VIBRIO CHOLERAE

VIBRIO
Historia
El género Vibrio es uno de los cuatro géneros que conforman la familia Vibrionaceae;
sus miembros son habitantes naturales de las aguas y el ambiente marino.
Hasta 1960, V. cholerae era el único reconocido como
patógeno humano. Fue primeramente descrito por
Pacini en 1854, que lo encontró en el intestino de un
paciente fallecido por el cólera, y en ese momento fue
designado como V. cholerae.
En 1906, Gotschlich, en el Tor, Sinaí, aisló unos
microorganismos muy semejantes a V. cholerae, pero
que diferían de este en su actividad hemolítica, a los cuales llamó V. eltor; en la
actualidad se considera este microorganismo como una variante de V. cholerae. Se
reconocen más de 30 especies de Vibrio, de las cuales 12 se consideran como
patógenas humanas, estas son: V. alginolyticus, V. carchariae, V. cholerae, V.
cincinnatiensis, V. damsela, V. fluvialis, V. furnissii, V. hollisae, V. metschnikovii y V.
vulnificus. Algunas de estas especies se limitan a producir enfermedad intestinal, otras
provocan enfermedad extraintestinal, y otras tienen ambas localizaciones.
Morfología e identificación
Los vibrios son bacilos cortos, curvos, que semejan una coma. Su
tamaño varía considerablemente;van desde 1 a 5 _m de largo
por 0,3 a 0,6 _m de ancho.
Las comas pueden aparecer alargadas, delgadas y delicadas, o
cortas y gruesas. Se presentan como células simples, en forma
de S, en parejas o a veces en cadenas muy cortas. Las formas
de esferoplastos se observan frecuentemente. En los medios
líquidos se aprecian, a menudo, formas espirilares.
En los cultivos viejos, por el contrario, se ven formas muy
pequeñas, semejando gránulos y que no fijan bien las
coloraciones. En los subcultivos, en muchas ocasiones, los vibrios pierden su forma de
coma.
Estos microorganismos son activamente móviles por medio de
un flagelo que en la microscopia electrónica se observa unido al
blefaroplasto. Son grannegativos, pero se colorean mejor
cuando se usa como contraste carbolfucsina por safranina.
Requerimientos nutricionales y características fisiológicas
Vibrio puede crecer con facilidad en los medios de cultivo sin altos requerimientos
nutricionales. Una de sus principales características es su rápido crecimiento en agua
peptona alcalina al 1 % con un 0,5 % de NaCl.
El crecimiento ocurre, principalmente, en la superficie después de 6 a 9 horas de
incubación, por lo que se observa una película en la misma. Los vibrios son
fuertemente aeróbicos, y es necesaria una adecuada fuente de oxígeno para su
recobrado.
Aunque algunas especies crecen muy pobremente o no crecen a 37 0C, en aquellas
asociadas con enfermedad en el hombre se advierte que su temperatura óptima de
crecimiento oscila entre 30 y 40 0C.
La presencia de sal es esencial en los medios de cultivo para el crecimiento de vibrios;
la concentración de sal requerida para cada especie de vibrios es diferente y esta
característica es uno de los parámetros utilizados en su identificación.
Los estudios fisiológicos para la clasificación en especie comienzan con la reacción de
la oxidasa, todas las especies capaces de producir enfermedad en los humanos son
oxidasa positiva, con excepción de V. metschnikovii que es oxidasa negativa. La
mayoría de los vibrios no reducen los nitratos a nitritos, no fermentan la lactosa y sí la
glucosa, la maltosa, el manitol y la sacarosa sin formación de gas.
El poder hemolítico de las cepas de V. cholerae ha sido uno de los principales
elementos en la diferenciación de V. cholerae clásico y V. cholerae, El Tor; se ha
determinado que V.
cholerae clásico no produce una verdadera hemolisina soluble, mientras que V.
cholerae, El
Tor, sí la produce.
Estructura antigénica
Se han detectado, por lo menos, dos componentes antigénicos en las diferentes
especies de vibrios. El antígeno O, que es termoestable, y el antígeno H, el cual es
termolábil y su
aglutinabilidad e inmunogenicidad se inactivan por el calentamiento a 100 °C durante
15 min
y 2,5 horas respectivamente.
Una característica de las especies de Vibrio es que todas las cepas de una misma
especie poseen los mismos antígenos H, aunque están divididas en muchos serogrupos
por el antígeno O. Se han descrito más de 80 serovariedades en V. cholerae.
Cólera
El cólera es una enfermedad infecciosa intestinal aguda, de comienzo brusco, que se
manifiesta por diarrea acuosa y profusa, vómitos, deshidratación y colapso
circulatorio. Es provocada por el Vibrio cholerae.
El germen presente en el agua y alimentos
contaminados, ingresa al organismo por vía oral (a
travésde la boca). Una vez superada la barrera gástrica
(jugos del estómago), ingresa al intestino delgadoy
origina secreción de agua y electrolitos, produciendo
diarrea de tipo secretoria.
El hábitat natural del vibrio son las aguas dulces y
saladas. Son resistentes al frío y sensibles al calor,
desecación y acidez.
El único reservorio natural es el hombre. En él, puede actuar como portador
convaleciente o crónico eliminando vibriones en forma intermitente con sus excretas,
contaminado agua de consumo, alimentos y otros vehículos de transmisión como
moscas y cucarachas.
La principal vía de transmisión es la ingestión de agua o alimentos contaminados con el
vibrio cholerae.
El cólera se transmite a través del agua no potabilizada, frutos de mar, pescado, o por
malos hábitos de higiene. Los síntomas son diarreas muy abundantes que deshidratan
rápidamente a la persona, vómitos, fiebre, calambres y trastornos renales.
Vibrio Cholerae
El Vibrio cholerae es una bacteria Gram negativa con forma de bastón Hay dos cepas
principales de V. cholerae, clásica y El Tor, y 80 serogrupos.
Patogenia Vibrio Cholerae
Vibrio cholerae penetra por vía oral, la dosis infectante es de 108 a 109; los vibrios son
muy sensibles al ácido y, por lo tanto, el estómago es una importante barrera para
evitar que los vibrios lleguen a colonizar el intestino, lo cual debe ocurrir para lograr la
infección y causar enfermedad. La colonización del intestino delgado depende de
funciones como son: la motilidad, la quimiotaxis, las enzimas proteolíticas, las
hemaglutininas, los factores de colonización (pili) y, finalmente, la producción de
toxina, cólera toxina (CT).
La adherencia a la mucosa del intestino delgado proximal, es un paso previo a la
producción de enterotoxinas y la posterior secreción de agua y electrólitos. Este
proceso sucede sin la destrucción del borde en cepillo de los enterocitos, sin causar
invasión de la mucosa intestinal y sin provocar lesiones histopatológicas reconocibles
al microscopio de luz.
La toxina CT es una proteína grande, periplasmática, compuesta por un 98 % de
proteínas, un 1 % de lípidos y un 1 % de hidratos de carbono, cuyos genes
estructurales, ctxA y ctxB, codifican cinco subunidades B que ligan la molécula de
toxina a los receptores de las células intestinales y una subunidad A, enzimáticamente
activa.
Las cepas clásicas poseen dos copias de ctxB no ligadas, pero las cepas El Tor tienen, a
menudo, una copia.
Una primera toxina produce cambio en la función de los enterocitos, hay un
incremento en la secreción por los enterocitos de las criptas intestinales y una
disminución de la función de absorción por los enterocitos situados en los ápices de las
vellosidades intestinales.
Se ha descrito el papel de una segunda toxina producida por V. cholerae, que tiene
como función alterar uniones intercelulares, haciendo que la mucosa intestinal se haga
más permeable, y por la acción de la presión hidrostática se filtre hacia la luz intestinal
agua y electrólitos; debido a esto aparece diarrea, lo cual se ha puesto en evidencia al
producirse
Una tercera enterotoxina, denominada enterotoxina accesoria del cólera (ace), ha sido
descrita; esta también tiene participación en el cuadro clínico del cólera.
Se ha señalado en V. cholerae, al igual que en otros patógenos entéricos, la presencia
de un islote de patogenicidad que contiene toda la información para los factores de
virulencia.
Entre los factores de patogenicidad se plantean las enterotoxinas, la
cholerae-like toxina, las hemolisinas, los pilis, las citotoxinas, factores que aumentan la
invasividad como las proteasas y la resistencia a la actividad bactericida del suero.
Cuadro Clínico Cólera
Vibrio cholerae produce diarrea aguda que se caracteriza por ser de comienzo
repentino, diarreas acuosas y profusas; no hay dolor; los vómitos pueden estar
presentes; hayrápida deshidratación, acidosis y colapso periférico.
La infección asintomática es mucho más frecuente que la aparición del cuadro clínico
característico, especialmente en las infecciones por el biotipo El Tor, siendo común en
los niños la presencia de diarreas leves.
En los casos graves no tratados, la persona puede morir en horas y la tasa de letalidad
excede al 50 %.
Tratamiento Cólera
En el cólera, el principal aspecto a considerar es la reposición de líquidos.
Los antibióticos de elección son la tetraciclina y el trimetoprim-sulfametoxazol en
niños pequeños. En las infecciones extraintestinales se indica el uso de antibióticos
Diagnostico en el laboratorio Vibrio Cholerae
El diagnóstico del cólera se hace sobre el estudio de tres aspectos: los casos clínicos,los
portadores y el medio ambiente.
En los casos clínicos, las muestras útiles para el diagnóstico son las heces fecales y los
vómitos. En los portadores se estudian las heces fecales después de suministrar
purgante salino. El medio ambiente se analiza mediante las muestras obtenidas del
alcantarillado por hisopo de Moore, estudio del plancton o la vegetación costera y
estudios de moluscos, aguas y alimentos.
Examen directo. Los métodos del examen directo en campo oscuro o contraste de fase
se pueden utilizar en las muestras (provenientes de enfermos) de las heces fecales y el
vómito, donde se observarán los microorganismos activamente móviles. La
fluorescencia con anticuerpos marcados se emplea en los enfermos en la fase aguda
de la enfermedad.
Cultivo. El diagnóstico de certeza se basa en la obtención de los microorganismos a
partir de los cultivos. Si se plantea la demora del procesamiento de las muestras, se
recomienda el uso de un medio de transporte como el medio de Cary y Blair. La
conservación debe hacerse a temperatura ambiente, pues las temperaturas bajas
ocasionan la muerte de los vibrios.
Se recomienda el uso de medios de enriquecimiento especialmente para el aislamiento
a partir de muestras provenientes de pacientes convalecientes o de personas
asintomáticas. El agua peptona alcalina pH 9,0 con 1 % de NaCl es el medio
recomendado, aunque se puede utilizar otro más selectivo, como el medio de Monsur.
La incubación del agua peptona alcalina no debe sobrepasar las 8 horas.
A partir de las muestras a estudiar o de los medios de enriquecimiento se siembran las
placas de medios selectivos para vibrios como son el TCBS agar (tiosulfato-citrato-bilis
sacarosa) o el medio de Vibrio agar o TG agar (gelatina-taurocolato-telurito).
La identificación de V. cholerae en muestras de pacientes se efectúa sin dificultad a
partir de las placas de agar selectivo, no así cuando la identificación se hace a partir de
muestras como el agua o productos marinos que pueden tener como contaminantes
otros
vibrios.
Las colonias sospechosas de corresponderse con V. cholerae se inoculan en el medio
de agar Kligler-hierro, y después de incubadas se pasa a la identificación utilizando los
esquemas establecidos.
Se recomienda hacer la identificación comenzando por una primera etapa en la cual se
realiza la prueba de la oxidasa, la fermentación de la glucosa, la reducción de nitratos a
nitritos y el crecimiento en caldos con concentración de NaCl al 1 % y sin este, así como
la decarboxilación de la lisina e hidrólisis de la arginina.
En una segunda etapa se deben estudiar la reacción de Voges-Proskauer, la producción
de indol y la producción de ácido a partir de: L-arabinosa, lactosa, sacarosa, manitol y
salicina
La complementación de la caracterización de las cepas se hace con la clasificación
serológica para determinar los serogrupos, así como con el estudio de la hemólisis para
la determinación del biotipo.
Otros métodos utilizados pueden ser: la sonda del ADN para el estudio de genes
relacionados con la producción de hemólisis (hyl/A) y el estudio de la cólera toxina por
PCR y la clasificación por bacteriófagos
Para la identificación de vibrios a partir de muestras extraintestinales se pueden
emplear medios universales con la adición de NaCl al 1 %.