Trabajo Nº132

Trabajo Nº132
Título
EFECTO DE LA VITAMINA D EN LA EXPRESIÓN DE MICRORNA21 Y CASPASA 8 EN
CÉLULAS MONONUCLEARES PERIFÉRICAS DE PACIENTES CON DIABETES
MELLITUS TIPO 1
Autor Y Coautores
C. Flores-Ramirez, C. Pizarro, G. Mancilla,P. Camacho, D. García, E. Codner, F. Pérez-Bravo
Lugar De Trabajo
Laboratorio de Genómica Nutricional. Departamento de Nutrición e IDIMI, Facultad de
Medicina, Universidad de Chile (Fondecyt 1130240).
Relator
Cristian Flores Ramirez
Contenido (2500 Caracteres, Incluye Los Espacios)
La diabetes tipo 1 (DM1) es una enfermedad autoinmune crónica cuya etiología es muy
compleja. Escasos genes se han identificado con alto valor predictivo para esta patologia. La
vitamina D ha sido uno de los posibles focos terapéuticos más estudiados relacionados a la
DM1. Por otro lado, los microRNAs (miRNAs) son una clase de ARN no codificante que
inhiben la traducción de ARNs mensajeros regulando la expresión de determinados genes, entre
ellos genes de apoptosis y proinflamatorios. Objetivos: Evaluar el efecto protector de la
vitamina D mediante la medición de la expresión del miRNA miR21 y del gen pro-apoptótico
Casp8 en células mononucleares periféricas (CMP) de pacientes diabéticos tipo 1 (DM1) y en
sujetos controles. Diseño Experimental: Se realizó estudio caso-control. En modelo in vitro de
CMP se estimuló con vitamina D y luego se realizó extracción de ARN, para luego determinar
niveles de expresión del gen Casp8 y del miR-21. Sujetos y Métodos: Se tomaron muestras de
sangre de 9 pacientes con DM1 entre 2 y 17 años y 9 controles sanos entre 23 y 45 años de
edad. Se aislaron las CMP a través de gradiente de Ficoll y se cultivaron 20 horas con los
estímulos: 11 mM de glucosa, 25 mM de glucosa, 50 nM de vit.D, 11 mM glucosa+50 nM de
vit.D, 25 mM glucosa+50 nM vit.D y una condición basal, para simular hiperglicemia semejante
al debut de la DM1. Se realizó extracción de ARN total, luego se sintetizó ADNc específico
para cada miRNA (miR-21 y el control endógeno RNU6B) y ADNc para el gen Casp8 y el
control endógeno 18S. Luego se midió la expresión de estas moléculas mediante PCR en tiempo
real. Para el análisis de la expresión se utilizó un test de randomización al azar a través del
programa REST (p<0,05). Resultados: Al evaluar la expresión de miR21, se observó una
importante diferencia en el perfil de expresión a 11mM de glucosa, registrándose un aumento de
4 veces en CMPs de pacientes con DM1 respecto de controles (74,9 versus 14,1). Esta
expresión disminuyó al incorporar la condición 50 nM de vit.D (12,2). Al evaluar Casp8, se
observó un aumento de la expresión al comparar CMPs de pacientes con DM1 versus controles
en 50nM de vit.D (0,83 versus 0,72). Conclusión: La vitamina D en dosis de 50 nM modula la
expresión génica de Casp8 y de miR21. Vitamina D en este modelo celular y a estas dosis sería
capaz de regular el proceso apoptótico del linfocito T, el cual se encuentra alterado en pacientes
con DM1.
Postulación A Beca
SI
Socio Patrocinador
Francisco Perez Bravo
Area Temática
Pediatría Diabetes
Tipo De Presentación
Oral