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PROYECTO DE INVESTIGACIÓN Inducción de líneas poliploides de Guadua angustifolia var. grandicaula, como estrategia de mejoramiento genético Modalidad 5 Menor cuantía Facultad : Ciencias Básicas y Tecnologías Programa: Biología Armenia-Quindío, Abril 2011 1 FICHA RESUMEN Título: Inducción de líneas poliploides de Guadua angustifolia var. grandicaula, como estrategia de mejoramiento genético Investigador Principal: Nohra Cecilia Rodríguez Castillo Coinvestigador: Germán Dario Gómez Marín Grupo de Investigación: CIBUQ Líneas de Investigación: Biotecnología Vegetal Facultad: Ciencias Básicas y Tecnologías Total de Investigadores: 2 docentes 2 estudiantes Entidad: Universidad del Quindío Lugar de Ejecución del Proyecto: Universidad del Quindío Ciudad: Armenia Duración del Proyecto: 2 años Tipo de Proyecto: Investigación Modalidad: 5 Menor Cuantía Valor Solicitado a la Universidad del Quindío: $ 16.700.000.oo Valor Total del Proyecto: $ 31.700.000.oo Descriptores / Palabras Claves: Poliploidización, Colchicina, Orizalina, Citometria de Flujo Resumen: La citogenética es una de las herramientas empleadas en el mejoramiento de las especies vegetales, a través de la implementación de técnicas como la obtención de poliploides, que consiste en duplicar el stock cromosómico adicionando colchicina u orizalina al medio de cultivo o inyectándola mecánicamente en las zonas con tejido meristemático. En la mayoría de las plantas, el incremento en el nivel de ploidía está relacionado directamente con el aumento del tamaño, de los frutos y del contenido nutricional, según lo reportan varios estudios, por esta razón la mayoría de las especies cultivadas corresponden a variedades poliploides que han surgido de manera espontánea o inducida. Teniendo en cuenta trabajos previos adelantados por nuestro grupo de estudio hemos encontrado una dotación diploide en Guadua angustifolia Kunth, una especie que presenta gran importancia económica, ya que por sus cualidades físico mecánicas la han convertido en un material preferido en el área de la construcción. Por esta razón, el grupo de estudio en genética adscrito al CIBUQ, viene adelantando estudios de dotación cromosómica y su caracterización por bandeo cromosómico, a fin de correlacionar las propiedades fenotípicas con las citogenéticas. En el grupo, pretendemos orientar los resultados obtenidos en las investigaciones previas hacia esta aplicación práctica de la técnica de poliploidizacion, para obtener materiales tetraploides y en ellos evaluar características fenológicas que sean de interés en las diferentes aplicaciones industriales Todos los aspectos relacionados con anterioridad permitirán exponer el trabajo académico e investigativo que se desarrolla en el alma matter, mediante la socialización a través de congresos nacionales e internacionales, publicaciones en revistas científicas y el desarrollo de por lo menos un trabajo de grado a nivel de pregrado, favoreciendo la formación científica de la universidad del Quindío y el fortalecimiento de sus grupos2 de investigación. FICHA DEL PROYECTO TITULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL: Nohra Cecilia Rodríguez Castillo, Bióloga, Lic. Biología, Msc Ciencias Agrarias, Genética y fitomejoramiento. GRUPO DE INVESTIGACIÓN: CIBUQ LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN: Biotecnología vegetal FACULTAD: Ciencias Básicas y Tecnologías Si necesita reconocimiento de docencia directa, especifique quienes y cuántas horas a la semana por cada uno, con el visto bueno del Decano y Director del programa respectivo. Este reconocimiento se considera una pre-aceptación para la ejecución del proyecto. Nombre del docente Hora/Semana Nohra Cecilia Rodríguez Castillo 5 Germán Dario Gómez Marín 3 Firma del Decano Firma Director Programa Aceptamos asumir COMO INVESTIGADORES la responsabilidad por la conducta científica del proyecto y entregar los informes escritos requeridos. Nombre Nohra Cecilia Rodríguez Castillo Germán Gómez Marín Firma Estudiantes participantes en el proyecto Nombre Programa Académico Estudiante pregrado Biología Estudiante pregrado Biología Cédula 52.254.714 Bogotá 41.916.189 de Armenia Semestre Últimos semestres Últimos semestres 1 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN PRESENTADO BAJO LA MODALIDAD: 5 Menor Cuantía Título del Proyecto: Inducción de líneas poliploides de Guadua angustifolia var. Grandicaula, como estrategia de mejoramiento genético Nombre de los Investigadores: Investigador principal: Nohra Cecilia Rodríguez Castillo Coinvestigador: Germán Darío Gómez Marín Auxiliar de investigación: Estudiante pregrado Estudiantes investigadores: Estudiante pregrado Grupo De Investigación: CIBUQ Línea de Investigación: Biotecnología vegetal 1. Objetivos 1.1. General Inducir la poliploidizacion en Guadua angustifolia var Grandicaula Kunth 1.2. Específicos Elaborar y estandarizar un protocolo para la induccion de poliploidia en condiciones de cultivo in vitro. Comparar la accion inductora de la endorreduplicacion de la colchicina y la orizalina Correlacionar las caracteristicas fenotipicas y genotipicas en los materiales poliploides obtenidos con los silvestres Fortalecer el grupo de investigación en genética adscrito al CIBUQ 2. Estado General del Tema 2.1. Guadua angustifolia, un material con potencial economico Guadua angustifolia es una especie leñosa perteneciente a la familia Poaceae, una de las familias más antiguas y abundantes, esta es considerada como cosmopolita y posee aproximadamente 600 géneros y 10.000 especies (Cruz, 2009); Guadua agustifolia sobresale dentro del género por sus culmos que alcanzan hasta 30 metros de altura y 25 centímetros de diámetro (Londoño, 2002). La mayoría de las poblaciones de guadua crecen entre 0 y 1500 m ocupando diversos hábitats, sin embargo, es frecuente observarlas a orillas de los ríos y quebradas, y en los valles interandinos en donde forma grandes sociedades llamadas "guaduales" (Gómez et al., 2001). 2 G. angustifolia es el tercer bambú más grande del mundo; está distribuido a través de Colombia, Ecuador y Venezuela. Existe tanto en la región tropical como en la subtropical, pero se encuentra en mayores áreas en los bosques húmedos y muy húmedos concentrándose en las laderas de montaña y en las riveras de los ríos. En Colombia esta especie está distribuida en la región central del país conocida como región cafetera, en esta zona se conserva un área de aproximadamente 20.000 hectáreas entre guaduales naturales y cultivados (Pérez, 2006). Esta especie es un material promisorio económicamente por sus características físico mecánicas del culmo, su plasticidad de propagación vegetativa y sexual y su rápida tasa de crecimiento comparado con otros materiales maderables, propiedades que la han convertido en una especie líder para múltiples usos, entre ellos la construcción y también en materia de muchos estudios que buscan establecer su diversidad genética, su flujo génico, su distribución, sus características morfofisiológicas y citogenéticas para mantener sus poblaciones estables y viables, ya que por su importancia también se convierte en objetivo de la tala indiscriminada. 2.2. Dotación cromosómica de la Guadua Los estudios en citogenética vegetal son de gran importancia ya que dan a conocer peculiaridades como la duración y determinación del ciclo celular, número y morfología cromosómica a través del uso de diferentes metodologías (Singh, 1993), igualmente, por la condición particular de los cromosomas como portadores de la herencia proporcionan criterios adicionales que contribuyen con la clasificación taxonómica y filogenética de las especies, esta correlacionado con la utilización de los caracteres citológicos de manera comparativa; además de que constituyen un requisito indispensable para la caracterización a nivel molecular (Heywood, 1968; Carvalho & Saraiva, 1993; Talledo et al., 1993; Talledo & escobar, 2004; Ferrer – Pereira et al., 2007; Sumner, 2003). En la literatura se encuentran algunos reportes para algunos géneros relacionados con guadua, que determinan unas amplias variaciones cromosómicas que van desde los 2n=46 hasta los 96 cromosomas, con números básicos que oscilan entre X= 6 hasta 14. Sin embargo, de acuerdo a estudios realizados por el grupo de estudios en genética adscrito al CIBUQ, la dotación cromosómica de Guadua angustifolia es igual 2n=46, arreglados en 23 parejas, clasificados en cinco de las seis categorías de nomenclatura cromosómica, siendo la categoría de telocéntrica la que más se presenta con el 35% de las parejas. Por lo que se considera que esta especie es un bambú leñoso diploide coincidiendo con algunos de los reportes existentes para el género y se propone que estos son clasificados según su tamaño como pequeños y agrupados en 5 niveles que oscilan entre 1,5 µm y 0,6 µm, el cariotipo para la especie es de tipo asimétrico con un índice intracromosomal de 0.987 (Valencia, 2010). 2.3. La Poliploidización y sus posibles beneficios La poliploidizacion es un mecanismo de duplicacion del material genetico que ocurre de manera natural o inducida, tal fenomeno se presenta por la no polimerizacion de la tubulina para formar el huso mitotico, este ensamblaje puede ser inhibido por factores como la temperatura o por ambientes 3 quimicos atipicos, principalmente por agentes mitogenicos como la colchicina, las altas concentraciones de hormonas como auxinas y recientemente por el uso de la orizalina. (Rodriguez y Bueno et al., 2006; Jahier, 1996; Fukui y Nakayama, 1996) Si la duplicacion se presenta dentro de la misma especie, de producen autopoliploides, mientras que si ocurre tras el cruzamiento de diferentes especies se originan alopoliploides. En la actualidad se cuenta con cultivos procedentes por ambos metodos y se considera que cerca del 70% de las angiospermas cultivadas corresponden a materiales poliploides. (Moscone, 2000; Escandon, 2006) La poliploidización inducida es un procedimiento útil para la obtención de nuevos cultivares, especialmente empleada en la mejora de especies ornamentales debido a que el aumento del nivel de ploidía suele producir gigantismo, aumento de tamaño de órganos como las flores, tallos, hojas y contenido nutricional. Pero también puede producir caracteres no deseados como una disminución en la velocidad de desarrollo (Cubero, J.I.,2003). 2.4. Poliploidia en Guadua angustifolia Var. grandicaula Desde el punto de vista botánico dentro de la especie Guadua angustifolia se reconocen de dos a cuatro variedades taxonómicas: bicolor, nigra, grandicaula y angustifolia (Londoño, 2000, Gómez, 2003) que contienen a los cinco biotipos estos son: macana, cebolla, castilla, rayada negra y rayada amarilla (Gómez et al., 2001; Cruz, 1994). De las cuales la variedad grandicaula presenta un gran potencial en la industria de la construcción por la calidad de las fibras del culmo. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en diferentes cultivares, resultaría útil inducir la poliploidización en este material con el propósito de incrementar su potencial industrial en la construcción. 3. Marco Teórico 3.1. Generalidades de Guadua angustifolia 3.1.1. Biotipos y variedades Las poblaciones naturales están sujetas a la selección natural, siendo seleccionados en cada hábitat los genotipos mejor adaptados a las condiciones ambientales características (humedad, precipitación, intensidad lumínica y suelos), de esta forma, surge la variación intraespecífica como consecuencia del efecto de clasificación y control de los factores del medio ambiente sobre las poblaciones heterogéneas. (Briggs & Walters 1969). Esta variación intraespecífica se conoce como biotipo. Cuando se seleccionan individuos que presenten características agronómicas de interés (rendimiento, resistencia a plagas y enfermedades, porte y calidad), dentro de una población heterogénea en un programa de mejoramiento genético, se registra en el Instituto Colombiano Agropecuario (ICA) como una nueva variedad comercial, siempre y cuando cumpla con las 4 características de estabilidad genética, distinguibilidad (capacidad de diferenciación morfológica) y novedad (Rodríguez y Bueno, 2006). 3.1.2. Taxonomía de Guadua angustifolia Teniendo en cuenta los parámetros ambientales y la acción de estos sobre la morfología de las especies, se ha establecido que Guadua angustifolia es un bambú leñoso perteneciente a la Familia Poacecae, a la sub-familia Bambusoideae y a la tribu Bambuseae y reúne aproximadamente 30 especies; dentro de las cuales G. angustifolia sobresale dentro del género por sus culmos que alcanzan hasta 30 metros de altura y 25 centímetros de diámetro. Para Colombia se han identificado cuatro variedades de G. angustifolia: var. bicolor (Londoño, 1989), var. nigra (Londoño y Clark, 1998), var. grandicaula y var. angustifolia (Gómez et al., 2001). Adicionalmente, al interior de las variedades esta especie exhibe una amplia variabilidad fenotípica como producto de las variaciones ambientales; de esta forma podemos indicar que la variedad angustifolia esta representada por cuatro biotipos diferentes conocidos como “macana”, “cebolla”, “cotuda” y “castilla” (Giraldo 1999; Cruz y Gómez 2000; Gómez et al., 2001; Marulanda et al., 2002). 3.1.3. Características morfológicas dentro de Guadua angustifolia Guadua angustifolia var. bicolor (Londoño, 1989): conocida comúnmente como el biotipo rayada amarilla. Es un bambú leñoso con espinas, rizoma simpodial paquimorfo. Culmo erecto, arqueado apicalmente, con rayas longitudinales amarillas y verdes cuando esta joven, se torna verde amarillento con el tiempo, con un diámetro 10 a 12 cm, y una altura de 15 a 18 m entrenudos huecos, cilíndricos, 15 a 30 cm de longitud. Vaina de hoja caulinar de 42 cm de longitud por 33 cm de ancho, lámina foliar de 10 a 12 cm de longitud por 6 a 8 cm de ancho (Londoño, 1989; Gómez et al., 2001). Según Londoño (1989) se encuentra distribuida en la cordillera occidental, en los departamentos de Cauca y Risaralda, en menor frecuencia en la cordillera oriental y central en los departamentos de Quindío, Tolima y Valle. Guadua angustifolia var. nigra (Londoño & Clark, 1998): Tambien llamada rayada negra. Es un bambú leñoso con una altura de 14 a 22. 4 metros. Con rayas longitudinales verdes y negras, cuando maduro estas rayas negras son más acentuadas, tanto en el culmo como en las ramas y algunas hojas (Gómez et al., 2001; Gómez, 2003). Actualmente se encuentra distribuida en el departamento del Quindío, en la hacienda Nápoles ubicada en el municipio de Montenegro a 1058 m y en el Centro Nacional para el Estudio del Bambú – Guadua, municipio de Córdoba; formando parte del banco de germoplasma a 1100 m. (Gómez et al., 2001). 5 Guadua angustifolia var. grandicaula (Gómez et al., 2001): esta variedad es el biotipo generalmente conocido como castilla o guadua macho. Es un bambú leñoso con culmo erecto, mayor de 25 metros de altura; hoja caulinar triangular, decidua; dorso café oscuro, hirsuta, tricomas pubescencia aterciopelada; vientre glabro y brillante; vaina con longitud mayor de 83 cm, ancho de lámina superior a 11 cm. Culmos que superan los 15cm de diámetro, además de tener una composición y disposición de las fibras que lo convierten en el material más idóneo en la industria de la construcción. Esta variedad se encuentra distribuida entre los 1100 a 1425 m en los departamentos de Risaralda, Caldas, Valle del Cauca y Quindío (Gómez, 2003). Guadua angustifolia var. angustifolia (Gómez et al., 2001): esta variedad contiene dos biotipos: macana y cebolla. El biotipo macana presenta plantas con tallos de paredes gruesas, distancia entre nudos más o menos regulares en todo el tallo, diámetros menores a 10 cm, presencia de abundantes ramás basales espinosas. Los rodales formados por este biotipo presentan tallos muy uniformes (Cruz, 1994) y la configuración general del bosque es relativamente menos desarrollado que los formados por G. angustifolia biotipo Cebolla. Sus bosques se presentan en suelos arcillosos o pobres nutricionalmente. Sin embargo su resistencia es sobresaliente debido a la configuración finamente agrupada de sus haces fibrovasculares (Cruz, 2009). El biotipo cebolla presenta plantas con tallos de paredes más delgadas, alcanzan mayores diámetros entre 10 y 13 cm, longitud entrenudos mayores de 25 a 40 cm, apariencia frondosa de sus bosques, tallos de diferentes diámetros dentro de un mismo rodal, posee pocas ramas basales, se conoce comúnmente como guadua blanda, guadua balsa o guadua hembra, es muy utilizada en la obtención de esterilla (Cruz, 1994). Se han desarrollado en suelos fértiles, húmedos pero no inundados. 3.1.4. Aplicaciones industriales Desde finales de la década anterior y durante la primera parte de esta, se han generado mayores expectativas alrededor de la transformación y la generación de valor agregado de la guadua, por la demanda de un mercado cada vez más exigente; esto aunado a la importancia que la guadua ha tenido en los mercados internacionales y la dinámica del mercado nacional, ha permitido que hoy se aprovechen mejor, desde el punto de vista productivo, las características físico-mecánicas de flexibilidad, bajo peso, costo y requerimientos tecnológicos para el manejo y aprovechamiento sostenible de G. angustifolia (Cruz, 1994; Gómez, 2003; Capera y Moreno, 2005). Hasta hace pocos años la importancia económica de G. angustifolia, se había circunscrito a la producción de esterilla y venta de tallos rollizos o enteros para ser usados como cimbras o postes en el sostenimiento de pisos en la construcción. La variedad Grandicaula sobresale en altura, resistencia, funcionalidad y alta durabilidad; propiedades mecánicas favorables que han hecho que sus tallos hayan sido utilizados como elemento fundamental en la construcción (Cruz, 2009). En la industria ha sido utilizada como fuente de materia prima, por lo que actualmente se desarrolla una cadena productiva entorno a iniciativas de procesos de industrialización de esta, dado su potencial en la generación de ingresos para las familias rurales, la sostenibilidad del recurso y la conservación de las aguas y los suelos. Sin embargo su uso ha estado dirigido a la construcción, la 6 producción de mobiliario, accesorios y artesanías, siendo esto un hecho que hace que la guadua juegue un papel importante en la economía del eje cafetero (Capera y Moreno, 2005). Recientemente en el país se han podido demostrar las calidades estéticas y estructurales que tiene la guadua, debidas a su forma cilíndrica y hueca, presencia de tabiques y a la calidad y composición de su fibra. Desde sistemas constructivos basados en tecnologías locales como el bahareque, hasta el desarrollo de grandes construcciones para exposiciones, iglesias, puentes y viviendas en donde se han incorporado estudios basados en demostraciones experimentales. También se ha aprovechado en la fabricación de productos artesanales, decorativos y de acabados (Ladino et al., 2004). 3.2. Caracteristicas citogeneticas en Guadua angustifolia Los estudios citogenéticos han revelado variaciones en el número cromosómico entre las especies vegetales, aun entre individuos de una misma especie. La determinación de la dotación cromosómica y el análisis de la estructura y morfología de los cromosomas, son instrumentos de gran aplicabilidad en la resolución de relaciones taxonómicas, es una herramienta eficaz en el establecimiento de las hipótesis filogenéticas entre taxones, en la identificación y caracterización de especies, ecotipos y variedades, por lo que se considera un carácter taxonómico importante que es especie-especifico. (Moscone 2000). Los estudios en citogenética vegetal se han desarrollado principalmente con especies cultivadas o que representan algún interés económico, con las cuales se han ido perfeccionando las técnicas que involucran tratamientos químicos y físicos, tales como pretratamientos, técnicas para suavizar los tejidos y eliminar la pared celular. Aunque los métodos son difundidos de manera general, requieren habilidad y experiencia por parte del citogenetista para obtener cromosomas bien extendidos y en un solo plano (Rodríguez y Bueno, 2006). Mediante el empleo de las diferentes técnicas citogenéticas se han logrado establecer variaciones cromosómicas, que aunadas a los caracteres morfofisiológicos y moleculares han validado las determinaciones taxonómicas, sistemáticas y evolutivas, permitiendo un acercamiento al conocimiento de su diversidad genética, información pertinente para plantear programas de conservación y/o mejoramiento. En este sentido, dentro de nuestro grupo de estudio se han realizado recientemente aportes a la citogenética de especies como la Guadua angustifolia, determinándose una dotación diploide con 2n= 46 cromosomas, organizados en cinco grupos de tamaño, los cuales varían entre 1.5 µm a 0.6 µm, también realizamos la primera propuesta de cariotipo a partir de datos morfológicos como lo es la posición relativa del centrómero y el tamaño relativo de los brazos cromosómicos. Con esta información se clasificaron según el valor de relación entre los brazos, siguiendo las normas propuestas por Levan et al., (1964) encontrando que las parejas 6 y 16 son metacéntricas estrictas (M), seguidas que aquellas que son metacéntricos no estrictos, por que poseen el centrómero en la región media del cromosoma sin que los brazos tengan la misma longitud (m), que para este caso están representados por las parejas 2,3,7,8,14,10 y 19; la clasificación siguiente son submetacéntricos (sm) que son las parejas 1,4 y 12; los cromosomas acrocéntricos (t) para esta especie están representados en las parejas 17 y 18 y por último se clasificaron los telocéntricos estrictos (T) siendo esta la categoría con el 35% de las parejas, estás son: la 5,9,11,13,15,21,22 y 23 (Figura 1) (Valencia, 2010). 7 I 1 sm II 2 m 3 m 4 sm 5 T 6 M 7 m 8 m 9 T 10 m 11 T 12 sm 13 T III IV 14 m 15 T V 16 M 17 t 18 t 19 m 20 T 21 T 22 T 23 T Pareja Cromosómic a 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Tamaño Relativo P Tamaño Q 1.5 µm 1.3 µm 1.3 µm 1.3 µm 1.3 µm 1.2 µm 1.2 µm 1.2 µm 1.2 µm 1.1 µm 1.1 µm 1 µm 1 µm 0.9 µm 0.9 µm 0.8 µm 0.8 µm 0.8 µm 0.7 µm 0.7 µm 0.7 µm 0.6 µm 0.6 µm 0.4µm 0.5 µm 0.5 µm 0.3 µm 0.1 µm 0.6 µm 0.5 µm 0.5 µm 0.1 µm 0.4 µm 0.1 µm 0.3 µm 0.1 µm 0.4 µm 0.1 µm 0.4 µm 0.1 µm 0.1 µm 0.3 µm 0.1 µm 0.1 µm 0.1 µm 0.1 µm 1.1µm 0.8 µm 0.8 µm 1 µm 1.2 µm 0.6 µm 0.7 µm 0.7 µm 1.1 µm 0.7 µm 1 µm 0.7 µm 0.9 µm 0.5 µm 0.8 µm 0.4 µm 0.7 µm 0.7 µm 0.4 µm 0.6 µm 0.6 µm 0.5 µm 0.5 µm Relación de los brazos (Q/P) 2.75 1.6 1.6 3 12 1 1.4 1.4 11 1.7 10 2.3 9 1.25 8 1 7 7 1.3 6 6 5 5 Clasificación sm M m sm T M M m T M T sm T m T M t t m T T T T Figura 1. Caracterización Cariotípica de Guadua angustifolia (Tomado de Valencia 2010) Según lo propuesto por Fukui y Nakayama (1996) esta especie posee cromosomas pequeños ya que su tamaño relativo se encuentra entre valores 0.6 - 1.5 µm lo que es común dentro de la familia Poaceae. Stebbins (1966), propone la hipótesis de que las plantas primitivas presentan cromosomas grandes, mientras que las plantas evolutivamente recientes poseen cromosomas pequeños y ciclos de vida reducidos. La determinación del número cromosómico puede ser una parte integral para el estudio de la sistemática en plantas así como para establecer programas de mejoramiento; los estudios de cariotipo y tamaño cromosómico son poco comunes, sin embargo, el cariotipo y número cromosómico cambia a través de la historia evolutiva de los grupos taxonómicos; por lo tanto se ha visto que en los últimos años la evaluación de la evolución cromosómica de los grupos ha enriquecido a los datos filogenéticos y moleculares (Crawford et al., 2005). 3.3. Poliploidizacion en especies vegetales La inducción de la poliploidía se ha utilizado dentro de los programas de fitomejoramiento por las ventajas que esta trae en la estimulación de algunas características de interés agronómico como tamaño de la planta, del fruto y concentración de nutrientes entre otras, ya que se duplica la información de los genes y como se menciono anteriormente con algunos pretratramientos se puede inducir la producción de organismos poliploides a partir de células somáticas o sexuales (Susuki et al. 1996). Existen múltiples aplicaciones de esta tecnica y el consecuente incremento en algunas de las características morfológicas, uno de los ejemplos lo proponen Takamura y Miyajima (1996), 8 quienes trabajaron secciones tubulares de Cyclamen persicum cultivado in vivo, induciendo la duplicación cromosómica por inmersión en colchicina durante 1 a 7 dias; posteriormente Väinölä (2000), realizo una aplicación in vitro de la poliploidización sobre híbridos de Rhododendron inyectando una solución de colchicina a los explantes, mientras que Eeckhaut, et al. (2002) trabajaron en Rhododendron simsii, adicionando colchicina a embriones de 3 a 7 días in vitro, durante tres semanas, en todos los casos se logro un incremento en el área foliar de los materiales tetraploides en relación con los diploides. Escandon et al., (2005), lograron nuevas variedades comerciales al duplicar el material genético de Scoparia montevidiensis, con el uso de la colchicina bajo las concentraciones 0.0; 0.1; 0.05; 0.01 y 0.001 (24 y 48 hrs). De un total de 364 plantas tratadas se lograron 4 plantas tetraploides y 16 quimeras. En las plantas tetraploides se logro un incremento en el área foliar, el diámetro del tallo y en el tamaño de las flores. Rodríguez y Bueno (2006), trabajaron con un material diploide de Physalis peruviana L. con 2n=24 y 32 y tras la duplicación cromosómica con colchicina al 1% solubilizada en DMSO tanto in vivo como in vitro, lograron obtener un material tetraploide con 2n=4X=64 cromosomas, material que presento un incremento en la actividad fotosintética, en el numero de estomas y en el tamaño de los frutos. Alderete, et al., (2010), realizaron un estudio de poliploidización en Mecardonia tenella, mediante el uso de colchicina (en dimetil metil sulfóxido, DMSO, 1%) al 0.01 y 0.001 % P/V. en condiciones in vitro, en los organismos detectados como poliploides se presentaron flores más grandes y una mayor superficie foliar. Paredes y Mattos (2008), Indujeron la poliploidia en Aloe vera, la duplicación cromosómica en las células poliploides causó un incremento en la altura de las plantas y en la longitud, ancho, espesor y volumen foliar con respecto a las plantas diploides y quimeras, por lo que estimaron que la poliploidización podría constituir una alternativa para aumentar la producción de biomasa celular en esta especie Como se puede notar, la inducción de la poliploidia en la mayoría de los casos se logra con el uso de la colchicina, la cual participa en la aglutinación química con algunos receptores intracelulares, esta debe ser aplicada a bajas concentraciones (0,001 a 1%) durante 1-2 horas para producir cambios en el estado coloidal del citoplasma y causar desarreglos en el huso mitótico, aumentando así la fluidez en el núcleo; por esto el exceso en la concentración y en el tiempo de tratamiento puede inducir a la poliploidía (Borisi y Taylor, 1967; Sharma & Sharma 1980), por otra parte se sabe que la colchicina es un agente mitogenico muy costoso y altamente contamínate, por esta razón se han implementado el uso otros productos con el mismo objetivo, uno de ellos es la orizalina. Trabajos realizados sobre plantas ornamentales han permitido el incremento en el tamaño de la flor y su duración el florero (Chivata, 2008). 9 Teniendo en cuenta lo anterior se concluye, que independientemente del taxa poliploidizado y de sus hábitos de crecimiento, los cambios en los niveles de ploidía son una buena fuente de variabilidad natural y/o artificial y el uso de agentes poliploidizantes como la colchicina y la orizalina junto con el empleo de medios de cultivo in vitro son de gran efectividad para conseguir nuevas variedades o variaciones de genotipos pre mejorados con alto potencial económico. 3.4. Mecanismos de propagación In vitro de la Guadua angustifolia Guadua angustifolia, cuenta con los mecanismos de reproducción de todas las poaceas, es decir, propagación sexual y vegetativa; sin embargo la eficiencia de propagación obtenida a partir de esquejes ha reducido de manera natural la producción de semillas, razón por la cual, raras veces estas plantas florecen y liberan estas estructuras reproductivas. El espermatofito constituido por dos partes: una subterránea, el sistema radical y otra aérea que consiste en un culmo y las hojas, son los que primordialmente se emplean en prácticas de propagación de la especie con fines ambientales e industriales. Las plántulas generadas de manera vegetativa son denominadas chusquines, los cuales después de desarrollar un sistema radical y de haber alcanzado una altura aproximada de 10 centímetros, comienzan a generar pequeños rizomas proporcionales al tamaño de la parte aérea, a su capacidad fotosintética, a las condiciones climáticas y a la capacidad de almacenar reservas alimenticias por parte del rizoma (Cruz, 1994). Con propósitos de realizar mecanismos de propagación masiva se han intensificado los estudios en micropropagación in vitro, para lo cual se han estandarizado las técnicas y medios de cultivo adecuados teniendo en cuenta el objetivo buscado, los cuales van desde el desarrollo de callos (Marulanda et al., 2004) hasta la propagación de brotes (Marulanda et al., 2002; Diaye et al., 2006,; Lopez, 2007 ) y explantes nodales (Jiménez et al, 2006). Los cultivos in vitro, permiten mantener las condiciones medio ambientales constantes y manejar la respuesta fisiológica deseada, como el incremento de la división celular en ápices radicales, modificando la composición de los sustratos empleados en los cultivos. (Roca y Mroginski 1991). Dependiendo de la respuesta que se busque, el medio M&S puede ser enriquecido con vitaminas, reguladores de crecimiento (Hormonas), aminoácidos y agentes mitogénicos (Murashige y Skoog, 1962). La multiplicación in vitro en la familia Poaceae se ha realizado mediante embriogénesis somática (Lin et al., 2004) y propagación por yemas axilares y microestacas (Bag et al., 2000; Ramanayake et al., 2001). Con las ultimas se logra una tasa de multiplicación muy alta. En el género Guadua se Marulanda et al., (2002), logro la regeneración por organogénesis directa a partir de explantes nodales y Rodríguez (2003) reportó la siembra y desarrollo in vitro de explantes iníciales de microestacas provenientes de plantas, para posteriormente subcultivar los cuellos de rizomas y los 10 primeros nudos basales. Se utilizaron dos medios de cultivo: sales de Murashige & Skoog y Nitsh & Nitsh . Se logró 100% de aclimatación de plantas completas. 3.5. Caracteres que se podrían mejorar en Guadua angustifolia por poliploidia Las características morfológicas y fisiológicas presentes en Guadua angustifolia le han conferido propiedades idóneas que se podrían potencializar mediante programas de mejoramiento, características como el diámetro del culmo, contenido de fibra, longitud entre nudos y altura, serian los principales objetivos de un programa. Algunas de estas características de interés se han estudiado ampliamente y se comentan a continuación: En G .angustifolia el tejido del culmo está compuesto, como en los otros bambúes por: a) corteza, b) células de parénquima, c) fibras y d) haces vasculares los cuales están conformados por células de esclerénquima, vasos (metaxilema, floema, protoxilema) y por tubos cribosos con células acompañantes. Según Liese (1998), un culmo está conformado en un 52% por tejido de parénquima, en un 40% por fibras y en un 8% por tejido conductivo, estos valores varían con la especie. En el caso de G. angustifolia esta composición es: 51% parénquima, 40% fibras y 9% tejido conductivo (Londoño, 2002) Comparativamente con otros bambúes tropicales y subtropicales, G. angustifolia presenta un porcentaje de fibra relativamente alto que le proporcionan características físico mecánicas determinadas por la gravedad especifica, la cual varia aproximadamente de 0.5-0.9 gr/cm. La gravedad específica depende principalmente del contenido de fibra, del diámetro de la fibra y del espesor de la pared de las células, por lo tanto varia considerablemente dentro de un mismo culmo y entre especies. La gravedad especifica se incrementa considerablemente en los primeros tres (3) años durante el proceso de maduración del culmo debido al engrosamiento de la pared de la fibra, sin embargo, durante los siguientes años este incremento se da de manera ligera. La parte externa del culmo, con su mayor densidad de fibra, tiene una gravedad específica más alta que la parte interna. Esta concentración de fibras en la capa externa es lo que se denomina en términos de ingeniería "maximización del radio por giro"(Londoño, 2002) . Los nudos tienen una gran influencia en la resistencia mecánica del culmo: presentan una gravidez especifica mayor, un menor volumen de encogimiento y una menor resistencia tensil que los entrenudos por aquello de tener fibras más cortas y haces vasculares distorsionados (Londoño, 2002), de manera que entre mayor sea la distancia entre los nudos, mejor será la calidad del culmo y la altura alcanzada. 3.6. Determinación del nivel de ploidía Una vez inducida la poliploidiación debe realizarse una evaluación del nivel de ploidía, para lo cual existen varios métodos, los cuales se pueden combinar de acuerdo a la disponibilidad de equipos y 11 reactivos, entre mas información se logre establecer mas fidedigno es el valor encontrado. Dentro de los cuales se menciona el número de estomas por área, el número de cloroplastos por célula guarda, el número de cromosomas y la cantidad relativa de DNA. De los métodos mencionados, el método más efectivo comprende las herramientas de la citogenética. Gracias a los avances desarrollados en el grupo de estudios en genética adscrito al CIBUQ, en la Universidad del Quindío, hoy contamos con un método estandarizado por Valencia, (2010) para realizar este conteo. La determinación de sus cariotipos proporciona información del número básico (x) de grupos de ligamiento génico, proporcionando un indicador de la similitud genética entre poblaciones y especies (Rieger et al . 1982). El análisis de estos parámetros sumado a la determinación de la cantidad relativa de DNA a través de citometría de flujo, permite corroborar la información lograda con las herramientas citogenéticas, además de conocer la identidad de los genomas de estas especies y evaluar las variaciones intra e interespecíficas (citotipos) entre ellas. Estos estudios ayudan a esclarecer la taxonomía del grupo, su biodiversidad, y a establecer proyectos de mejoramiento, biotecnología y biología molecular, además de plantear estrategias de conservación in situ y ex situ. (Palomino et al., 2005) 4. Aspectos Bioéticos Los aspectos Bioéticos del proyecto se tendrán en cuenta durante las tres fases del desarrollo del proyecto como se desglosa a continuación: La primera fase, involucra la elaboración del anteproyecto y la planeación del proceso de investigación, por lo tanto, teniendo en cuenta los principios éticos y las orientaciones para la protección de organismos vivos, en esta propuesta se plantea que los chusquines son sacados de su hábitat natural, pero son propagados convencionalmente lo que no implica daños a los ecosistemas, por otro lado este material permanecerá en las mejores condiciones tanto in vivo como in vitro, sin que la viabilidad de los individuos se vea drásticamente afectada. Se establece que la propuesta presenta objetivos claros, aborda un problema de investigación que repercute en los ejes misionales de la universidad, siendo coherente con la metodología planteada y acorde con la revisión bibliográfica que parte de publicaciones clásicas hasta las más recientes. La segunda fase, se relaciona con su diseño metodológico, el cual se ha propuesto pensando en la practicidad, factibilidad, economía y permisibilidad del desarrollo de las actividades que conllevaran a la respuesta de la pregunta de investigación. Para la ejecución de este proyecto se cuenta con un personal académico e investigativo idóneo, con experiencia en el área y que identifican la necesidad de realizar estudios básicos teniendo en cuenta las condiciones necesarias para la conservación de los ecosistemas con el mínimo de intervención posible, así mismo, se contará con auxiliares de investigación que deben ser estudiantes de últimos semestres del programa de biología, y que desean desarrollar sus trabajos de grado en el área, para quienes se solicita un mínimo presupuesto a fin de contribuir de alguna manera con su función pre-profesional como futuros investigadores. El diseño metodológico también implica que el procesamiento de las muestras deberá realizarse teniendo en cuenta las normas de bioseguridad a fin de no afectar el ecosistema como tampoco la 12 salud de los investigadores, esto, porque algunos de los reactivos que se emplean en los procedimientos son clasificados con un índice de toxicidad agudo y catalogados como teratogénicos. Por lo anterior es necesario aclarar que los explantes de Guadua en medios de cultivo in vitro, serán inyectados con un compuesto toxico llamado colchicina, el compuesto es metabolizado por la planta de manera que este compuesto no es liberado al ambiente, por otro lado, para la manipulación del compuesto los investigadores utilizaran guantes y tapabocas adecuados con el nivel de seguridad requerido. Teniendo en cuenta que los trabajos que no están técnicamente bien constituidos no son bioéticamente viables, con la aprobación del mismo se adquiere el compromiso ético de no incurrir en inconductas tanto en el manejo de la información publicada como en los resultados que la presente investigación arroje. La tercera fase, se relaciona con el producto vegetal que se logra del presente proyecto; las plantas que sean identificadas como material poliploide serán sometidas a pruebas especificas bajo condiciones de invernadero, a fin de evaluar sus principales características metabólicas como tasa de crecimiento y actividad fotosintética entre otras, para establecer las posibles consecuencias de liberar estas plantas y permitir el flujo génico de estas con las plantas silvestres. Sin embargo, aclaramos que esta fase no está contemplada dentro de los objetivos del presente proyecto, de manera que las plantas permanecerán in vitro. Las tres fases mencionadas contemplan el nivel cultural y socioeconómico, ya que el objeto de estudio, es decir, la guadua, es un eje primordial en la economía del eje cafetero, así como en sus tradiciones, constituyendo por esto un elemento promisorio para la economía local, regional y nacional; dentro del enfoque social también cabe resaltar que los resultados que se obtengan serán socializados en actividades públicas a fin de contribuir con la divulgación del conocimiento de la especie, tanto en el sector académico (congresos, simposios) como en el productivo ( Gremios de Guadualeros, INDUGUADUA). Finalmente, como el objetivo primordial del proyecto es lograr materiales de guadua con mejores características para la construcción, de manera conjunta, el programa de Biología, el Centro de Estudios e Investigación en Biodiversidad y Biotecnología (CIBUQ), el grupo de estudios en genética (GEGUQ), y el estamento legista de la Universidad del Quindío, velaremos por el respeto a los derechos de obtentor como es normativizado por la Unión Internacional para la Protección de las Obtenciones Vegetales (UPOV) cuyo objetivo es la protección de las obtenciones vegetales por un derecho de propiedad intelectual. 5. Impacto social y económico 5.1. Impacto económico La inducción de poliploides representa de manera indirecta impactos económicos a partir de los resultados obtenidos, ya que la guadua es una especie vegetal de gran importancia en lo económico y en la cultura regional, razón por la cual, desde hace algún tiempo viene siendo tratada como 13 objeto de investigación desde entidades estatales, corporaciones regionales, universidades y grupos privados de investigación. Sin embargo, no hay esfuerzos aunados que permitan un conocimiento integral de la especie a fin de poder explotarla mejor y conducirla a planes de conservación y mejoramiento efectivos. Con los resultados arrojados por el presente proyecto se podrían lograr líneas mejoradas en las principales características agronómicas en términos de rendimiento y características maderables. 5.2. Impacto social En el ámbito social, el proyecto es un valioso aporte al conocimiento de la especie, y permitirá la incorporación de programas de mejoramiento, con la posible obtención de líneas genéticamente mejoradas, lo cual abre un largo camino en la aplicación práctica de la citogenética y por ende es un estimulo a la consolidación de convenios universidad- empresa. Además de responder a los tres ejes misionales que contempla la universidad: Docencia, Investigación y Proyección social, mediante la formación de investigadores, la capacitación de estudiantes mediante su vinculación directa en el proyecto como tesistas y/o auxiliares de investigación, además de la consolidación de un grupo de estudio en el área de la citogenética que aportara conocimiento y será socializado mediante la elaboración de trabajos de pregrado, asistencia a congresos nacionales e internacionales (en las modalidades de Poster y/o Conferencia) y charlas magistrales de divulgación científica. 6. Planteamiento del problema Guadua angustifolia, es una especie muy importante desde el punto de vista ecológico e industrial tanto para el Departamento del Quindío como para el país, razón por la cual se ha estimulado la investigación desde las diversas áreas del conocimiento con que se relacione. Por esta razón el grupo de estudios en genética adscrito al CIBUQ, estableció las variaciones citogenéticas encontradas en esta especie a fin de contribuir con el conocimiento necesario para dilucidar las relaciones taxonómicas, además de reconocer que la variación morfológica es correspondiente con las variantes citogenéticas halladas, Por esta razón se quiere dar inicio a un programa de mejoramiento genético en Guadua angustifolia var. Grandicaula, para lo cual se pretende evaluar si con el empleo de la colchicina y la orizalina se logra la inducción de la poliploidía, y si esta es lograda, determinar si el nivel de ploidía favorece el incremento de alguna de las características de interés agronómico. 7. Justificación Las corporaciones autónomas regionales de los departamentos de Caldas, Quindío, Risaralda, Tolima y Valle del Cauca, reconociendo la importancia de la guadua, más específicamente de Guadua angustifolia, han recomendado el estudio de la diversidad genética dentro de la especie, y la actualización de los bancos de germoplasma, lo cual orientaría el manejo de los guaduales, el registro de las áreas cubiertas, su clasificación taxonómica, las tasas de aprovechamiento, el manejo sostenible de los guaduales, la creación de un registro de guadua natural en el área concerniente a cada uno de los departamentos del eje cafetero y su mejoramiento genético, principalmente el 14 departamento del Quindío que registra una mayor diversidad y riqueza para la especie (Londoño, et al., 2006). En el contexto señalado anteriormente, es relevante que en el departamento del Quindío se promueva el desarrollo de investigaciones que apunten a ampliar el conocimiento existente de la especie y generar elementos que permitan la confirmación de los existentes. Las bondades que se pueden derivar de un incremento en el nivel de ploidía son el motivo de continuar la investigación en Guadua dentro de nuestro grupo. Programas de mejoramiento genético dedicados a la guadua, deberán partir del conocimiento y caracterización de cada una de las especies y biotipos de interés, actualmente contamos con algunos de estos conocimientos morfológicos, anatómicos, fisiológicos, moleculares y citogenéticos, con ellos se puede orientar estos programas. Estas investigaciones se pueden desarrollar dentro de los grupos de investigación de la Universidad del Quindío, permitiendo además, la formación de investigadores y la capacitación de estudiantes mediante el desarrollo de por lo menos un trabajo de grado y la divulgación de los resultados a través de la participación en congresos, conferencias y/o simposios, fortaleciendose con esto el grupo de estudios en genética. 8. Metodología: 8.1. Fase de campo: Colecta de material vegetal Para el presente estudio se colectará material vegetal (chusquines, esquejes) y sexual (semillas), de Guadua angustifolia var. grandicaula, procedentes de la Reserva Natural del Ocaso y del Centro Nacional para el estudio del Bambú Guadua, localizados en los municipios de Quimbaya y Córdoba (Quindío) respectivamente. Parte de los chusquines colectados serán llevados a un invernadero adecuado para el enraizamiento y propagación para obtener el material idóneo para la fase de micropropagación 8.2. Fase de laboratorio 8.2.1. Cultivo in vitro e induccion de poliploidia Para la propagacion in vitro se emplearan segmentos nodales, los cuales se desinfectaran de acuerdo al protocolo propuesto por Jimenez et al., 2006; Marulanda et al., 2003., Lopez, 2007), empleando un detergente alcalino, una mezcla de Benomyl y Agrimycin, seguidos de hipoclorito de sodio (1,5%), para reducir la contaminación externa en los explantes. Los segmentos serán sembrados en un medio M&S, y serán sumergidos en una solución de colchicina (en dimetil metil sulfóxido, DMSO, 1%) al 0.01 y 0.001 % P/V durante 24 y 48 hs; el cultivo será suplementado con 0.25 mg/L de BAP (6-bencil amino purina) y las condiciones de cultivo serán de 16 h de luz, 21±2 ◦C, con una irradiancia de 52 μmol.mˉ².seg, según lo indica 15 Alderete, et al. (2006). Los brotes enraizados se transferirán a cultivo en cámara húmeda con turba, perlita y vermiculita fina en proporciones 3:1:1 respectivamente (V/V) (Escandón, et al. 2005) 8.2.2. Determinación del nivel de ploidía Para establecer el nivel de ploidía se realizaran tres procedimientos: anatómicos, citogenéticos y moleculares. Para la evaluación anatómica se determinara el número de estomas/mm2 y de cloroplastos por célula guarda, utilizando el método de Caldwell & Stone (1932) modificado con la técnica de Taleb (1996) y Dumas(1996), que consiste en aplicar una película de esmalte de uñas incoloro, diluido en acetona 1:1 (v/v) sobre la región central de la superficie abaxial de las hojas, escogidas al azar para cada variedad evaluada; una vez seca la película de esmalte, se retirara la epidermis y se tincionará con lugol para determinar el número de cloroplastos en las células guarda y con nitrato de plata en solución al 1% para determinar el número de estomas por mm2. Se contabilizara el número de cloroplastos bajo el microscopio óptico con un aumento de 40X, mientras que el conteo de estomas se realizará sobre un área de 1mm2 con un aumento de 10X en quince áreas seleccionadas aleatoriamente. Los resultados obtenidos a partir de estas técnicas serán contrastados con los derivados de técnicas citogenéticas y moleculares, detalladas a continuación. Para la técnica citogenética se empleara el protocolo estandarizado para la especie por Valencia (2010), a partir de apices radiculares colectados cerca de las 8:30 am se inhibirá la mitosis con colchicina al 0.1% durante 2 horas, luego se fijara con carnoy (3:1) por 24 horas, y para degradar la pared celular se realizara una Hidrolisis doble con HCl 2N durante 20 minutos a 60°C y una hidrólisis enzimática con Celulasa 3.6% Pectinasa 6% Macerozima 0.4% a 37°C por 2 horas, seguido de la tinción con orceína acética durante 30 minutos a 50°C. y finalmente el squash entre lamina y laminilla Mientras que la determinación del tamaño relativo del DNA se llevara a cabo con un citómetro de flujo (CF) (Partec CA ) alineado con núcleos de eritrocitos de pollo (Palomino et al . 2003). Los núcleos serán aislados de acuerdo a Palomino et al . (2003). Para liberar los núcleos, se picaran 120 mg de tejido foliar en una caja de petri, con 1 ml de solución buffer fosfato. Luego se filtrara con una malla nylon de 50 μm. Los núcleos se filtraran y el residuo se suspenderá en 200μl de una solución de ácido cítrico/Tween y se incubara por 10 minutos a temperatura ambiente. Se añadirá 1 ml de 0.4M Na2HPO4 y yoduro de propidio (IP), colorante fluorescente y RNAsa a una concentración de 50 μl/ml y se analizara al menos 10,000 núcleos en el CF. El área y los coeficientes de variación (CV) de los histogramas, se calcularan con el programa DPAC (Partec GMBH), los valores de CV deben ser menores a 5 % para validar las repeticiones (Palomino et al., 2005). 8.3. Análisis de datos Para el análisis de los datos morfológicos de las plantas ( estomas y cloroplastos) se realizaran análisis de varianza ANOVA y comparaciones múltiples de Tukey. Para los resultados citogenéticos, una vez obtenidas unas buenas metafases estas serán localizadas en un microscopio óptico (Zeiss) con el objetivo 100X adicionando aceite de inmersión, y se harán 16 los respectivos registros con el sistema de digitalización de imágenes adaptado al microscopio marca Leica las cuales se procesaran con el programa ATI, que permitirá archivar imágenes en el formato JGP; con estas imágenes se establecerá el numero y la morfometría de los cromosomas con ayuda del software LUCIA. La obtención de cromosomas, la digitalización de imágenes y análisis de datos se realizaran en el laboratorio de biotecnología de la universidad del Quindío El tamaño del genoma se calculara con la siguiente fórmula: X histograma G /G 2C ADN = X 2C ADN planta referencia (pg) X histograma G / G planta referencia Según Bennett et al. (2000), la composición de los genomas es 1 pg de ADN = 980 Mpb, 9. Resultados esperados 9.1. Resultados directos e indirectos Estandarizacion de un protocolo para la obtencion de segmentos internodales in vitro bajo las condiciones del laboratorio de Biotecnologia UQ Establecimiento de un protocolo para la obtencion de poliploides Determinación de los niveles de ploidia en los materiales de Guadua angustifolia var, grandicaula inducidos con colchicina y orizalina Relacionar tecnicas no citogeneticas de determinación de los niveles de ploidia con las citogeneticas y moleculares Fortalecer el grupo de estudios en genética adscrito al CIBUQ a través de los trabajos en citogenética de la Guadua Formación de investigadores en el area de la citogenetica Producción de por lo menos un trabajo de grado (pregrado) Divulgacion de conocimiento citogenético de la guadua mediante la particiacion en congresos nacionales y/o internacionales y publicaciones en revistas cientificas indexadas Generar un posible programa de mejoramiento genetico en Guadua angustifolia var grandicaula 17 9.2. Estrategias de comunicación Participación por lo menos en un congreso nacional y/o internacional científico en la modalidad de ponencia Publicación por lo menos de un artículo científico en una revista indexada Socialización de los resultados en una conferencia o simposio de carácter científico 10. Presupuesto 10.1 Presupuesto general: VALOR EN MILES RUBROS Especie recurrente Personal Investigador Principal Coinvestigadores Auxiliares de investigación (dos) Reactivos e insumos Reactivos cultivos in vitro Reactivos citogenética Reactivos citometría de flujo Equipos Microscopios Citómetro de flujo Cámara Fotográfica con Adaptador al Microscopio Computador portátil Valor solicitado a U. Quindío 6500 3900 2600 (1300 c/u) 600 400 1600 2000 1200 800 500 5000 1000 18 Materiales Papelería Salidas de campo Transporte y alimentación colecta de material Socialización Congreso en Colombia Congreso internacional Publicación en revista indexada Total parcial 500 500 500 3000 100 13.700 Total general. 18.000 $ 31.700 10.2. Presupuesto por vigencias (miles de pesos): Valor en miles Rubro Año I Año II Total por rubro Personal (2) Auxiliar de investigación 1300 1300 1350 Reactivos 4800 5.000 Equipos 6000 10.000 Papelería 200 300 400 Salidas de campo 400 100 500 19 Socialización 3600 4000 Internal publicación 500 Total por semestre 12.700 5.300 Total 18.000 10.3. Descripción de gastos de personal (miles de pesos) equipo en el proyecto Cámara Fotográfica con Adaptador al Microscopio Computador portátil Adquirir Propósito fundamental del Descripción del equipo Existente 10.4 Detalle general de los equipos y licencias de software (miles de pesos) Costo (miles) Registro fotográfico de las imágenes emitidas por el microscopio no si 5.000 Manejo de datos y procesamiento general no si 1.000 6.000 Total Descripción de Gastos de Personal (Miles De Pesos) Nombres y Apellidos Cédula de Ciudadanía Función en el Proyecto Título Dedicación Horas/ No. De Valor Total Meses Semana Formación básica Postgrados Nohra Cecilia Rodríguez 52254714 Bióloga Germán Darío Gómez Marín. Lic. Biología y E. M.Sc. Biología A. Vegetal 41.916.189 M.Sc genética y Investigadora fitomejoramiento principal Coinvestigador 5 18 5200 3 18 3200 Auxiliar de investigación NN 6 18 1300 Auxiliar de investigación NN 6 18 1300 Total Recurrente: 8.400 Total Solicitado Universidad del Quindío 2.600 Total 20 11.000 10.5 Materiales e insumos (miles de pesos) Justificación de uso dentro del Proyecto Descripción Colchicina Se requiere para detener el ciclo celular Orizalina Valor Cantidad Costo (miles) Unitario 1000 1g 1000 500 50ml 500 100ml 150 Dimetilsulfóxido Desestabiliza fluidez de membrana 150 Malla Nylon 50um Requeridas para filtrar los núcleos 200 RNAsa Enzima requerida para purificar DNA 250 500ul 250 Colorante fluorescente Para cuantificar DNA 650 250ul 10g 650 Yoduro de propidio Para cuantificar DNA 100 celulasa Para citogenética 350 50g 350 pectinasa Para citogenética 300 50g 300 Macerozima Para citogenética 300 50g 300 Medio M&S Para propagación y medio de poliploidización 1000 5000ml 1000 50u 200 100 Total 4.800 Detalle general de papeleria (miles de pesos) Valor Descripción Justificación de uso dentro del Proyecto Cantidad Unitario Papelería Necesaria para el desarrollo de todos los aspectos relacionados con el proyecto y la elaboración del informe final. Total Varios Costo (miles) 500 500 10.6 Descripción detallada de otros rubros (miles de pesos) Rubro Detalle Costo 21 Salidas de campo Socialización Salidas de campo para colectar material vegetal a Quimbaya y Córdoba (Quindío) a la Reserva Natural del ocaso y al Centro Nacional para el Estudio del Bambú Guadua Asistencia a un congreso nacional (Inscripción, pasajes, alojamiento y viáticos). Publicación en revista científica indexada Total 500 3600 4.100 22 11. Bibliografía citada Ackerman, W. 1971. Genetic and cytological studies with Camellia and related genera. Agricultural Research Service U.S.D.A. Technical. Pp 79 -83. Alderete, L. M.; Escandón, A. S. y Hagiwara, J. C. 2006. Obtención de una nueva variedad de Mecardonia tenella mediante poliploidización. Uso de colchicina en condiciones in vitro. On line: http://www.ejbiotechnology.info/content/vol9/issue3/full/6/. Borisy., G. & Taylor., E. 1967. The Mechanism of Action of Colchicine Binding of Colchincine-3h To Cellular Protein. 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Biología vegetal Universidad del Quindío- Universidad Tecnológica de Pereira- Universidad de Caldas. Marulanda, M. L.; Márquez, P.; Londoño, X. 2002a. AFLP analysis of Guadua angustifolia Poaceae:Bambusoideae) in Colombia with empahsis on the Coffeee Region. J Am Bamboo Soc 16 (1): 32-42. Marulanda, M., & Gonzaga, L. 2010. Propagación Via Brotacion de Yemas Axilares. Biodiversidad y Biotecnología de la G. angustifolia Kunth. Universidad Tecnológica de Pereira. 35-42p. Marulanda, M., Carvajalino, M., Vargas, C., & Londoño X. 2002. La Biotecnología Aplicada al Estudio y Aprovechamiento de la Guadua. Memorias del seminario taller avances en la investigación sobre Guadua. Pereira-Colombia. 24 Marulanda, M., Gutierrez, L. y Marquez, m. 2005. Micropropagacion de Guadua angustifolia. En: Actualidades biológicas 27(82)5-15 Moscone, E. 1990. Chromosome studies on Capsicum (Solanaceae) L. Karyotype analysis in chacoense. Brittonia 42 (2): 147-15 Murashige, T. and Skoog, F. 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Universidad del Quindio- Colombia. 26 12. Curriculum Vitæ de los Investigadores: INVESTIGADOR PRINCIPAL NOMBRE: FECHA DE NACIMIENTO: LUGAR DE NACIMIENTO: DIRECCIÓN: DIRECCIÓN PARTICULAR: E-MAIL: DOCUMENTO DE IDENTIDAD: OTROS IDIOMAS: Nohra Cecilia Rodríguez Castillo Enero 17 1975 Bogotá- Colombia Universidad del Quindío. Bloque de Ciencias Básicas. 3º Piso. Programa de Biología Cra. 13 No. 9N-104 Geminis Apto 303 [email protected] 52254714 de Bogotá Inglés EDUCACIÓN: FECHA TÍTULO, INSTITUCIÓN Jul. 1998 Licenciada en Biología. Universidad Pedagógica Nacional. Bogotá. Mar. 2004 Bióloga. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá. Dic. 2007 Magíster en Ciencias Agrarias. Énfasis en Genética y fitomejoramiento. Universidad Nacional de Colombia-Sede Bogotá. EDUCACIÓN Complementaria FECHA TÍTULO, INSTITUCIÓN Marzo 2004 Curso de técnicas Citogenéticas. Unidad de Virología, CIAT. Centro Internacional de Agricultura Tropical. Dic. 2005 Curso de hibridación y Microarreglos. Unidad de biotecnología CIAT. Centro Internacional de Agricultura Tropical. Curso de conservación de semillas para bancos de germoplasma. Universidad Nacional de Colombia y Universidad Politécnica de Madrid. Curso de actualización en patrones ambientales y espaciales en estudios de diversidad genética. Universidad Nacional de Colombia y Universidad Politécnica de Madrid Dic. 2006 Jun.2007 27 EXPERIENCIA PROFESIONAL: Docencia/enseñanza Disciplinas Dictadas Biología celular, Genética, Citogenética Docente Tiempo completo Facultad de Medicina, Unidad de Citogenética. Asignatura: Genética y citogenética. Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá. Jefe inmediato: Gloria Osorio. Docente ocasional tiempo completo. Programa de Biología. Asignatura de Genética y Biología Celular. Universidad del Quindío. Jefe Inmediato: Arles López. Agosto 2007hoy Investigación 2000-2003 Proyecto Kiwe: interdiciplinariedad y currículo en medio ambiente. Programa RED. DINAIN. Universidad Nacional de Colombia. Jefe inmediato: Marta Orozco de Amézquita. Teléfono 3165000 ext 11331. Logros: Desarrollo de material didáctico y pedagógico para socialización de conceptos relacionados con el medio ambiente y su conservación Elaboración de videos y cartillas de carácter divulgativo Asistencia a docentes y estudiantes en la generación de proyectos relacionados con medio ambiente 2005-2006 Investigadora visitante CIAT, Centro Internacional de Agricultura Tropical. Programa de caracterización de germoplasma de fríjol. Jefe inmediato: Doctor Matthew Blair Periodo: Octubre-Diciembre 2005 Logros: Estandarización protocolos extracción de DNA y RNA Identificación de genes de resistencia para virus BCMV y BCMNV mediante marcadores SCAR Identificación de cepas virales mediante pruebas de ELISA y material diferencial Cruzamientos convencionales de plantas de fríjol para el desarrollo de nuevas líneas 2006 Asistente Proyecto Mejoramiento de leguminosas. Universidad Nacional de Colombia. Director proyecto: Gustavo Ligarreto, Decano Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de Colombia. Periodo: Junio-Noviembre 2006. Logros: Organización del banco de germoplasma para colecciones de fríjol y arveja de la Universidad Nacional de Colombia Desarrollo de nuevas líneas para resistencia a virus 28 PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS Y/O PASANTIAS FECHA INSTITUCIÓN 2003 Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT. Proyecto citogenética. Unidad biotecnología. Duración 1 mes Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT. Proyecto biodiversidad en leguminosa. Unidad Biotecnología Duración 6 meses Proyecto “ estudio citogenético de cuatro variedades taxonómicas de Guadua angustifolia Kunth” 2005-2006 2010-2011 PUBLICACIONES Rodríguez N, Sanabria C y Valbuena E. 1996. Aislamiento de Agrobacterium tumefasciens a partir de muestras de suelo y agalla de plantas dicotiledóneas. Extracción y caracterización de sus plásmidos. En: memorias XXXI Congresos nacional de ciencias biológicas. Riohacha-Colombia Octubre. Rodríguez N, Chivata C y Bueno A. 2003. Estudio cromosómico de Bomarea pattinni Baker y Bomarea caldasii Kunt. En: XXXVIII Congreso Nacional de ciencias biológicas, ciencia- Post- genómica. Armenia- Colombia Octubre. Rodríguez N, Chivata C y Bueno A. 2004. Doble hidrólisis y tratamientos in vitro para incrementar la eficiencia de las técnicas citogenéticas en vegetales. Revista de la división de ciencias de la salud Salud Uninorte. Vol 18 2004. Memorias III congreso Internacional y IV Congreso Nacional de Genética. Asociación Colombiana de genética Humana e Instituto de genética humana. Barranquilla -Colombia Blair M.W., Buendía H.F., Rodríguez N., Garzón N., Ligarreto G., Castaño M. y Morales F. 2005. Development of BCMV resistance in Colombian large red seeded climbing beans. Annual report CIAT. Triana L.A., Rodríguez N., 2006. Dinámica del sistema agroforestal de chagras como eje de la producción indígena en el trapecio amazónico (Colombia). Agronomía Colombiana. Volumen XXIV, N° 1. Pg 158-169 Rodríguez N., Bueno A. 2006. Estudio de la diversidad citogenética de Physalis peruviana L. (Solanaceae). Acta Biológica Colombiana. Vol 11 N° 2 pg 33 Rodríguez N., Ligarreto, G., y Blair M.. Introducción de los genes bc-3 e I para resistencia a BCMV y BCMNV y selección asistida por SCAR en fríjol Bola Roja. Agronomía Colombiana. Mauricio Parra-Quijano, Sauris Panda, Nohra Rodríguez, and Elena Torres. 2011. Diversity of Ullucus tuberosus (Basellaceae) in the Colombian Andes and notes on ulluco domestication based on morphological and molecular data. Genetic Resources and Crop 29 Evolution. Vol 58 PARTICIPACIÓN EN CONGRESOS Y EVENTOS CIENTÍFICOS: I Encuentro Científico de estudiantes de Biología. Departamento de Biología. Universidad Nacional de Colombia. Sede Bogotá. Octubre de 2000. Seminario latinoamericano sobre Educación Superior. Análisis y perspectivas. Vicerrectoria de la Universidad Nacional de Colombia sede Bogotá, Dirección académica y dirección de programas curriculares. Septiembre de 2001. II Congreso Internacional y V Colombiano de Genética. Asociación Colombiana de genética Humana e Instituto de genética humana de la Universidad Nacional de Colombia Sede Bogotá. Abril de 2002. VII congreso Latinoamericano y II congreso Colombiano de Botánica. Septiembre de 2002. II Encuentro Científico de estudiantes de Biología. Departamento de Biología. Universidad Nacional de Colombia. Sede Bogotá. Octubre de 2002 III Encuentro Científico de estudiantes de Biología. Departamento de Biología. Universidad Nacional de Colombia. Sede Bogotá. Octubre de 2003. III Congreso Colombiano de Bioingeniería e Ingeniería Biomédica. Universidad Tecnológica de Pereira. Pereira- Colombia Junio 2008 IV Simposio Café: Potencialidad del cultivo de la guadua en el eje cafetero. ArmeniaColombia 2009 Congreso Internacional de la Guadua, otros Bambúes. Armenia- Colombia Noviembre 2009 Congreso Nacional de Ciencias Biológicas. Armenia-Quindío 2010 Primer Simposio de Genetica Universidad del Quindío. Abril 8 de 2011 30 TRABAJOS PRESENTADOS EN EVENTOS CIENTÍFICOS: Trabajos completos en Eventos Aislamiento de Agrobacterium tumefasciens a partir de muestras de suelo y agalla de plantas dicotiledóneas. Extracción y caracterización de sus plásmidos. En: memorias XXXI Congresos nacional de ciencias biológicas. Riohacha-Colombia Trabajos resumidos en Eventos Estudio cromosómico de Bomarea pattinni Baker y Bomarea caldasii Kunt. En: XXXVIII Congreso Nacional de ciencias biológicas, ciencia- Post- genómica. Armenia- Colombia Doble hidrólisis y tratamientos in vitro para incrementar la eficiencia de las técnicas citogenéticas en vegetales. Revista de la división de ciencias de la salud Salud Uninorte. Vol 18 2004. Memorias III congreso Internacional y IV Congreso Nacional de Genética. Asociación Colombiana de genética Humana e Instituto de genética humana. Barranquilla Colombia Artículos completos publicados en revistas de divulgación cientifica Dinámica del sistema agroforestal de chagras como eje de la producción indígena en el trapecio amazónico (Colombia). Agronomía Colombiana. Volumen XXIV, N° 1. Pg 158-169 Estudio de la diversidad citogenética de Physalis peruviana L. (Solanaceae). Acta Biológica Colombiana. Vol 11 N° 2 pg 33-43 Diversity of Ullucus tuberosus (Basellaceae) in the Colombian Andes and notes on ulluco domestication based on morphological and molecular data. Genetic Resources and Crop Evolution. Vol 58 31 DATOS COMPLEMENTARIOS: JURADO/COMISIONES EVALUADORAS DE TRABAJO DE GRADO Producción de anticuerpos policlonales IgG contra la proteína con actividad oxido nítrico sintetasa de Toxoplasma gondii recombinante (NOS- TgR) e inmunomarcaje en taquizoitos Jhonnatan Padilla. Estudiante de pregrado para optar al titulo de Biólogo. Patrones genético poblacionales a nivel geográfico y ambiental en Quercus humboldtii Bonpl. para los andes colombianos. Hernando Rodríguez. Estudiante de pregrado para optar al titulo de Biólogo. Identificación de isoformas producto del empalme alternativo en el gen ama1 de Toxoplasma gondii. Alejandro Hernández de los Ríos. Estudiante de pregrado para optar al titulo de Biólogo TRABAJOS DIRIGIDOS/TUTORÍAS EN MARCHA Caracterización citogenética de cinco morfotipos de Iresine herbstii . Johana Pantoja Bióloga. Caracterización citogenética de Guadua angustifolia Kunth var. angustifolia (Bambusoideae, Poaceae) a partir de tejido radicular. Jenny Valencia. Biologa Análisis de expresión de una miniruta de síntesis de carotenos en yuca (manihot esculenta crantz) transgénica por medio de qRT-PCR (reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real) Aníbal Alejandro Bonilla Cardona. Biólogo. Estudio cariológico con bandas C Y G en Guadua angustifolia var. grandicaula y var. angustifolia (Poaceae), a partir de meristemos apicales. Lorena Burbano, Trabajo de grado para optar al título de bióloga Estudio citogenético en Guadua angustifolia Kunth var. bicolor (Londoño, 1989) y var. nigra (Londoño & Clark, 1998) (Poaceae: Bambuseae). Carol Velasques. Trabajo de grado para optar al título de bióloga 32 COINVESTIGADOR NOMBRE: Germán Darío Gómez Marín FECHA DE NACIMIENTO: 08 de Noviembre de 1976 LUGAR DE NACIMIENTO: DIRECCIÓN: Armenia, Quindío Universidad del Quindio. Bloque de Ciencias Básicas. 4º Piso. Centro de Estudios e Investigaciones en Biodiversidad y Biotecnología CIBUQ. Dirección residencia l: B/ Rojas Pinilla II Etapa Manzana 12 Casa Nº 8. Germá[email protected] 89.006.235 de Armenia Inglés DIRECCIÓN PARTICULAR: E-MAIL: DOCUMENTO DE IDENTIDAD: OTROS IDIOMAS: EDUCACIÓN: FECHA 2001 * 2005 TÍTULO, INSTITUCIÓN Lic. Biología y Educación Ambiental. Universidad del Quindío Asp. Magíster en Ciencias – Biología Vegetal. Universidades del Quindío, UTP y de Caldas. EDUCACIÓN Complementaria FECHA 1999 2002 TÍTULO, INSTITUCIÓN Cursos de corta duración en Técnicas para el cultivo de Tejidos vegetales. Servicio nacional de aprendizaje SENA, SENA, Colombia. Cursos de corta duración en capacitación en el idioma ingles. AMERICAN ENGLISH CORPORATION DE COLOMBIA S.A, AMECORP. Diplomado en Formulación de proyectos de Investigación 2008 EXPERIENCIA PROFESIONAL: Auxiliar de docencia. 1999 – 1999. Coinvestigador Fenología de seis especies forestales en la Reserva La Montaña del Ocaso. 1999 – 2000 Administrador (Técnico Administrativo), Reserva el Ocaso. 2001 – A la Fecha. Asesor de Proyectos ONDAS. 2003 - 2003. 33 Coinvestigador Banco de Germoplasma de especies forestales nativas del departamento del Quindío. 2003 – 2004. Coordinador Semillero de investigación en plantas medicinales. 2004-2005 Investigador principal Impacto florístico generado por el aprovechamiento de guaduales en el Quindío. 2005 2005-2006 Tutor del semillero de Investigación en Guadua SENA- Universidad Quindío. 1999 – A la fecha: Vínculo: Administrador Reserva el Ocaso, Universidad Del Quindío Investigación Caracterización Morfológica y anatómica de cuatro biotipos de Guadua angustifolia en el Departamento del Quindío. 1999-2000. Fenología de seis especies forestales en la Reserva La Montaña del Ocaso. 1999 – 2001. Seguimiento de los procesos reproductivos de guaduales en el Ocaso, Quindío 2000 - 20012002. Proyecto Ambiental Escolar PRAE OCA-SANO. 2001- 2002 -2003. Contaminación olfativa del Barrio la Rivera del Municipio de Quimbaya- Quindío. 2003. Conozcamos la Flora y Fauna de Nuestro Sendero Semillas de Paz. 2003 Diversidad florística y desfronde en dos relictos de selva subandina en el Quindio.2004-2005. PARTICIPACIÓN EN PROYECTOS: 1. Caracterización Morfológica y anatómica de cuatro biotipos de Guadua angustifolia en el Departamento del Quindío.01/1999 - 11/2001 2. Fenología de seis especies forestales en la Reserva La Montaña del Ocaso. 01/2000 -2002 3. Seguimiento de los procesos reproductivos de guaduales en el Ocaso, Quindío 01/2001 2002 4. Proyecto Ambiental Escolar PRAE OCA-SANO01/2003 - 06/2003 34 5. Banco de Germoplasma de especies forestales nativas del departamento del Quindío 01/2004 - 11/2004 6. Plantas Medicinales Comercializadas en el Municipio de Armenia 05/2004 - 11/2005 7. Inventario de la familia Araceae en tres fragmentos de Selva subandina 01/2005 - 08/2007 8. Diversidad florística y desfronde en dos relictos de selva subandina en el Quindío. 01/2005 11/2006 9. Impacto florístico generado por el aprovechamiento de Guaduales en el Quindío. 01/2006 11/2007 10. Caracterización de la flora y heterópteros acuáticos y semiacuáticos en ecosistemas lóticos de la reserva natural La Montaña del Ocaso 01/2007 -12/2007 PREMIOS Y TÍTULOS: 2006 Mejor investigación desarrollada por los Docentes: Nuevos Investigadores, Universidad del Quindío. 2003 Mención Especial - Programa Reserva Natural del Ocaso, Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas 2000 Trabajo de grado meritorio, Universidad del Quindío TRABAJOS COMPLETOS EN EVENTOS: GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto. Aspectos fenológicos de Guadua angustifolia In: XXV Reunión de la Asociación Colombiana de Herbarios ACH, 2005, Armenia. Memorias XXV Reunión de la Asociación Colombiana de Herbarios ACH. , 2005. p.11 - 22 TRABAJOS RESUMIDOS EN EVENTOS: GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto Composición florística en zonas de interior y borde de dos fragmentos de selva subandina en el Quindío In: IV congreso colombiano de botánica, 2007, Medellín. Actualidades biológicas (Suplemento. Medellín: Actualidades Biológicas, 2007. p.85 - 342 35 GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Fonthal G., Betancour D., Saavedra M Formación del semillero de investigación de la guadua In: III Simposio Latinoamericano de Bambù, 2006, Guayaquil. Memorias. , 2006. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO Banco de germoplasma de especies forestales del Quindío In: XL Congreso Nacional de Ciencias Biológicas, 2005, Cali. Revista de la Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas. Cali- Valle: Digital imagen, 2005. v.17. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto Experiencias del Proyecto Ambiental Escolar OCA-SANO In: Segundo Encuentro Mundial Ecológico Recreativo, 2005, Montenegro. Memorias. Santa fé de Bogotá: CENCAD, 2005. v.1. p.83 - 84 GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto Reserva Natural la Montaña del Ocaso In: Segundo Encuentro Mundial Ecológico Recreativo, Montenegro. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, FELIPE OROZCO, ANDRES. Evaluación del efecto del método de muestreo sobre la composición florística de la Reserva El Ocaso In: III Congreso Colombiano de Botánica, 2004, Popayán. Memorias - III Congreso Colombiano de Botánica. , 2004. v.1. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto Fenologia de Guadua angustifolia In: Simposio Internacional Guadua, 2004, Pereira. Memorias- Simposio Internacional Guadua. , 2004. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto Estudio taxonómico, anatómico y fenológico de Guadua angustifolia In: XXXIX Congreso nacional de Ciencias Biològicas, 2003, Armenia. Memorias. Armenia- Quindío: Asociación Colombiana de Ciencias Biológicas, 2003. ARTÍCULOS COMPLETOS: GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, OROZCO CARDONA, ANDRES FELIPE, AGUDELO HENAO, CARLOS ALBERTO Banco de Germoplasma de especies forestales del departamento del Quindio.. Revista de Investigaciones Universidad Del Quindío. , n.16, p.81 - 92, 2006. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Fonthal G., BETANCUR, D., Saavedra M. Creación y conformación del semillero de Investigación en Guadua. . Revista de Divulgación Científica y Tecnologica Del Instituto Interdisciplinario de Las Ciencias. , v.1, n.3, p.22 - 35, 2006. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, AGUDELO HENAO, CARLOS ALBERTO Aspectos fenologicos de Guadua angustifolia. Revista de La Asociación Colombiana de Herbarios Ach. , v.1, p.11 - 22, 2005. 36 GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, AGUDELO HENAO, CARLOS ALBERTO Aspectos fenológicos de Guadua angustifolia. Revista de Investigaciones Universidad Del Quindío. , v.4, n.12, p.9 - 22, 2003. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, MILENA CRUZ, SANDRA, ALBERTO AGUDELO, CARLOS Caracterización morfológica y anatómica de cuatro biotipos de Guadua angustifolia en el Departamento del Quindío. Monografías de La Flora Andina. Armenia, v.3, p.119 - 159, 2001. GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, AGUDELO HENAO, CARLOS ALBERTO Reserva Natural La Montaña del Ocaso: Un Nuevo Modelo de Conservación. Monografías de la Flora Andina. , v.3, p.11 - 58, 2001. CAPÍTULOS DE LIBROS PUBLICADOS: GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, OROZCO CARDONA, ANDRES FELIPE Fenologia de especies forestales In: Riqueza Biótica Quindiana.1 ed. Armenia: Universidad del Quindío, 2006 GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO El Quindío es Guadua In: Cátedra de la Quindianidad " Perspectiva ecológica del Quindío".1 ed. Armenia - Quindío: Editorial Universitaria de Colombia, 2003 DEMÁS TIPOS DE PRODUCCIÓN BIBLIOGRÁFICA: GÓMEZ MARÍN, GERMÁN DARÍO, Agudelo Henao Carlos Alberto PRAE OCA-SANO. Video. Armenia: Centro Audiovisual - Universidad del Quindío, 2005. ORIENTACIONES CONCLUIDAS: Trabajos de conclusión de curso de graduación Orientaciones concluidas Norma del Pilar Montañez. Inventario de la familia Araceae en tres fragmentos de selva sub. Andina en el departamento del Quindío. 2005. Curso (Licenciatura en Biología y Educación Ambiental) Universidad Del Quindío. 37 38 Cronograma de actividades: 12 meses MESES ACTIVIDADES 7-8 1-2 3-4 5-6 Colecta de material vegetal X X X Estandarización cultivo in vitro X X X X X X Estandarización técnica poliploidización Evaluación morfológica de nivel de ploidía X 9-10 X 11-12 X X Evaluación citogenética de poliploides X X 13-14 15-16 X X X X X X X X Conferencia X X 19-20 21-22 23-24 X Evaluación por citometría de flujo Elaboración informes parciales y final 17-18 X X X X X X X X Participación en congreso X Publicación: artículo científico X 39 X