales ante la ATCC y
organismos de v erif icación.
Si el prov eedor de
microorganismos no puede
entregar un CERTIFICADO DE
CONFORMIDAD, estos
materiales no son auténticos
ATCC.
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CLASIFICACION CEPAS ATCC
Cepas de
Referencia.
Cepas de Reserva.
Cepas de Trabajo.
CEPAS DE REFERENCIA
A fin de demostrar la trazabilidad : las cepas de
referencia deben obtenerse directamente de una
colección con la reseña nacional o internacional de
cultivo de referencia reconocido.
"ISO 11133-1:2000", son: microorganismos definidos, por
lo menos a nivel de género y especie, catalogados ,
caracterizados y de origen conocido
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CEPAS DE REFERENCIA
Son distribuidas y presentadas comercialmente
liofilizadas; los organismos de acreditación son
los encargados de considerar válida la fuente
de procedencia de la cepa a fin de que se
cumpla con el requisito de prevenir mutaciones,
deterioro o alteración de las características
típicas de las cepas.
El número de repiques a partir de la cepa de
referencia a de ser limitado, aceptándose hasta
cuatro pases como máximo a partir de la cepa o
semilla original de referencia.
PRESENTACION
KWIK-STIK™
LYFO DISK®
KWIK-STIK™ Plus
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CEPAREO
Reconstitucion:
Las Cepas de referencia son almacenadas entre
2-8 ºC hasta su uso.
En la reconstitución y siembra de la Cepas de
referencia, se utilizan medios de cultivo de
enriquecimiento, las condiciones de incubación
y el procedimiento de almacenamiento varia
para cada tipo de microorganismo.
Boletin de informacion tecnica TIB.081
“Recommended Growth Requirements”
CEPAREO
www.microbiologics.com
Requerimientos:Hidratacion,Medios de
cultivo,Incubacion(atmosferas y Tiempo).
Las Cepas de referencia serán sometidas
a un control de calidad de pureza y
viabilidad, así se le dará registroCepas
ATCC\kwik.pdf. Cepas ATCC\lyfodisk.pdf
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CEPAS DE RESERVA
Son cepas idénticas logradas mediante un único
subcultivo de una cepa de referencia.
Son preparadas y conservadas en el laboratorio,
dentro del cual se destina un lugar para su
almacenaje, se trata de cepas potencialmente
peligrosas y cuya manipulación queda
exclusivamente restringida al personal autorizado.
Cada Vial debe estar perfectamente identificado
con el nombre de la cepa, procedencia y fecha de
congelación
CEPAS DE RESERVA
Las Cepas de Reserva una vez descongeladas
no deben volver a Congelarse.
Los métodos para la preservación y
mantenimiento de cepas de reserva son la
LIOFILIZACIÓN y la CONGELACIÓN A BAJAS
TEMPERATURAS.
Se da el uso de agentes Crioprotectores
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CEPA DE TRABAJO
Se obtienen por subcultivo de las Cepas de
Reserva
Se subcultivan en medios sólidos de
enriquecimiento apropiados para
C/microorganismo
Se debe Verificar la calidad, pureza y morfología
típica del subcultivo
Nunca subcultivarlas para sustituir a las cepas de
Reserva
Cepas de Referencia
Sub cultiv ada una sola v ez
No permitido
Cepa de Reserv a
(Liofilización, nitrógeno liquido, ultra congelación rápida etc.)
Especificar tiempo y condiciones de Almacenamiento
Mantener en las condiciones específ icas
Descongelación / Reconstitución
Subcultiv ar una sola v ez
Cepa de Trabajo
Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento
Maximo 8°Pases
USO RUTINARIO
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Cepa Ref erencia
≤ 4°Pasajes
Pase de Reconstitución
5°Pasaje
6°Pasaje
7°Pasaje
8°Pasaje
AlmacenamientoCepas
Reserv a en 6 °Pasaje
Registro y Control de Cepas ATCC
Identificación de la cepa.
Género y especie del
microorganismo
TIPO y Nº de colección.
Nº de lote.
Fecha de recepción.
Fiche de reconstitucion.
Control de calidad de la
cepa de referencia
Conforme (SI/NO).
Fecha de caducidad de la
cepa.
Personal responsable.
Control de calidad
de pureza y viabilidad:
Se realiza a diferentes
niveles del proceso
cada vez que se realiza
un replique.
El objetivo: asegurarse
que las cepas conservan
su viabilidad y sus
caracteres bioquímicos.
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HOJA DE REGISTRO CEPAREO
UTILIDAD DE LOS CULTIVOS DE REFERENCIA
ATCC EN EL QC INTERNO
1.Evaluar la calidad de los medios de cultivo.
2.Asegurar la calidad de los resultados de ensayos
de laboratorio (coloraciones y desempeño de
reactivos)
3.Validar métodos microbiológicos.(Pruebas de
Sensibilidad)
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El Control de la Calidad en la preparación y
evaluación de los Medios de Cultivo
Una esencial y buena práctica de laboratorio, necesaria
para mantener el nivel y la ejecución de cualquier
técnica microbiológica.
Es un proceso continuo que se extiende desde las
materias primas, a través del productor hasta el
producto final utilizado en el laboratorio.
Por esta razón, se le confiere una gran importancia y
está considerado como uno de los puntos críticos de
control en el análisis microbiológico, del cual depende la
seguridad de los resultados que emiten los laboratorios
de ensayo.
EVALUACIÓN DE EFICIENCIA DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso
rutinario, por eficiencia o calidad, mediante la inoculación de
microorganismos cuyo comportamiento conocemos, tanto para
reacciones positivas como negativas.
Si los medios de cultivo son suministrados por empresas fabricantes
hay que solicitar Certificado de Calidad. Es de prioritario
cumplimiento evaluar el desempeño de:
Agar Chocolate
Agar Thayer Martín
Agar Sangre
Agares suplementados con Antibioticos
Agares Cromogenicos
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PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS
DE CULTIVO
1. ASPECTO FISICO: NIVEL, VOLUMEN, SUPERFICIE, COLOR, EMPAQUE
2. CONTROL DE ESTERILIDAD: 5% DE LA PRODUCCIÓN TOTAL Y SE
INCUBA DURANTE 72 HORAS (CUARENTENA).
- Se ACEPTA lotes negativ os.
- Se descarta todo el lote preparado si hay crecimiento Microbiano.
4. CONTROL DE PH
3. CALIDAD MICROBIOLOGICA: Método ECOMETRICO
Prueba de PRODUCTIVIDAD y SELECTIVIDAD: Medios Sólidos y
Líquidos.
CEPAS DE REFERENCIA ATCC
- Cada v ez que se prepare un Lote nuev o de un Medio de Cultiv o.
- Cada v ez que ingrese un Medio de Cultiv o Nuev o al Laboratorio.
- Cada v ez que un medio de cultiv o supere su f echa de caducidad
METODO ECOMETRICO
Es una técnica simple que permite Recuperar, Comparar y
Cuantificar el crecimiento de microorganismos ATCC con
cargas de UFC definidas en diferentes medios de Cultivo
con el fin de evaluar su MANUFACTURA.
TECNICA ECOMETRICA DE MOSSEL (RADIAL)
MÉTODO ECOMETRICO MODIFICADO de MILES y MISRA
A. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA
MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS.
B. PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA
MEDIOS DE CULTIVO LIQUIDOS.
LIQUIDOS .
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PRODUCTIVIDAD
Determina el Rendimiento, Recuperación y
crecimiento de microorganismos que
habitualmente se desarrollan en un medio de
cultivo.
SELECTIVIDAD
Evalúa la supresión del crecimiento del
microorganismo, que se espera sea inhibido en el
medio.
PRUEBA DE PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD PARA
MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
METODO CUANTITATIVO:
MODELO DE MILES Y MISRA.
Para medios muy exigentes o para comparar Medios
50uL
CEPA
REFERENCIA
EN BHI 1818- 24.
ANTES
50uL
50uL
450 uL s.s
-1
-2
-3
-4
-5
-6
1’000000 a 10 U F C
Control positivo en una Agar Nutritivo: Agar chocolate
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METODO CUANTITATIVO: MILES Y MISRA
IR: RA ZON DE PRODUCTIVIDAD Y RA ZON DE SELECTIVIDAD
Incubar : 37ºC x 18 Horas
Contar el numero de colonias
presente en cada una de las
diluciones
10 uL
-6
-1
Calcular IR
-2
-5
RP: 70% a 80%
RS: 0.1% a 0%
-4
-3
IR: Nº de colonias presentes x Factor dilución
Nº de colonias Control x Factor dilución
Interpretación Metodo Ecometrico
PRODUCTIVIDAD
Crecimientos por encima de
la 5º dilución.(100 UFC)
SELECTIVIDAD
Inhibicion completa y/o
crecimiento unicamente en
la 1º dilución.(1’000.000 UFC)
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Control de calidad en determinación de
sensibilidad a antimicrobianos
Obligatoriamente se debe probar cada lote nuevo de Mueller-Hinton
y cada lote de sensidiscos.
Realizar el control cada semana.
En caso de fallas en los halos de inhibición se debe realizar diario
hasta encontrar la causa…..Agar, T°, McFarlan, Discos etc.
En caso de Galerías Automatizadas, el QC interno es de acuerdo a
la casa Comercial, pero no inferior a una vez cada mes.
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
• Discos de Antimicrobianos
• Tubos con Sln Salina estéril o caldo nutritivo
• Placas de MH, MH con sangre de cordero 5%, MH-chocolate,
• Escala de McFarland
AGAR MUELLER HINTON
pH de 7.2- 7.4
21 – 22 ml
McFarland
0.5%
DO
625 nm
Absorbancia de 0.08 – 0.1
1.5 x 10 (8) UFC
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CONTROL DE CALIDAD
ANTIBIOGRAMA
Control de difusión de antibioticos
Cepas ATCC
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Valores Referencia: diámetro de las zonas de inhibición en mm
según la OMS
Test Discos
E.coli
ATCC
25922
S. aureus
ATCC
25923
Pseudomona
aeuriginosa
ATCC 27853
Enterococcus
feacalis
ATCC 29212
Ampicilina 10 ug
15-20 mm
24-35 mm
---
---
Tetraciclina 30 ug
18-25 mm
19-27 mm
---
---
Gentamicina 10 ug
19-26 mm
19-27 mm
16-21 mm
---
Imipenem 10 ug
26-32 mm
---
20-28 mm
---
Polimixina B 300 IU
12-16 mm
7 -13 mm
---
Sulfamethoxazole 1.25 ug
T rimehoprim 23.75 ug
24 - 32
mm
24 -32
mm
---
--16 -23 mm
OT ROS..\NORMAS
NCCLS M2 A7 Doc.doc
Control de Calidad en determinación de
sensibilidad a Antimicrobianos
McFarland
0.5
Cepa
ATCC
S.S
Suspensión de Cepa
ATCC hasta 0.5
McFacland.
Agitado en VOrtex
Sembrado
homogéneo con
torunda, por
estría con
rotación por tres
veces
Colocar
sensidiscos con
dispensador o
pinzas flameadas
y frías. < 15´.
Encubar por 18 horas a 35 + 2 ºC.
En estafilococos y estreptococos por 24 horas completas.
Leer con regla y establecer que estén dentro de los rangos de la tabla de
ref erencia para cada cepa analizada.
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Nota: Las normas LSCCI/NCCLS sugieren un
control de calidad diario y semanal. De no tener
las facilidades, se sugiere un control de calidad
mensual, debiendo incrementar la frecuencia del
mismo de acuerdo a las posibilidades del
laboratorio. Pero, se debe realizar por lo menos
un control de calidad quincenal para los
siguientes antibióticos: Oxacilina, imipenen,
meropenem y beta-lactamasa.
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Control de Calidad Interno de los
Reactivos Empleados
Las Cepas Utilizadas para control deben ser SIEMPRE cepas
Referencia
Los Controles deben efectuarse con Cultivos Frescos
En general se deben usar dos Tipos de Cepa para probar cada
Reactivo o Reacción,idealmente para probar reacciones débiles y
Fuertes y variaciones en el tiempo de los reactivos.
Las Coloraciones deben siempre controlarse con controles
Positivos y Negativos, Tanto las de rutina como las especiales
Las Tinciones especiales deben controlarse en cada Tanda o
serie de trabajo, las de Rutina una vez por semana y en cada lote
nuevo de colorantes.
Control de Calidad Interno de los
Reactivos Empleados
Frecuencia de Control Reactivos – Discos y Tiras
CADA NUEVO LOTE O VIAL Y CADA DIA DE USO
Catalasa – Oxidasa – Coagulasa - Sondas de ADN
CADA NUEVO LOTE Y CADA SEMANA DE USO
Bacitracina - Optoquina - ONPG - Factores X-V-XV Betalactamasa - Indol - PYR - CAMP
CADA NUEVO LOTE Y CADA MES
Antisueros - Kits Comerciales de Identificación – Patron Mcfarland
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QUE ES EL PROGRAMA ATCC®
DE DERIVADO LICENCIADO?
Es un programa amplio
de distribución comercial
que asegura la
autenticidad de los
Materiales Biológicos de
ATCC, que son
distribuidos por
compañías elegidas por
sus credenciales de
Sistemas de Calidad,
cuidadosas auditorias,
investigación y
evaluación continua de
los productos por parte
de ATCC.
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PROPOSITO DEL ATCC® LICENSED
DERIVATIVE PROGRAM ™
Incrementar los requerimientos de Control de
Calidad de los laboratorios clínicos e
industriales.
Proporcionar los productos derivados de Cultivo
de Referencia a costos accesibles.
Crear, a través de las compañías comerciales,
las tecnologías que permiten ahorrar tiempo
bajar los costos del Control de Calidad.
Beneficiar el Usuario Final con las validaciones
de los fabricantes autorizados – el final de los
cultivos “in-house”.
TRAZABILIDAD SEGURA
El Programa asegura la trazabilidad de los
Materiales Biológicos desde su origen en ATCC, a
través de los procesos de manufactura de la
compañía, el almacenamiento físico, el manejo y
envío del producto desde el fabricante, pasando
por los canales de distribución hasta llegar al
Usuario Final.
Los acuerdos contractuales unen a todas las
partes de este proceso en una “cadena de custodia
y cadena de responsabilidad” adecuándose a
nuestro mundo actual.”
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¿QUE SIGNIFICA EL “LDP” PARA EL
LABORATORIO DEL USUARIO FINAL?
Acceso fácil y económico a las fuentes de
Materiales Biológicos de ATCC®
Autenticidad y trazabilidad a los Cultivos de
Referencia de ATCC®
Avance tecnológico en productos de Materiales
Biológicos para satisfacer las demandas del
Control de Calidad
Confianza en un Sistema Mundial de
proveedores legalmente autorizados y
licenciados de Microorganismos para Control de
Calidad
¿EN QUIENES PODEMOS CONFIAR?
En los proveedores comerciales de Materiales
Biológicos cuyos números de referencia ATCC®
estén aprobados, autorizados y licenciados.
Cualquier compañía comercial, instituto o colección
de cultivos que no esté licenciada o autorizada para
comercializar los Materiales Biológicos de ATCC®
está operando fuera de los Acuerdos de
Transferencia de Material (MTA) y del aseguramiento
de autenticidad de ATCC®
Los Usuarios Finales no tienen ninguna garantía
acerca de la validez y exactitud de datos generados
al usar productos de proveedores no licenciados
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“Sólo es posible avanzar cuando se
mira lejos. Solo cabe progresar cuando
se piensa en grande”.
José Ortega y Gasset
www.microbiologics.com
[email protected]
TEL: (4) 305 35 00 EXT 312
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