ESTRATEGIA DE MANEJO DE ACACIA NEGRA (GLEDITSIA TRIACANTHOS) EN LA CUENCA DEL RÍO LUJÁN EVALUACIÓN ECOTOXICOLÓGICA DEL HERBICIDA TOGAR BT Di Marzio W, Sáenz M, Alberdi J, Fortunato N, Tangorra M, Cappello V, Tortorelli M, Ambrini G RESUMEN La acacia negra (Gleditsia triacanthos), originaria de América del Norte, se ha vuelto invasiva en muchas regiones. Su impacto sobre la biodiversidad se verifica al reemplazar por competencia la vegetación nativa y reducir la mayoría de los hábitats de la fauna nativa. Forma matas densas a lo largo de los márgenes de cuerpos de agua, impide el acceso del ganado a los mismos y contribuye a acentuar los procesos de obstaculización de arroyos y ríos. Como parte de una estrategia para su manejo en la cuenca del río Luján (Buenos Aires) se propone el control químico mediante la aplicación del herbicida Togar BT (DowAgroSciences) el cual es una mezcla de dos principios activos: Picloram y Triclopyr. En este trabajo se presentan datos finales de la ecotoxicidad del herbicida en estudios de laboratorio y en situaciones de campo post-aplicación. Se trabajó con baterías de especies acuáticas y terrestres. El herbicida fue altamente ecotóxico para todas las especies ensayadas, siendo las especies acuáticas más sensibles. La toxicidad podría estar relacionada a la formulación cuando esta se compara con la toxicidad individual de cada uno de los principios activos. Se concluye que la aplicación del Togar BT presenta un riesgo real para ambientes acuáticos, posibilidades de contaminación de las napas de agua y toxicidad para los organismos de suelo. Palabras clave: Togar BT, Picloram, Triclocpyr, Riesgo Ambiental, organismos acuáticos, organismos terrestres INTRODUCCION Uno de los problemas que se observa a lo largo de toda la cuenca del río Luján es el avance de la especie arbórea Acacia Negra Gleditsia triacanthos (Gleditsia triacanthos L. Familia: Leguminosa (Subfam.Caesalpinioidea), nombre vulgar: acacia negra, acacia de tres espinas, corona de cristo) sobre las márgenes de dicho río, su valle de inundación y los principales afluentes. En la actualidad distintos partidos de la provincia de Buenos Aires utilizan el control químico de esta especie en zonas abiertas, accesos a campos alambrados, mediante el único arbusticida registrado herbicida, TOGAR BT, formulado por DowAgroSciences Argentina S.A.. Es aplicado generalmente por técnicos de sociedades rurales, diluido en agua o gas-oil, sobre la base de los arbustos previamente cortados con motosierra (ver fotos). 1 Sin embargo, el escenario de control químico de la acacia negra en el margen del río Luján plantea una serie de interrogantes sobre la base de evitar efectos sobre el ambiente tanto en lo que respecta a calidad de agua y suelo como al efecto sobre especies no-blanco considerando animales y plantas. Estos interrogantes son: se puede realizar aplicación aérea ? puede aplicarse utilizando como diluyente gas-oil ? es viable la aplicación local ? y finalmente es posible su aplicación ? En las siguientes fotos puede apreciarse el ambiente en cuestión. El herbicida TOGAR BT es una mezcla de dos herbicidas sistémicos tipo auxinas: Triclopir y Picloran. La composición del formulado más utilizado se indica a continuación: Principio activo g/100 mL Ester Isooctílico del ácido picloram 4-Amino- 3,5,6-tricloropicolínico Equivalente ácido picloram Ester Butoxietílico del ácido triclopyr 3,5,6-tricloro-2-piridilinoxiacético Equivalente ácido triclopyr Emulsionantes y solventes 4.4 3 8.3 6 csp De acuerdo con US EPA Re-Registration Eligibility Decision (RED) 1995, acerca de los principios activos Picloram y Triclopyr, se remarca que su fototoxicidad sobre plantas no-blanco es muy elevada, que son compuestos persistentes en el ambiente, que potencialmente pueden contaminar el agua subterránea. Por otro lado la ecotoxicidad sobre organismos acuáticos es relativamente baja y en cuanto a su aplicación recomiendan la aplicación local a la aérea. Las propiedades físico-químicas de interés en la evaluación ecotoxicológica de los dos principios activos se describen a continuación: 2 Log Kow BCF Biodegradación Log Koc Meses S H2O mg/L 19367 1.26 H Atm*m3/mol 1.29*10-12 Picloram 1.36 0.5 Triclopyr 2.53 0.5 Meses 8363 1.69 5.14*10-9 Estos descriptores moleculares nos informan acerca del modo de compartimentalización de las sustancias una vez liberadas al ambiente. Las conclusiones básicas que podemos realizar sobre estos dos herbicidas es que son muy poco volátiles y bioconcentrables, tienen baja capacidad de adsorción en el material particulado. Por el contrario, debido a su relativamente alta solubilidad en agua, sobre todo del picloram, es muy posible que estén presentes, post-aplicación, en la fase acuosa, pudiendo contaminar el agua subterránea. Debido a esto es importante determinar si existirá riesgo ambiental sobre especies no blanco tanto terrestres como acuáticas. Así necesitamos de la comparación de la concentración tóxica máxima aceptable, por ejemplo HC5 ver más abajo, y la concentración ambiental esperada (CAE). ESTUDIO DE RIESGO EN AMBIENTE ACUATICO Con este fin, se realizó un estudio para determinar el posible impacto ecotoxicológico sobre especies acuáticas y terrestres se realizó un estudio. Se llevaron a cabo los siguientes ensayos agudos con organismos acuáticos: Scenedesmus quadricauda, Pseudokirchneriella subcapitata, Lemna gibba, Azolla filiculoides, Egeria densa, Daphnia magna, Daphnia spinulata, Hyalella curvispina, Phalloceros caudimaculatus, Bryconamericus iheringii y Cnesterodon decemmaculatus. Y crónicos con Daphnia magna, Cnesterodon decemmaculatus y Phalloceros caudimaculatus. En la siguiente figura se representa la distribución acumulada de los índices de ecotoxicidad aguda y crónica obtenidos con las especies citadas arriba. Puede observarse que el 75 % de las especies serán afectadas con valores de Togar BT cercanos al 0.01 %. Percentil 75 % % E s p e c ie s a fe c ta d a s 100 75 50 25 0 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 CL(E)50 % Togar BT 3 Un paso posterior fue la determinación de la concentración ambiental de efecto o concentración de riesgo HC5 del inglés Hazardous concentration. Para tal fin se utilizaron los modelos propuestos por Wagner y Lokke (1991) y Aldenberg y Slob (1993). Los que consideran a los índices de ecotoxicidad (IE) en una comunidad teórica distribuidos de manera normal o logística, respectivamente. El número de especies utilizado fue igual a 11, los factores de extrapolación fueron calculados según: FE = exp(sm*k) Donde s representa el desvío estándar de la distribución elegida, m número de especies y k factor límite de tolerancia de un lado de las distribuciones. Así se obtuvieron los siguientes datos: Togar HC5% Wagner & Lokke Aldenberg & Slob % 7.7388 x 10-5 6.3971 x 10-5 Picloran 3 g/100 mL mg/L 0.0232 0.0192 Triclopyr 6 g/100mL mg/L 0.0464 0.0384 Los escenarios de exposición y riesgo posibles se simularon a partir de la determinación de la concentración ambiental esperada o CAE. Para este caso se determinó el CAE según el método generalizado propuesto por US EPA en Reregistration Eligibility Decision (RED) y por otro lado, con estimaciones directas según datos de dosis de aplicación, densidad de plantas y tipo de suelo de la región estudiada, entre otros. El CAE fue estimado tomando como base los datos de uno de los principios activos, Picloram, por ser potencialmente más tóxico y más soluble en agua. En el caso del método US EPA la determinación del CAE considerando aplicación directa del plaguicida, propone un escenario en el cual 1/10 de la masa aplicada (10 kg) en 4 ha, en cercanías de un cuerpo de agua de 8000 m3 podría arrojar una concentración de Picloran igual a 130 µg/L equivalente a una: CAE de 2.9 10-4 % de TOGAR BT Por otro lado, el CAE estimado con datos reales en el área bajo estudio y tomando en cuenta el tipo de suelo como Mollisol suborden Argiudol subgrupo Argiudol típico. Arcilla-Limo-Arena: 17, 57, 25 %, una densidad de acacias igual a 1.77 ind/m2 y dosis de aplicación de 300 mL TOGAR BT / individuo. Nos permitió estimar el CAE para el ambiente acuático mediante: CAE = V . f -1 . D . p . d-1 . 10-3 = 0.00885 % V: volumen aplicado por árbol f: factor de aplicación D: densidad de plantas p: factor de elusión ƒ(WHC) d: dilución del TOGAR BT Considerando despreciables los valores de Koc, se supone que predominan formas aniónicas de Picloram al 99% en fase soluble y WHC: water holding capacity o capacidad de retención del agua (mL/100g) ≅ 50. En la siguiente tabla se presentan los valores de CE y CAE estimados según US EPA y con datos propios de este estudio. 4 Primero se realiza la comparación CAE/CE según el CAE de US EPA y posteriormente el CAE calculado en nuestro estudio. Si CAE/CE es > 1 existe riesgo ambiental. USEPA 1995 (*) Luján A&S (**) Luján W&L (**) CE (%) 0.029 0.000064 0.000077 CAE (%) 0.00029 0.00029 0.00029 CAE/CE 0.01 4.5 3.8 USEPA 1995 (*) Luján A&S (**) Luján W&L (**) 0.029 0.000064 0.000077 0.00885 0.00885 0.00885 0.3 138 110 (*) CE calculado con el dato de la especie más sensible sobre 3; CE: valor de efecto, CAE: valor ambiental (**) datos de este estudio Vemos que considerando un valor de CAE calculado con datos reales y no a partir de un modelo generalizado existirá riesgo ambiental tanto considerando los valores de CE provenientes de la US EPA o de nuestro estudio. ESTUDIO EN RIESGO EN AMBIENTE TERRESTRE De la misma forma que para el caso del ambiente acuático para poder estimar el valor del CE se realizaron ensayos para evaluar la ecotoxicidad sobre especies de suelo, estas fueron: Vicia faba, Lactuca sativa y Eisenia fetida. Los valores obtenidos se indican directamente en la tabla de estudio de riesgo. El CAE se calculó siguiendo el mismo procedimiento visto para el ambiente acuático. De acuerdo con US EPA considerando la dosis de aplicación y considerando la pérdida por run-off igual a 0.05 de la dosis 2.5 kg/ha. Arroja un CAE igual a: CAE = 0.23 % Según datos de campo: CAE = V . f -1 . p . d-1 . R = 0.5 % V: volumen aplicado por árbol f: factor de aplicación R: run-off según S p: factor de elución ƒ(WHC) d: dilución del TOGAR BT Solubilidad agua (S) (ppm) % < 0.001 0.001 a 10 10 a 100 > 100 Runoff 0.1 1 2 5 5 En la tabla siguiente se presentan estos datos incluidos en las comparaciones para evaluar si existirá riesgo o no en el compartimento suelo. US EPA 1995 Luján germinación Luján crecimiento Luján Eisenia sp CE (%) 0.0001 0.00063 0.0023 0.54 CAE (%) 0.23 0.23 0.23 0.23 CAE/CE 2300 365 100 0.42 US EPA 1995 Luján germinación Luján crecimiento Luján Eisenia sp 0.0001 0.00063 0.0023 0.54 0.5 0.5 0.5 0.5 5000 794 217 0.92 Los datos indican que habría riesgo ambiental debido a la aplicación agrícola de Togar BT para los productores primarios no blanco y no para los invertebrados de suelo. ESTUDIO EN RIESGO EN AMBIENTE TERRESTRE A PARTIR DE MUESTRAS REALES DE CAMPO Los datos reportados hasta aquí correspondían a estudios a escala de laboratorio a partir de la contaminación “inducida” de suelos y agua controles. A partir de los cuales se expusieron las distintas especies. Los datos a continuación hacen referencia a ensayos realizados con muestras de suelo tomadas a diferentes tiempos respecto del día de aplicación del herbicida. Así se pudieron colectar muestras de suelo del día de la aplicación, de 15 días y de cuatro años. De la misma forma que para el caso de los estudios de laboratorio, se realizaron ensayos para evaluar la ecotoxicidad sobre especies de suelo: Vicia faba, Lactuca sativa y Eisenia fetida. Además se determinó la genotoxicidad in vivo producida por el herbicida medida en Eleocitos de Eisenia fetida. Tiempo de aplicación Inhibición Germinación % CE99 0.0023% Lombriz CE1 0.3 % Eleocitos TEM Día 0 SUELO PURO 15 días 4 años 100 100 0 ≥ 0.0023 0 ≥ 0.3 9.55* ≥ 0.0023 0 ≥ 0.3 11.11* ? 0 ≥ 0.3 4.38 TEM: momento de cola en la migración del DNA, *: distinto de los controles Kruskal-Wallis – Dunn Test Como puede observarse las muestras tomadas el día 0 y a los 15 días de la aplicación del herbicida con posible contaminación del suelo causaron el 100 % de la inhibición de la germinación en el ensayo con Lactuca sp. De los estudios de laboratorio 6 sabemos que la concentración de Togar BT en suelo que inhibe el 99 % de la misma es igual a 0.0023 %. Con lo cual en las muestras la cantidad de herbicida debe ser igual o mayor a ese valor. Por otro lado ninguna de las muestras fue tóxica para Eisenia sp, de la misma manera sabemos que la concentración que mata al 1 % de las lombrices es igual a 0.3 %. Por lo tanto la concentración de Togar BT en las muestras de suelo, al menos en día cero y día 15, debe ser igual o mayor a 0.3 %. Con lo cual una estimación indirecta de la concentración de Togar Bt post-aplicación da un valor de 0.3 %, en correspondencia con los valores estimados de 0.23 o 0.5 % (ver CAE para suelos más arriba). CAE estimado de campo = ≥ 0.3 % Un aspecto interesante es remarcar el hecho que las dos muestras que afectaron a las plantas, también produjeron efectos genotóxicos sobre individuos de Eisenia sp los cuales permanecieron vivos y a priori se concluye que el herbicida no afecta a los invertebrados. Sin embargo, mediante el uso de biomarcadores de genotoxicidad se evidencia un efecto sub-letal sobre este grupo de organismos. CONCLUSIONES FINALES Del estudio realizado aquí podemos decir sobre la aplicación directa del herbicida Togar BT para el control de acacia negra en las cercanías del río Luján que: • • • • • • Implica alto riesgo ecotoxicológico para plantas terrestres no-blanco Riesgo genotóxico potencial para lombrices de tierra Riesgo real para organismos acuáticos plantas y animales El riesgo para suelo es 6 veces el del agua No se recomienda su uso para el control del bosque en galería de acacia negra Combinar control con TOGAR BT con controles “manuales” 7 BIBLIOGRAFIA APHA-AWWA-WPCF, 1992. Standard methods for the examination of water and wastewater. Ed. Clesceri, Greenberg and Trussell 19º edition, Washington, USA. Ausubel F, Brent R, Kingston R, Moore D, Seidman J, Smith J, and Struhl K, 2004. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, e-book. 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