microscopía correlativa de la corteza cerebelosa de

Acta Microscopica Vol 16 No1-2,(Supp.2)2007
67
Cusco-Peru September 2007
"MICROSCOPÍA CORRELATIVA DE LA CORTEZA CEREBELOSA DE RATA
EN DESARROLLO"
Orlando Castejón, María Palmar, Haydee V. Castejón
Instituto de Investigaciones Biológicas, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia. Apartado 526.
Maracaibo-Venezuela. e-mail : [email protected]
El desarrollo de la corteza cerebelosa de diversos vertebrados ha sido descrito por medio de
métodos autorradiográficos, microscopía óptica, microscopía electrónica de transmisión
convencional (Rakic, 1973; Altman, 1982) y microscopía confocal de rayos láser (Castejón y cols,
2004). El presente estudio tiene por objeto correlacionar las características morfológicas del
desarrollo cerebelar visualizadas mediante microscopía óptica (MO) con las imágenes
tridimensionales obtenidas con microscopía electrónica de barrido (MEB) y con microscopía
confocal de rayos láser (MCRL). Para ello se colectaron muestras de corteza cerebelosa de ratas
albinas de 1 (P1) a 21 (P21) días de edad postnatal, las cuales fueron procesadas para MO y MEB.
Para MO, las muestras se fijaron en formaldehído y se incluyeron en parafina; las secciones se
tiñeron con azul alcián pH 3,5. Para MEB, las muestras fueron fijadas en glutaraldehido al 3%,
deshidratadas en etanol, congeladas en nitrógeno líquido y posteriormente fracturadas. Los
fragmentos se desecaron por el método de secado de punto crítico y se cubrieron con oro, para ser
observados con un MEB. Para MCRL las muestras se incubaron con anticuerpos específicos para
sinapsina, proteínas postsinápticas, receptores de glutamato y kinasas de proteínas.
En la etapa temprana del desarrollo, se examinó P1 mediante MO y se determinó la existencia de
una zona proliferativa o capa granulosa externa (CGE) bien desarrollada, formada por 3 a 5 hileras
de células granulosas inmaduras, y la presencia de células granulosas migratorias para formar una
incipiente capa granulosa interna (CGI). Las células precursoras de Purkinje estaban dispersas y
no alineadas en la parte interna de la corteza cerebelosa. Las inmaduras células nerviosas
aparecían separadas por grandes espacios extracelulares. Con MEB, en P1 se observó la
superficie externa de las células nerviosas formando la zona proliferativa; las células granulosas
premigratorias aparecen separadas por grandes espacios extracelulares y exhiben arborización
dendrítica. En P3, se observó mediante MO la estructura cuádruple de la corteza cerebelosa en
desarrollo. La capa molecular (CM) neoformada, de 16μ de grosor, mostró células migratorias y las
células de Purkinje estaban distribuidas en dos filas. Mediante MEB se observaron células de
Purkinje fracturadas y células granulosas a nivel de la CGI (Fig. 1). Se distinguió la formación de
glomérulos cerebelosos y un plexo de finas fibras ramificadas rodeando las células granulosas,
evidenciando la formación temprana de circuitos nerviosos y de sinapsis. En P8 y P10, mediante
MO y MEB, se distinguieron células estrelladas, células de cesta, células de Lugaro y glía de
Bergmann (Fig. 2). En P14, con MO se observaron una marcada reducción de la CGE, un
acrecentamiento de la capa molecular (133μ de grosor), la típica morfología madura de la célula de
Purkinje y de Golgi, además de un aumento en el espesor de la CGI (110μ de grosor). Mediante
MEB, se distinguieron los manojos de fibras paralelas en la CM, en la vecindad de células
estrelladas estableciendo contactos axospinodendríticos, los cuales con la MCRL expresaron
inmunopositividad para sinapsina, proteínas postsinapticas,receptores de glutamato y kinasas de
proteínas (Fig. 3). Las células de Purkinje mostraron los nidos pericelulares formados por las
colaterales axónicas de las células de cesta. La glía de Bergmann se observó rodeando a los
cuerpos de las células de Purkinje. En P21, la corteza cerebelosa mostró, mediante MO y MEB, su
característica estructura en tres capas, y ausencia de CGE. Se caracterizaron las fibras aferentes
musgosas y trepadoras entrando a la capa granulosa. Las fibras musgosas fueron identificadas por
la formación característica de rosetas a nivel de los terminales sinápticos (Fig. 4). Las fibras
trepadoras fueron caracterizadas por la formación de colaterales muy finas, con una distribución
tipo crossing-over. Los datos obtenidos por ambas técnicas microscópicas permiten profundizar en
el conocimiento de las estructuras corticocerebelosas durante su desarrollo.
Trabajo de investigación subvencionado por CONDES-LUZ.
Rakic P, J. Comp. Neurol. 147: 523-546 (1973)
Altman J, Exp. Brain Res. 6: 8-45 (1982)
Castejón OJ y cols, Development. Brain Res. 61: 3-10 (2004)
CGE
CGE
CM
CM
CP
CGI
CP
CGI
1
Fig. 1. Micrografía electrónica de barrido de corteza
cerebelosa de rata. 3º día postnatal. Se distinguen la
capa granulosa externa (CGE), la transitoria capa
molecular (CM), células de Purkinje fracturadas y
células granulosas (flecha) de la capa granulosa
interna (CGI). Barra = 4μ
3
Fig. 3. Corteza cerebelosa de rata observada con
Microscopía Confocal de Rayos Láser, mostrando los
cuerpos de células de Purkinje (PL) y su arborización
dendrítica con una fuerte inmunoreactividad. Se
distinguen células en cesta (BC) en la capa molecular
(ML).
2
Fig. 2 Microfotografía de corteza cerebelosa de
rata. 8º día postnatal. Tinción azul alcián 0,1 M.
La creciente capa molecular (CM) se observa
subyacente a la capa granulosa externa (CGE).
Las células de Purkinje (CP) están distribuidas en
una hilera y la capa granulosa interna (CGI) está
bien desarrollada. X350
4
Fig. 4. Micrografía electrónica de barrido de
corteza cerebelosa de rata. 21º día postnatal. Se
distinguen fibras musgosas con formación de
rosetas (flechas) a nivel de terminales sinápticos.
Barra = 4μ