1 Kit de preparación de muestras libre de PCR de ADN

1
Kit de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq
Página
Página de
bienvenida
Audio
Bienvenido al curso de preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq.
Este curso se ha creado para proporcionarle una descripción general
del kit de preparación de muestras presentándole brevemente el flujo
de trabajo y el contenido del kit. No se debe considerar como una
sustitución del uso de la guía del usuario designada.
Haga clic en Siguiente para continuar.
Navegación
Familiarícese con las opciones de navegación de este curso. Puede
acceder a estas instrucciones en cualquier momento pulsando el botón
de ayuda en la esquina superior derecha de la página.
Objetivos del
curso
Al final de este curso, aprenderá las respuestas a preguntas como las
siguientes:
-¿Qué es el protocolo de preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq?
-¿Qué hace el protocolo?
-¿Cómo funciona el protocolo?
-¿Qué es necesario para completar con éxito el protocolo? y
-¿Cuáles son los distintos pasos en el flujo de trabajo de preparación
de muestras?
Haga clic en el vínculo de la parte inferior de la página para descargar
la Guía de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq.
¿Qué es el
protocolo de
preparación de
muestras libre de
PCR de ADN
TruSeq?
El objetivo del protocolo de preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq es agregar secuencias de adaptadores a los extremos de
los fragmentos de ADN para generar bibliotecas de secuenciación
“paired-end” indexada o de lectura única indexada.
¿Qué hace el
protocolo?
El protocolo de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq
proporciona lo siguiente: Un flujo de trabajo optimizado, con una
selección de tamaño basada en BeadChips y capacidades de
rendimiento más alto, capacidades de resolución de problemas
mejoradas y un adaptador de índices universal que etiqueta todas
las muestras.
El protocolo es compatible con procesos de indexación única o con
agrupamientos multiplexados de hasta 24 muestras con el kit de bajo
rendimiento libre de PCR de ADN TruSeq y agrupamientos de hasta
96 muestras con el kit de alto rendimiento libre de PCR de ADN TruSeq.
Las bibliotecas generadas no requieren una amplificación PCR para la
generación de grupos.
1
2
¿Cuáles son las
opciones?
Se ofrecen dos protocolos.
Primero, el protocolo de alto número de muestras (HS) para la
preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq, que se usa
para procesar más de 24 muestras. Nota: Esta opción requiere equipo
adicional proporcionado por el usuario para mezclar reactivos para
incubación.
En segundo lugar se utiliza el protocolo de bajo número de muestras
(LS) para la preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq,
que se usa para procesar 24 muestras o menos.
Ambos protocolos están recogidos en secciones independientes de
la Guía del usuario para la preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq.
¿Cómo funciona
el kit de bajo
rendimiento?
Este protocolo funciona porque el diseño del adaptador largo genera
la construcción de bibliotecas completas con índices en el paso de
ligadura. Se trata de un único diseño que se puede utilizar para varias
aplicaciones. Aquí se muestran los adaptadores con un único índice
que se suministran con los kits de bajo rendimiento libre de PCR de
ADN TruSeq.
¿Cómo funciona
el kit de alto
rendimiento?
Esta misma estrategia de diseño de adaptadores se usa también en el
kit de alto rendimiento libre de PCR de ADN TruSeq. Sin embargo, los
adaptadores del kit de alto rendimiento contienen 2 índices únicos, uno
para cada adaptador, para generar bibliotecas de doble índice y
permiten combinaciones de 96 elementos únicos.
Selección de
tamaño basada
en BeadChips
La preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq utiliza
BeadChips de purificación de muestras para seleccionar el tamaño de
los fragmentos de ADN. Al variar la cantidad de BeadChips que se
añaden a la muestra, se selecciona un tamaño de fragmento estrecho.
El seguimiento meticuloso de las instrucciones de manipulación de la
guía de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq es
esencial para obtener un rendimiento de bibliotecas suficiente con el
tamaño de fragmento adecuado. Estas bibliotecas se han optimizado
para emplearse en aplicaciones de secuenciación de genomas
completos. Las bibliotecas libres de PCR de ADN TruSeq no se han
concebido para su uso con el paso de enriquecimiento de TruSeq
debido a un rendimiento inferior previsto.
¿Qué es
necesario para
completar el
protocolo de
preparación de
muestras de bajo
rendimiento libre
de PCR de ADN
TruSeq?
Con el fin de completar el protocolo de preparación de muestras de
bajo rendimiento libre de PCR de ADN TruSeq necesita varios
elementos, incluidos los siguientes:
 La Guía del usuario, que incluye los protocolos de alto y bajo
número de muestras.
 Los distintos kits para completar los protocolos.
 Otros materiales proporcionados por el usuario, que se recogen
en la Guía del usuario.
Haga clic en cada elemento para obtener información adicional.
2
3
¿Qué es
necesario para
completar el
protocolo de
preparación de
muestras de alto
rendimiento de
ADN TruSeq?
Con el fin de completar el protocolo de preparación de muestras de alto
rendimiento libre de PCR de ADN TruSeq necesita varios elementos,
incluidos los siguientes:
 La Guía del usuario, que incluye los protocolos de alto y bajo
número de muestras.
 Los distintos kits para completar los protocolos.
 Otros materiales proporcionados por el usuario, que se recogen
en la Guía del usuario.
Haga clic en cada elemento para obtener información adicional.
Flujo de trabajo
de preparación
de muestras libre
de PCR de ADN
TruSeq
Aquí vemos el flujo de trabajo de preparación de muestras libre de
PCR de ADN TruSeq.
Haga clic en cada paso para obtener información adicional sobre él,
incluida la siguiente:
Funcionamiento de cada paso y mejores prácticas directamente
asociadas a cada paso.
¿Cómo funciona? El kit de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq
contiene 4 objetivos artificiales de ADN bicatenario que miden las
actividades enzimáticas de cada uno de los reactivos ERP2, ATL y
LIG2: CTE1, CTE2, CTA y CTL.
Estos controles opcionales en línea los introduce en la muestra el
usuario en cada uno de estos pasos. El resultado se puede ver en el
Visor del análisis de secuenciación, SAV, después de la secuenciación
de las bibliotecas finales.
Resumen
Ahora debería conocer las respuestas de preguntas como las
siguientes:
-¿Qué es el protocolo de preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq?
-¿Qué hace el protocolo?
-¿Qué es necesario para completar con éxito el protocolo?
-¿Cuáles son los distintos pasos en el flujo de trabajo de preparación
de muestras?
Haga clic en el vínculo de la parte inferior de la página para descargar
la Guía de preparación de muestras libre de PCR de ADN TruSeq.
Curso finalizado
Enhorabuena. Ha finalizado este curso. Si desea obtener más
información sobre el kit de preparación de muestras libre de PCR de
ADN TruSeq, visite la página de asistencia de reactivos y kits.
3