EVALUACION DE LA EFICACIA DE Viusid Vet Polvo* SOBRE LOS PARAMETROS PRODUCTIVOS E INMUNOLOGICOS EN CERDOS EN ENGORDA Antecedentes. La producción porcina en países industrializados y del tercer mundo, ha cambiado en los últimos años, lo cual ha generado que grandes grupos de animales se alojen bajo condiciones intensivas, con poblaciones de cerdos muy densas, lo que aumenta la incidencia y facilita el contagio de enfermedades infecciosas dentro de la piara, elevando la mortalidad y produciendo una deficiente ganancia de peso, mala conversión alimenticia, aumento en el número de días en que los cerdos llegan al rastro, y un excesivo gasto en medicamentos. Todo lo anterior se traduce en pérdidas económicas. En México al igual que en otros países las enfermedades infecciosas representan la principal causa de muertes en los cerdos y, el uso indiscriminado de antibacterianos, ha fomentado la aparición de cepas bacterianas resistentes como consecuencia del uso inapropiado de antibacterianos, facilitando el establecimiento y prevalencia de enfermedades infecciosas. Por lo anterior, una de las alternativas para mejorar los parámetros productivos e inmunes, es el empleo de agentes o preparados inmunoestimulantes de origen no antibiótico, que a la vez mejoren los parámetros productivos sin la restricción de la presencia de residuos de antibacterianos que conlleva al establecimiento de los tiempos de retiro de estas sustancias. Tal es el caso del Viusid-Vet Polvo*. Viusid-Vet Polvo*es un preparado nutricional, a base de antioxidantes, vitaminas, oligoelementos y, un principio activo producto de la extracción del regaliz (ácido glicirricínico) con actividades antivirales potenciales. La activación molecular de sus principios activos, incrementa la actividad de las funciones biológicas de los mismos (efecto antiviral y antioxidante), sin modificación de la estructura molecular de los principios activos, asegurando excelente funcionamiento en mejorar los mecanismos de un aumento significativo de las defensas del organismo Por lo anterior, se consideró conveniente realizar una prueba de eficacia de Viusid-Vet Polvo* en lechones de engorda para evaluar su efecto en los parámetros productivos y producción de inmunidad humoral (anticuerpos) hacia la enfermedad de influenza porcina. Material y métodos. Lugar: El estudio se llevó a cabo en el Centro de Enseñanza e Investigación en Producción Porcina (CEIEPP) perteneciente a la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UNAM (Universidad Nacional Autónoma de México), localizado en Jilotepec, Edo de México. Especie: Se utilizaron 40 lechones recién destetados machos y hembras Duroc-Landrace de aproximadamente 7 Kg, los cuales se dividieron en dos grupos de 20 lechones cada uno. Producto: Viusid-Vet Polvo*, producto comercial de Catalysis, distribuido por Laboratorio Dermaceutical México, S. A. de C. V. en presentación de bolsa de 5 Kg metalizado para aplicación vía alimento. Dosis 2,400 g/ tonelada de alimento. Alimentación de los Grupos: Grupo Viusid Vet Polvo: Previa prueba de eficiencia de mezclado, se utilizó alimento preparado en la misma granja experimental en presentación en harina manejado por etapas: durante 5 semanas que duró toda la etapa desde destete hasta la etapa de crecimiento con un consumo estimado de 1.4 toneladas de alimento y 8 semanas de la etapa de finalización, considerando un consumo estimado de 5 toneladas. 1 Grupo Control: Alimento preparado en la misma granja experimental por etapas desde destete a crecimiento y finalización ad libitum sin Viusid-Vet Polvo*. Tiempo de evaluación: desde la etapa del destete hasta la fase de crecimiento 5 semanas y hasta la semana 18 de finalización. Fecha de inicio 30 de Abril y terminación 05 Septiembre, 2011. Datos para el diseño experimental. o Granja Experimental CEIEPP, UNAM. o Número de animales en prueba 40. o Animales de grupo control 20. o Animales de grupo Viusid 20. Parámetros en evaluación: o Peso promedio semanal por grupo (gramos). o Índice de Conversión alimenticia por grupo semanal (Kg). o Ganancia diaria de peso promedio por grupo (Kg). o Mortalidad y animales de desecho durante el ensayo. Pruebas serológicas y RT-PCR. (Polymerase Chain Reaction) Monitoreo: Inhibición de Hemoaglutinación para Influenza Porcina (HI-IP): para realizar las pruebas se tomaron 20 muestras a 7 días y al final de la engorda de sangre completa sin anticoagulante para separación de sueros y realizar la prueba de inhibición de hemoaglutinación contra virus de Influenza porcina por grupo. El propósito fue corroborar el comportamiento del sistema inmune en la generación de anticuerpos hacia la enfermedad presente en la granja (influenza porcina). La determinación de los títulos de anticuerpos contra la enfermedad de influenza porcina en el suero de cada cerdo se utilizó la prueba de Inhibición de la Hemoaglutinación con el virus de referencia A/swine/New Jersey/11/76 (H1N1) GeneBank access K00992 y con el subtipo A/swine/Minnesota/9088-2/98 (H3N2). Número de acceso al GeneBank AF153234. Para considerar a los animales expuestos al virus de influenza porcina subtipos H1N1 y H3N2 como animales positivos, deberían tener una dilución 1:80 o mayores o su expresión logarítmica respectiva equivalente a 1.9 log. La interpretación de los animales negativos a la prueba se basa en los títulos de anticuerpos localizados en la dilución 1:40 o menores o ser menor a 1.9 log. Días de edad 15 días 30 días 45 días 70 días 105 días Pruebas de laboratorio HI-IP HI-IP HI-IP HI-IP HI-IP Grupos Control y Viusid Vet. Polvo * Control y Viusid Vet. Polvo * Control y Viusid Vet. Polvo * Control y Viusid Vet. Polvo * Control y Viusid Vet. Polvo * RT-PCR Tiempo real: se tomaron 20 hisopos nasales por cada grupo para realizar la prueba de RT-PCR en tiempo real para evaluar excreción viral. Durante la segunda semana de iniciado el destete 8, 10, 12,14, 16, 18, 20 y 22 de Mayo, dando un total de 8 monitoreos para este estudio. Los hisopos recolectados se sumergen en MEM y el exceso de medio del hisopo se retira presionando el hisopo sobre las paredes del tubo. El medio se centrifuga y filtra, para posteriormente obtener 700 µl para extracción de RNA viral. Una vez extraído el RNA se utiliza para RT-PCR en tiempo real. La interpretación de ésta prueba se basa en determinar la presencia del virus de Influenza Porcina a través de la concentración viral presente en los hisopos nasales expresada en logaritmos. Los animales con una concentración viral mayor o igual a 2.0 logaritmos corresponden a los animales positivos. Los animales que contengas una concentración viral menor a 2.0 logaritmos corresponden a los animales negativos. 2 Fecha de inicio 30 de Abril, Grupos Control y Viusid-Vet Polvo* Monitoreo Fechas Pruebas Grupos Control y Viusid Vet. Polvo * 1 08-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 2 10-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 3 12-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 4 14-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 5 16-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 6 18-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 7 20-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Control y Viusid Vet. Polvo * 8 22-Mayo-2011 RT-PCR H1N1 y H3N2 Resultados. Los resultados productivos semanales para los grupos Control y Viusid-Vet Polvo* (peso, consumo de alimento, ganancia diaria de peso, conversión alimenticia) se presentan como sigue: Grupo Control Semanas 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Peso inicial Semanal (g) 119.70 133.30 182.10 227.60 281.70 362.90 460.20 555.50 656.00 745.00 865.00 957.90 969.50 1058.50 1160.00 Peso final Semanal (g) 132.40 182.10 237.30 281.70 362.90 460.20 555.50 656.00 745.00 865.00 957.90 1062.50 1058.50 1160.00 1256.50 Prom. Gral 15 Semanas 16 17 18 Prom. Gral 18 Semanas 1256.50 1325.00 1370.25 1325.00 1428.25 1438.00 Consumo Promedio (Kg) 0.51 0.34 0.50 0.62 0.92 1.30 1.31 1.32 1.62 1.85 1.79 2.02 2.32 2.22 2.39 GDP Promedio (Kg) 0.042 0.350 0.394 0.408 0.608 0.732 0.726 1.028 0.655 0.899 0.742 0.729 0.775 0.894 0.788 C.A. (Kg) 1.10 0.96 1.24 1.52 1.50 1.75 1.81 2.10 2.46 2.04 2.62 3.33 3.10 2.48 3.03 1.40 0.651 2.07 2.45 2.57 2.44 0.699 0.824 0.806 4.37 3.13 3.97 1.50 0.637 2.24 3 Grupo Viusid Vet Polvo* Semanas 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Prom. Gral 15 semanas 16 17 18 Prom. Gral 18 Semanas Peso inicial Semanal (g) 121.50 133.30 168.20 226.40 279.10 371.50 469.20 572.50 687.00 785.00 843.00 963.60 1035.00 1143.00 1248.50 Peso final Semanal (g) 133.30 168.20 226.40 279.10 371.50 469.20 572.50 687.00 785.00 843.00 963.60 1082.00 1143.00 1248.50 1364.00 Consumo Promedio (Kg) 0.12 0.34 0.58 0.68 0.98 1.30 1.41 1.62 1.77 2.02 2.17 2.38 2.65 2.76 2.92 1.58 GDP Promedio (Kg) 0.472 0.293 0.470 0.400 0.691 0.733 0.776 0.858 0.745 0.685 0.949 0.917 0.907 0.890 0.989 0.718 C.A. (Kg) 1.29 1.15 1.23 1.71 1.43 1.77 1.81 1.88 2.39 2.95 2.26 2.69 2.90 3.05 2.95 2.10 1364.00 1245.00 1343.25 1481.50 1343.25 1446.50 2.75 3.08 3.07 1.71 0.925 1.050 1.038 0.726 3.58 2.98 2.95 2.15 Resumen de los resultados productivos por grupo a 15 semanas: GDP (gr) Control 651 Viusid Vet Polvo* % 718 +10.3% Consumo Promedio (Kg) 1.40 1.58 +12.9% Conversión (Kg) Peso Promedio (kg) 2.07 73.91 2.10 +1.4% 80.24 +8.6% El grupo Viusid Vet Polvo* en un análisis preliminar a 15 semanas de iniciado el ensayo presentó mayor ganancia de peso (10.3%), mayor consumo promedio de alimento (12.9%), mayor indice de conversión alimenticia (1.4%) y mejor peso promedio (8.6%) que el grupo de cerdos control. A pesar de que la conversión es ligeramente favorable para el grupo control, Viusid Vet Polvo* generó mas peso promedio y mayor ganancia diaria de peso. Resumen de los resultados productivos por grupo a 18 semanas: GDP (gr) Control 637 Viusid Vet Polvo* % 726 +14.0% Consumo Promedio (Kg) 1.50 1.71 +14.0% Conversión (Kg) Peso Promedio (kg) 2.24 89.88 2.15 -4.0% 103.32 +15% El grupo Viusid Vet Polvo* a termino del ensayo, tuvo mayor ganancia de peso (14%), mayor consumo promedio de alimento (14%), menor indice de conversión alimenticia (4%) y mejor peso promedio (15%) que el grupo de cerdos control. La conversión alimenticia remontó favorablemente a 18 semanas en relación al grupo control. 4 Análisis de Laboratorio. Inhibición de la Hemoaglutinación para el virus de Influenza Porcina subtipo H1N1. Monitoreo Control Viusid Promedio Promedio Log Log Dif Viusid vs Control Dif Viusid vs Control Control Viusid desviación Desviacion Estándar Estandar Control Viusid % % Positivos Positivo Dif Viusid vs Control 15 días 1.80 1.80 0.00 0.18 0.32 0.14 61.11 47.37 -13.74 120 días 2.16 1.88 -0.28 0.49 0.25 -0.24 86.66 71.43 -15.23 %Promedio Grupal 1.98 1.84 -0.14 0.34 0.29 -0.05 73.88% 59.40% -14.49% Inhibición de la Hemoaglutinación para el virus de Influenza Porcina subtipo H3N2. Monitoreo Control Viusid Promedio Promedio Log Log Dif Control Viusid Viusid Desviación desviación vs Estándar Estándar Control Dif Viusid vs Control Control Viusid % % Positivos Positivo Dif Viusid vs Control 15 días 1.60 1.54 -0.06 0.23 0.27 0.04 22.22 15.79 -6.43 120 dias 1.82 1.41 -0.41 0.13 0.25 0.12 73.33 0 -73.33 %Promedio Grupal 1.71 1.48 -0.235 0.18 0.26 0.08 47.78% 7.90% -39.88% PROMEDIOS GLOBALES TITULO H1N1 Grupos TITULO H3N2 Promedio % Promedio % Log Positivos Log Positivos Control 98.30 49.26% 35.59 31.85% Viusid 55.04 39.60% 20.18 5.26% % Diferencia -43.26 -9.66% -15.41 -26.59% En el primer monitoreo a 15 dias se observa que el grupo tratado con Viusid-Vet Polvo* tiene menor porcentaje de sueros positivos con respecto al grupo control, (H1N1:47.3% Viusid vs 61.1% Control y H3N2: 15.8% Viusid vs 22.2% Control), lo anterior indica mejor comportamiento del sistema inmune. En el primer monitoreo a 15 dias la respuesta inmunológica que generan ambos grupos es similar en cantidad de anticuerpos, el mecanismo de defensa general del organismo del cerdo tratado con Viusid-Vet Polvo* ayuda a defenderlo de la infeccion hacia el virus de Influenza Porcina, esto explica el resultado de menor positividad a los dos subtipos (H1N1 Y H3N2). En el segundo monitoreo a 120 dias se observa de manera significativa un menor porcentaje de animales positivos con el uso de Viusid Vet Polvo*(H1N1: 71.4% Viusid vs 86.6% Control y H3N2: 0% Viusid vs 73.3% Control). Esto indica que el organismo del cerdo tiene mayor capacidad para reaccionar y defenderse de la infeccion de influenza porcina, desarrolla menor infeccion y menor eliminación viral. 5 Graficas de Serologia. Gráfica 1. Inhibición de hemoaglutinación para el virus de influenza porcina subtipo H1N1 para los grupos control y Viusid-Vet Polvo* a 15 y 120 días de tratamiento. Grafica 1 Encontramos que los cerdos con un numero mayor de infectados generan mayor titulo de anticuerpos contra el virus de influenza porcina correspondientes a los cerdos del grupo control, los cerdos del grupo tratado con Viusid Vet Polvo* desarrollaron menor infección y menor título de anticuerpos a la infección de influenza porcina subtipo H1N1. Gráfica 2. Inhibición de hemoaglutinación para el virus de influenza porcina subtipo H3N2 para los grupos control y Viusid-Vet Polvo* a 15 y 120 días de tratamiento. Grafica 2 Hacia el subtipo H3N2 se presentó el mismo comportamiento, en donde cerdos tratados con Viusid-Vet Polvo* expuestos al mismo antígeno viral desarrollaron menor infección, menores títulos de anticuerpos y menor eliminación viral. En conclusión las pruebas de serología en el grupo con Viusid-Vet Polvo* sentó mejores resultados (menor porcentaje de positivos H1N1 Y H3N2). El producto mejora el sistema inmune del cerdo antes de la madurez inmunológica. Lo anterior concuerda con el hecho de que el grupo con Viusid-Vet Polvo* presentó los promedios de títulos más bajo al final (inmunidad más estable). 6 Los resultados coinciden con los obtenidos de la prueba de PCR (Polymerase Chain Reaction), ya que el grupo sin Viusid-Vet Polvo* presentó más circulación viral, lo cual resulta en una mayor cantidad de anticuerpos. Resultados de la prueba de RT-PCR (polymerase Chain Reaction) tiempo real. El siguiente cuadro presenta los resultados de la prueba RT-PCR trabajada a partir de hisopos nasales de ambos grupos, control y Viusid Vet Polvo*. Muestras (+) >2.0 copias/reacción. Monitoreo 1 2 3 4 5 6 7 8 %Promedio Grupal Control Viusid Promedio Promedio Log Log Dif Dif Control Viusid Control Viusid Dif Viusid Viusid Viusid Desviacion Desviacion % % vs vs vs Estandar Estandar Positivos Positivo Control Control Control 1.88 1.83 1.66 2.24 1.92 1.90 1.79 1.91 1.87 1.58 1.93 1.85 1.94 1.64 1.44 1.44 -0.01 -0.25 0.27 -0.39 0.02 -0.26 -0.35 -0.47 0.45 0.31 0.36 0.42 0.30 0.33 0.42 0.42 0.63 0.39 0.37 0.42 0.49 0.35 0.20 0.20 0.18 0.08 0.01 0.00 0.19 0.02 -0.22 -0.22 35% 30% 5% 70% 35% 45% 35% 50% 25% 5% 45% 25% 45% 20% 0% 0% -10% -25% 40% -45% 10% -25% -35% -50% 1.89 1.71 -0.18 0.38 0.38 0.01 38.13% 20.63% -17.50% El grupo tratado con Viusid Vet Polvo* presenta menor porcentaje de animales positivos (20.6%) con respecto al grupo sin Viusid Vet Polvo* (38.1%) lo cual confirma los resultados encontrados en las pruebas de inhibición de hemoaglutinación en donde se observa un menor número de animales infectados, menor concentración viral debido a una menor permanencia en el organismo del cerdos esto es menor porcentaje de positividad y menor eliminación viral. En este grupo tratado con 2500 ppm (partes por millon) del producto, se observó mucho menor porcentaje de animales positivos, lo cual indica que la dosis aplicada estimula el sistema inmune y permite controlar mejor las infecciones por los virus de influenza porcina. Gráficas de RT-PCR tiempo real. Gráfica 3. Carga viral del virus de influenza porcina para los grupos control y Viusid-Vet Polvo* expresada en logaritmos por medio de la prueba RT-PCR tiempo real. Grafica 3 7 Grafica 4. Porcentaje de animales positivos al virus de influenza porcina expresada en Logaritmos por medio de la prueba RT-PCR tiempo real. Grafica 4 En la mayoría de los monitoreos la carga viral siempre es menor que en el grupo control, lo que refleja una mejor reacción general del organismo del cerdo a no desarrollar una infección viral es por esto que es menor el número de cerdos positivos a influenza porcina subtipo H1N1. 8 Conclusiones: 1. Con el uso de Viusid-Vet Polvo* en el alimento de crecimiento y finalización a una dosis de 2.4 Kg/ tonelada de alimento, mejoró los parámetros productivos hasta las 18 semanas de duración del ensayo. 2. Viusid Vet Polvo* a las 15 semanas mejoró la ganancia diaria de peso en 67 gramos (718gr Viusid vs 651gr Control), el consumo de alimento en 180 gramos promedio, el índice de conversión alimenticia en 30 gramos promedio de alimento por Kilogramo de peso vivo (2.10 kg Viusid vs 2.07 kg Control) y el peso promedio final en 6.33 Kg. 3. Viusid Vet Polvo* a las 18 semanas mejoró la ganancia diaria de peso en 89 gramos (726gr Viusid vs 637gr Control), el consumo de alimento en 210 gramos promedio, el índice de conversión alimenticia en 90 gramos promedio de alimento por Kilogramo de peso vivo (2.24 kg Viusid vs 2.15 kg Control) y el peso promedio final en 13.44 Kg. 4. Con el uso de Viusid-Vet Polvo* como inmunomodulador en el alimento de crecimiento y finalizador de cerdos en engorda mejoró las defensas del organismo del cerdo medido a través de la pruebas de inhibición de Hemoaglutinación y RT-PCR tiempo real para el Virus de influenza Porcina subtipos H1N1 y H3N2. 5. En este grupo tratado con 2500 ppm (partes por millon) del producto, se observó un mucho menor porcentaje de animales positivos con la dosis apliacada de Viusid-Vet Polvo*, lo cual indica que estimula el sistema inmune y permite controlar mejor las infecciones por los virus de influenza porcina. Aplicar Viusid-Vet Polvo* a cerdos en engorda no causa ninguna alteración de la homeostasis ni signología alguna tras la aplicación del producto pero si favorece una expresión productiva en las razas de engorda de alta productividad ****Marca registrada, Viusid-Vet Polvo* Catalysis, España, distribuido por Dermaceutical México, S. A. de C. V. ATENTAMENTE MVZ LUIS OCAMPO CAMBEROS PROFESOR TIEMPO COMPLETO DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA (FMVZ) UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO (UNAM) 9 Bibliografía. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. Dai, JH. Et al. Glycyrrhizin enhances interleukin-12 production in peritoneal macrophages. Immunology 103 (2): 235-43, 2001.Sugawara, I, et al: Human interferon-gamma (IFN-gamma) containing cells bear various surface Growth Promoters. The Pig Site. Hirabayashi, K: Antiviral activities of glycyrrhizin and its modified compounds against human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and herpes simplex type 1 (HSV-1), in vitro. Research Laboratory, Minophagen Pharmaceutical. Japan, 1990. Hughes, P.; Heritage, J.: Antibiotic Growth Promoters-Promoters in food animals. (2002). University of Leeds, United Kingdom. Krausse, R. et al: In vitro anti-Helicobacter pylori activity of extractum liquiritae, glycyrrhizin and its metabolites. J. Antimicrobial Chemother. 54 (1):243-6, 2004. Lin, JC: Mechanism of action of glycyrrhizic acid in inhibition of Epstein-Barr virus replication in vitro. Antiviral. Res: 59 (1): 41-47, 2003. Lo, HH. Et al. Glycyrrhizinic acid inhibits arylamine N-acetyltransferase activity in Klebsiella pneumoniae in vitro. J Appl. Toxicol. 17 (6), 385-90, 1997. Mordenti, A.: Probiotics and new aspects of growth promoters in pig production. Chiem-ptions Mediterraneennes. Ohtsuki, KIahida, N: Inhibitory effect of glycyrrhizin on polypeptide phosphorylation by polypeptide dependent protein kinase (kinase P) in vitro. Biochem-Biophys-Res-Commun 157/2, 1988. Phenotypic markers. Microbiol. Immunol. 30(10): 1049-59, 1986. Pompei, R, Marccialis, MA: Effect of glycyrrhizinic acid on herpes simplex virus type 1 glycoprotein synthesis. Universitá di Cagliari, Italy.1G-MOD.83/2, 1985. Tanaka, Y, et al: Antibacterial compounds of licorice against upper airway respiratory tract pathogens; J. Nutr. Sci. Vitaminol (Tokyo) 47 (3):270-73, 2001. Vondruskova, H.; Slamova, R.; Trckova, M.: Alternatives to antibiotic growth promoters in prevention of diarrhea in weaned pigs: a review Veterinarian Medicine, 55, 2010 (5): 199-224. Yechering Industrial Products, Co, LTD (2006). E-mail: infoechering.com. Zdzislaw, M.: Organic acids as potential alternatives to antibiotic growth promoters for pigs. Advances in pork production. Vol. 18 (2008). 10