El fluorur es considera important per a la salut a causa del

Índice
ÍNDICE GENERAL
INTRODUCCIÓN ......................................................................................... 1
1. Flúor y compuestos fluorados: características y usos ............................. 3
2. Exposición humana a fluoruros .............................................................. 7
2.1. Agua ................................................................................................ 7
2.2. Alimentos ...................................................................................... 10
3. Ingesta de fluoruro................................................................................ 13
4. Métodos analíticos para la determinación del fluoruro en alimentos ... 14
4.1. Métodos de digestión..................................................................... 15
4.2 Métodos de aislamiento del fluoruro .............................................. 16
4.3. Métodos de cuantificación............................................................. 17
5. Efectos del fluoruro sobre la salud ....................................................... 20
5.1. Fluorosis dental y esquelética ........................................................ 21
5.2. Desarrollo embrionario y psicomotriz ........................................... 23
6. Mecanismos celulares de toxicidad del fluoruro .................................. 24
7. Toxicocinética ...................................................................................... 27
8. Biomarcadores de exposición a fluoruro .............................................. 30
9. Bioaccesibilidad y biodisponibilidad ................................................... 33
9.1. Definición de bioaccesibilidad y biodisponibilidad ...................... 33
9.2. Modelos para la evaluación de la bioaccesibilidad y
biodisponibilidad .................................................................................. 35
9.3. Estudios sobre la bioaccesibilidad y biodisponibilidad del fluoruro
.............................................................................................................. 38
10. Absorción intestinal ............................................................................ 40
10.1. Estructura de la pared intestinal .................................................. 40
10.2. Modelos in vitro para el estudio de la absorción intestinal ......... 44
i
Índice
10.3. Mecanismos de transporte intestinal ........................................... 47
10.4. Evaluación de los mecanismos de absorción intestinal del fluoruro
.............................................................................................................. 49
OBJETIVOS................................................................................................. 51
METODOLOGÍA ........................................................................................ 55
1. Determinación de fluoruro y su bioaccesibilidad en alimentos ............ 57
1.1. Muestras para el estudio de contenidos de fluoruro en alimentos y
su bioaccesiblidad................................................................................. 57
1.1.1. Muestras del estudio de Dieta Total de la Comunidad Valenciana
.............................................................................................................. 57
1.1.2. Muestras de productos de la pesca y cereales preparadas por el
Laboratorio de Contaminación Metálica ............................................. 59
1.1.3. Muestras de raciones duplicadas de alimentos consumidos en
escuelas argentinas .............................................................................. 61
1.2. Digestión vía húmeda de alimentos ............................................... 62
1.3. Digestión vía seca de alimentos .................................................... 63
1.4. Digestión gastrointestinal simulada de alimentos ......................... 64
1.5. Análisis de fluoruro en alimentos y sus fracciones bioaccesibles . 67
2. Factores que afectan a la solubilización de fluoruro desde alimentos .. 68
2.1. Influencia de la etapa digestiva en la solubilización de fluoruro .. 68
2.2. Influencia del pH de la etapa gástrica en la solubilización de
fluoruro ................................................................................................. 69
2.3. Influencia de la concentración de pepsina de la etapa gástrica en la
solubilización de fluoruro ..................................................................... 69
2.4. Influencia de la concentración de sales biliares de la etapa intestinal
en la solubilización de fluoruro ............................................................ 70
2.5. Influencia de la presencia de determinados cationes en la
solubilización de fluoruro en la etapa gástrica e intestinal ................... 70
ii
Índice
3. Estudios in vitro de la absorción intestinal de fluoruro ........................ 71
3.1. Mantenimiento de los cultivos celulares de Caco-2 y HT29-MTX
.............................................................................................................. 71
3.2 Evaluación de la permeabilidad aparente, transporte y retención
celular de fluoruro por la línea celular Caco-2 ..................................... 73
3.2.1. Ensayos de viabilidad celular en Caco-2 ................................... 74
3.2.2. Cultivos de la línea celular Caco-2 en Transwell® para estudios
de transporte y permeabilidad ............................................................. 75
3.2.3. Integridad de la monocapa celular durante los ensayos de
transporte ............................................................................................. 77
3.2.4. Ensayos de transporte, acumulación celular y permeabilidad en
condiciones estándar ............................................................................ 78
3.2.5. Estudio del transporte paracelular ............................................ 80
3.2.6. Efecto del pH sobre el transporte y acumulación de fluoruro ... 80
3.2.7. Efecto de la temperatura sobre el transporte y acumulación de
fluoruro................................................................................................. 81
3.2.8. Efecto de la presencia de cloruros (Cl-) sobre el transporte y
acumulación de fluoruro ...................................................................... 82
3.2.9. Participación de un intercambiador F-/OH- en el transporte y
acumulación celular de fluoruro .......................................................... 83
3.3. Evaluación del modelo celular y los factores presentes en el tracto
intestinal sobre la permeabilidad intestinal de fluoruro........................ 84
3.3.1. Modelos celulares....................................................................... 84
3.3.2. Cálculo del coeficiente de permeabilidad aparente ................... 85
3.3.3. Influencia del mucus secretado por las HT29-MTX sobre el
transporte de fluoruro .......................................................................... 85
3.3.4. Influencia del pH en el transporte de fluoruro ........................... 86
3.3.5. Influencia del ácido taurocólico en el transporte de fluoruro ... 86
3.3.6. Influencia de la matriz alimentaria en el transporte de fluoruro86
iii
Índice
3.4. Determinación de fluoruro en los medios de cultivo y el lisado
celular ................................................................................................... 87
3.5. Cuantificación del contenido total de proteínas ............................ 88
4. Efectos de la exposición a fluoruro sobre el epitelio intestinal ............ 89
4.1. Extracción del RNA total de los cultivos celulares ....................... 90
4.2. Cuantificación del RNA y evaluación de su integridad ................ 91
4.3. Transcripción inversa (RT) ........................................................... 91
4.4. Reacción en cadena de la polimerasa a tiempo real (qPCR) ......... 92
4.5. Efecto del fluoruro sobre la línea celular Caco-2 en exposiciones de
corta duración ....................................................................................... 95
4.6. Efecto del fluoruro sobre la línea celular Caco-2 en exposiciones
repetidas en el tiempo ........................................................................... 95
5. Análisis estadístico ............................................................................... 97
RESULTADOS Y DISCUSIÓN………………………..………………...101
CAPÍTULO 1. DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA ANALÍTICA
PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL FLUORURO EN ALIMENTOS .. 103
1. Optimización de las condiciones para la digestión por microondas ... 106
2. Optimización de las condiciones de neutralización............................ 107
3. Optimización de las condiciones de cuantificación mediante
potenciometría directa con electrodo selectivo de fluoruro.................... 109
3.1. Selección del TISAB ................................................................... 109
3.2. Curva de calibrado....................................................................... 111
3.3. Efecto del volumen de muestra en la cuantificación ................... 112
4. Comparación con el método de digestión por fusión alcalina ............ 113
5. Estabilidad de las muestras................................................................. 114
6. Características analíticas .................................................................... 116
6.1. Límite de detección y límite de cuantificación............................ 116
iv
Índice
6.2. Exactitud...................................................................................... 117
6.2.1. Recuperación de patrones de fluoruro ..................................... 117
6.2.2. Análisis de muestras de referencia ........................................... 118
6.2.3. Recuperación de fluoruro en muestras de alimentos ............... 119
6.3. Precisión ...................................................................................... 121
Discusión ................................................................................................ 122
CAPÍTULO 2. CONTENIDO DE FLUORURO EN ALIMENTOS Y SU
BIOACCESIBILIDAD .............................................................................. 125
1. Contenidos de fluoruro en alimentos.................................................. 128
1.1. Influencia de la liofilización sobre el contenido de fluoruro ....... 128
1.2. Contenidos de fluoruro en alimentos consumidos en la Comunidad
Valenciana .......................................................................................... 129
1.3. Alimentos cocinados procedentes de áreas con contaminación
natural por fluoruro ............................................................................ 134
1.4. Efecto del cocinado sobre la concentración de fluoruro en
alimentos ........................................................................................... 137
2. Bioaccesibilidad de fluoruro desde alimentos .................................... 138
2.1. Características analíticas del método de digestión gastrointestinal
............................................................................................................ 138
2.2. Bioaccesibilidad de fluoruro desde alimentos ............................. 141
Discusión ................................................................................................ 143
CAPÍTULO 3. FACTORES QUE AFECTAN A LA BIOACCESIBILIDAD
DE FLUORURO ........................................................................................ 151
1. Influencia de la etapa digestiva sobre la bioaccesibilidad de
fluoruro…………………………………………………………………154
2. Influencia del pH de la etapa gástrica sobre la bioaccesibilidad de
fluoruro ................................................................................................... 155
v
Índice
3. Influencia de la concentración de pepsina de la etapa gástrica sobre la
bioaccesibilidad de fluoruro ................................................................... 157
4. Efecto de la presencia de Ca+2, Mg+2, Fe+3 y Al+3 sobre la
bioaccesibilidad de fluoruro ................................................................... 158
5. Efecto de la concentración de sales biliares sobre la solubilización de
fluoruro ................................................................................................... 161
Discusión ................................................................................................ 163
CAPÍTULO 4. ESTUDIOS SOBRE LOS MECANISMOS DE
ABSORCIÓN INTESTINAL DEL FLUORURO ..................................... 171
1. Evaluación de la viabilidad y la integridad de la monocapa celular
Caco-2 .................................................................................................... 174
2. Transporte, acumulación celular y coeficiente de permeabilidad en
dirección apical-basolateral (A-B) y basolateral-apical (B-A) ............... 175
3. Estudio de la participación de la vía paracelular en el transporte de
fluoruro ................................................................................................... 178
4. Efecto del pH sobre la permeabilidad y acumulación de fluoruro ..... 182
5. Influencia de la temperatura sobre la permeabilidad y acumulación de
fluoruro ................................................................................................... 184
6. Efecto de la presencia de Cl- en el transporte y acumulación de fluoruro
................................................................................................................ 185
7. Participación de un intercambiador F-/OH- en el transporte y
acumulación de fluoruro ......................................................................... 185
Discusión ................................................................................................ 187
CAPÍTULO 5. EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DEL MODELO
CELULAR Y DE LOS FACTORES PRESENTES EN EL TRACTO
INTESTINAL SOBRE LA ABSORCIÓN DEL FLUORURO ................. 195
1. Resistencia eléctrica transepitelial (RET) y permeabilidad de LY en las
monocapas celulares diferenciadas ........................................................ 198
vi
Índice
2. Transporte y coeficiente de permeabilidad aparente del fluoruro en los
distintos modelos celulares ..................................................................... 200
3. Influencia del mucus secretado por la línea HT29-MTX en el transporte
de fluoruro .............................................................................................. 202
4. Influencia del pH en el transporte de fluoruro.................................... 203
5. Influencia del acido taurocólico en el transporte de fluoruro ............. 204
6. Efecto de la matriz alimentaria en el transporte de fluoruro .............. 208
Discusión ................................................................................................ 210
CAPÍTULO 6. ESTUDIOS SOBRE LOS EFECTOS IN VITRO DE LA
EXPOSICIÓN A FLUORURO EN LA MONOCAPA EPITELIAL DEL
INTESTINO ............................................................................................... 217
1. Efecto de la exposición sobre la diferenciación de las células Caco-2
................................................................................................................ 221
2. Efecto de la exposición a fluoruro sobre la permeabilidad de las
monocapas Caco-2 ................................................................................. 223
3. Respuesta inflamatoria de células Caco-2 expuestas a fluoruros ....... 227
Discusión ................................................................................................ 229
CONCLUSIONES………………………………………………...............237
BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………….....243
vii
Índice
ÍNDICE DE TABLAS
INTRODUCCIÓN
Tabla 1. Concentraciones de fluoruro en varios grupos de alimentos ...... 10
Tabla 2. Ingesta diaria de fluoruro recomendada para la prevención de
caries dental .............................................................................................. 21
METODOLOGÍA
Tabla 1. Muestras incluidas en el grupo de alimentos “Pescados y
derivados” del estudio de Dieta Total de la Comunidad Valenciana. ...... 59
Tabla 2. Muestras de productos de la pesca preparadas por el Laboratorio
de Contaminación Metálica. ..................................................................... 60
Tabla 3. Volúmenes y concentraciones de los reactivos empleados en el
proceso de transcripción inversa. ............................................................. 92
Tabla 4. Condiciones de la PCR a tiempo real. ........................................ 94
Tabla 5. Secuencias de los oligonucleótidos de citoquinas pro y
antiinflamatorias empleados en qPCR...................................................... 98
Tabla 6. Secuencias de oligonucleótidos de enzimas marcadores de
diferenciación y proteínas de las uniones intercelulares empleados en
qPCR ....................................................................................................... 99
CAPÍTULO 1. DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA ANALÍTICA
PARA LA CUANTIFICACIÓN DEL FLUORURO EN ALIMENTOS
Tabla 1. Efecto de las condiciones de microondas (peso muestra y
volumen de reactivos) sobre la cuantificación de fluoruro mediante ISE
................................................................................................................ 109
Tabla 2. Comparación de las curvas de calibración obtenidas con patrones
preparados en agua desionizada (serie A) y en blanco de digestión (serie
B) ............................................................................................................ 112
Tabla 3. Efecto del volumen de la dilución en la cuantificación de fluoruro
................................................................................................................ 113
viii
Índice
Tabla 4. Concentraciones de fluoruro cuantificadas en las muestras
digeridas por fusión alcalina y por horno de microondas ....................... 114
Tabla 5. Límite de detección (LD) y límite de cuantificación (LQ) de la
metodología desarrollada para la cuantificación de fluoruro en alimentos
................................................................................................................ 116
Tabla 6. Recuperación de fluoruro tras la digestión de patrones por horno
microondas ............................................................................................. 118
Tabla 7. Concentraciones de fluoruro halladas en un material de referencia
certificado y en una muestra de control interno ..................................... 119
Tabla 8. Recuperación de fluoruro en productos de la pesca y productos
vegetales tras la adición de distintas concentraciones de fluoruro ......... 120
Tabla 9. Precisión del método. ............................................................... 121
CAPÍTULO 2. CONTENIDO DE FLUORURO EN ALIMENTOS Y SU
BIOACCESIBILIDAD
Tabla 1. Rango de concentraciones de fluoruro, media y mediana en arroz
y productos de la pesca ........................................................................... 131
Tabla 2. Ingesta de fluoruro a través del consumo de productos de la pesca
................................................................................................................ 133
Tabla 3. Concentraciones de fluoruro en alimentos recogidos en las
escuelas de la provincia de chaco (Argentina). ...................................... 135
Tabla 4. Ingesta media de fluoruro a través de los alimentos consumidos
en el desayuno y en la comida para las diferentes localidades argentinas
estudiadas ............................................................................................... 136
Tabla 5. Concentración de fluoruro en muestras de agua consumidas en
las poblaciones argentinas objeto de estudio .......................................... 137
Tabla 6. Precisión del método utilizado para evaluar la bioaccesibilidad de
fluoruro desde productos de la pesca...................................................... 140
Tabla 7. Concentración de fluoruro en la muestra y en la fracción
bioaccesible y bioaccesibilidad en productos de la pesca liofilizados ... 142
ix
Índice
Tabla 8. Concentración de fluoruro en la fracción bioaccesible y
bioaccesibilidad de fluoruro en alimentos procedentes de las escuelas
argentinas ............................................................................................... 143
CAPÍTULO 5. EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DEL MODELO
CELULAR Y DE LOS FACTORES PRESENTES EN EL TRACTO
INTESTINAL SOBRE LA ABSORCIÓN DEL FLUORURO
Tabla 1. Coeficiente de permeabilidad aparente de fluoruro (20 µg/mL) en
las distintas proporciones de Caco-2/HT29-MTX ensayadas ................ 201
Tabla 2. Valores de RET al final del ensayo en las distintas monocapas
celulares con o sin tratamiento con ácido taurocólico (TC, 20 mM)…..205
Tabla 3. Valores de RET al inicio y final del ensayo tras 2 horas de
exposición a un patrón de fluoruro (3 µg/mL) y a la fracción bioaccesible
del arroz cocinado .................................................................................. 210
x
Índice
ÍNDICE DE FIGURAS
INTRODUCCIÓN
Figura 1. Ciclo del flúor y derivados en el medio ambiente....................... 4
Figura 2. Formación de derivados fluorados y sus aplicaciones ................ 6
Figura 3. Países con áreas con fluorosis endémica................................... 22
Figura 4. Mecanismos celulares de toxicidad del fluoruro....................... 26
Figura 5. Toxicocinética del fluoruro en adultos...................................... 28
Figura 6. Conversión de la hidroxiapatita en fluorapatita ........................ 29
Figura 7. Conceptos de bioaccesibilidad y biodisponibilidad .................. 35
Figura 8. Sistema de digestión in vitro SHIME ....................................... 37
Figura 9. Sistema de digestión in vitro TIM............................................. 37
Figura 10. Estructura de la pared intestinal .............................................. 41
Figura 11. Cripta del intestino delgado .................................................... 42
Figura 12. Uniones intercelulares de las células epiteliales del intestino . 44
Figura 13. Técnicas in vitro para evaluar el transporte a través de
membranas biológicas .............................................................................. 45
Figura 14. Tipos de transporte a través del epitelio intestinal .................. 48
METODOLOGÍA
Figura 1. Área de muestreo en la provincia de Chaco, Departamento
Almirante Brown. Taco Pozo y comunidades aledañas ........................... 61
Figura 2. Esquema del proceso de determinación de la bioaccesibilidad de
fluoruro mediante el método estático de digestión gastrointestinal in vitro
.................................................................................................................. 66
Figura 3. Esquema del sistema bicameral empleado en los estudios de
permeabilidad y transporte ....................................................................... 75
Figura 4. Medición de la resistencia eléctrica transepitelial de monocapas
en sistemas Transwells® empleando un voltímetro Millicell®-ERS..……76
xi
Índice
CAPÍTULO 1. DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA ANALÍTICA
PARA LA CUANTIFICACIÓN DE FLUORURO EN ALIMENTOS
Figura 1. Efecto del reactivo oxidante empleado en la digestión por horno
de microondas sobre la cuantificación de fluoruro mediante ISE .......... 107
Figura 2. Curva de calibrado de fluoruro obtenida con patrones preparados
en TISAB II al 50% (v/v) y TISAB III al 10% (v/v).............................. 111
Figura 3. Efecto del tiempo de almacenamiento sobre la concentración de
fluoruro de la muestra de referencia certificada de té ............................ 115
CAPÍTULO 2. CONTENIDO DE FLUORURO EN ALIMENTOS Y SU
BIOACCESIBILIDAD
Figura 1. Influencia de la liofilización sobre el contenido de fluoruro .. 129
Figura 2. Efecto del cocinado de cereales y legumbres en agua con 6 mg/L
de fluoruro .............................................................................................. 138
CAPÍTULO 3. FACTORES QUE AFECTAN A LA BIOACCESIBILIDAD
DEL FLUORURO
Figura 1. Influencia de la etapa del proceso digestivo sobre el contenido
de fluoruro solubilizado en muestras de pescados y crustáceos ............. 155
Figura 2. Influencia del pH sobre la solubilización de fluoruro en la etapa
gástrica desde pescados y crustáceos…………………………………...156
Figura 3. Influencia de la concentración de pepsina sobre la solubilización
de fluoruro en la etapa gástrica en muestras de pescados y crustáceos .. 158
Figura 4. Influencia de la presencia de Ca+2, Mg+2, Fe+3 y Al+3 sobre la
solubilización de fluoruro desde sardina ................................................ 160
Figura 5. Influencia de la presencia de Ca+2, Mg+2, Fe+3 y Al+3 sobre la
solubilización de fluoruro desde boquerón............................................. 161
Figura 6. Influencia de la concentración de sales biliares (g de sales
biliares/100 gramos de disolución) en la solubilización de fluoruro en
muestras de quisquilla y sardina ............................................................. 163
xii
Índice
CAPÍTULO 4. ESTUDIOS SOBRE LOS
ABSORCIÓN INTESTINAL DEL FLUORURO
MECANISMOS
DE
Figura 1. Porcentaje de actividad mitocondrial respecto al control en
células Caco-2 expuestas a distintas concentraciones de fluoruro (0.5, 2.5,
5, 10, 25, 50 y 100 µg/mL) durante 4, 24, 48 y 72 horas ....................... 174
Figura 2. Transporte A-B en función del tiempo en células Caco-2
expuestas a diferentes concentraciones de fluoruro (2.5, 10, 20 y 50
µg/mL).................................................................................................... 176
Figura 3. Transporte B-A en función del tiempo en células Caco-2
expuestas a diferentes concentraciones de fluoruro (2.5, 10, 20 y 50
µg/mL).................................................................................................... 176
Figura 4. Transporte en sentido A-B y B-A tras exposición de células
Caco-2 a distintas concentraciones de fluoruro (2.5, 10, 20 y 50 µg/mL)
................................................................................................................ 177
Figura 5. Coeficiente de permeabilidad aparente (Papp) de LY (100 µM) en
dirección A-B y B-A en células Caco-2 tratadas previamente con EDTA o
sin previo tratamiento con EDTA .......................................................... 180
Figura 6. Valores de RET medidos a 15 y 60 minutos en células Caco-2
tratadas previamente con EDTA o sin previo tratamiento en ensayos de
transporte en dirección A-B y B-A......................................................... 180
Figura 7. Coeficiente de permeabilidad aparente (Papp) de fluoruro (20
µg/mL) en dirección A-B y en dirección B-A en células Caco-2 tratadas
previamente con EDTA o sin previo tratamiento con EDTA ................ 181
Figura 8. Transporte de fluoruro en células Caco-2 expuestas a 20 µg/mL
durante 240 minutos en sentido A-B a diferentes pHs ........................... 182
Figura 9. Transporte de fluoruro en células Caco-2 expuestas a 20 µg/mL
durante 120 minutos en sentido B-A a diferentes pHs ........................... 183
Figura 10. Transporte A-B de fluoruro en células Caco-2 expuestas a 20
µg/mL durante 120 minutos en distintas condiciones: sin precarga de
KOH; tratamiento previo con KOH; tratamiento previo con KOH y coexposición DIDS/fluoruro ...................................................................... 186
Figura 11. Contenido intracelular de fluoruro en células Caco-2 expuestas
a 100 µg/mL durante 30 minutos en distintas condiciones: sin precarga
xiii
Índice
con KOH; tratamiento previo con KOH; tratamiento previo con KOH y
co-exposición DIDS/fluoruro ................................................................. 187
CAPÍTULO 5. EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DEL MODELO
CELULAR Y DE LOS FACTORES PRESENTES EN EL TRACTO
INTESTINAL SOBRE LA ABSORCIÓN DEL FLUORURO
Figura 1. Valores de RET en las diferentes proporciones de Caco-2/HT29MTX ensayadas. Valores expresados como Ohms×cm2 ........................ 199
Figura 2. Transporte de LY (100 µM) en las distintas monocapas Caco2/HT29-MTX ensayadas ........................................................................ 200
Figura 3. Transporte de fluoruro (20 µg/mL) en función del tiempo para
las distintas monocapas celulares Caco-2/HT29-MTX ensayadas ......... 202
Figura 4. Transporte de fluoruro (20 µg/mL) en función del tiempo, en
presencia o ausencia de mucus para la monocapa Caco-2/HT29-MTX
(50/50) .................................................................................................... 203
Figura 5. Transporte de fluoruro (20 µg/mL) en función del tiempo a
diferentes pHs en la monocapa Caco-2/HT29-MTX (50/50) ................. 204
Figura 6. Coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de LY (100 µM)
en las diferentes monocapas ensayadas en presencia o ausencia de ácido
taurocólico (TC 20 mM)......................................................................... 206
Figura 7. Coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de fluoruro (20
µg/mL) en presencia o ausencia de ácido taurocólico (TC 20 mM) ...... 207
Figura 8. Coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de fluoruro (20
µg/mL) en células con o sin mucus tras la adición de ácido taurocólico
(TC 20 mM) o sin tratamiento con TC ................................................... 208
Figura 9. Porcentaje de fluoruro transportado en Caco-2 y Caco-2/HT29MTX (50/50) tras 2 horas de exposición a un patrón de fluoruro (3
µg/mL) y a la fracción bioaccesible del arroz cocinado ......................... 209
xiv
Índice
CAPÍTULO 6. ESTUDIOS SOBRE LOS EFECTOS IN VITRO DE LA
EXPOSICIÓN A FLUORURO EN LA MONOCAPA EPITELIAL DEL
INTESTINO
Figura 1. Análisis de la integridad del RNA total extraído de células Caco2 control y células Caco-2 expuestas a 20 y 100 µg/mL de fluoruro
durante 24 horas ..................................................................................... 220
Figura 2. Ratio de expresión relativa (en escala logarítmica en base 2) de
la fosfata alcalina intestinal (ALPI) en células Caco-2 control y tratadas
con fluoruro (2.5, 20 y 50 µg/mL) a los 14 y 18 días post-siembra ....... 222
Figura 3. Ratio de expresión relativa (en escala logarítmica en base 2) de
dipeptidilpeptidasa 4 (DPP4) en células Caco-2 control y tratadas con
fluoruro (2.5, 20 y 50 µg/mL) a los 14 y 18 días post-siembra .............. 223
Figura 4. Variación de la resistencia eléctrica transepitelial (RET) de las
células control y las células tratadas con fluoruro (2.5, 20 y 50 µg/mL)
con el tiempo .......................................................................................... 224
Figura 5. Coeficientes de permeabilidad aparente (Papp) de LY en células
control y células tratadas con fluoruro (2.5, 20 y 50 µg/mL) durante 7 y 14
días ......................................................................................................... 225
Figura 6: Ratio de expresión relativa (en escala logarítmica en base 2) de
proteínas de las uniones intercelulares en células Caco-2 tratadas con
fluoruro (2.5, 20 y 50 µg/mL) durante 7 días ......................................... 226
Figura 7. Ratio de expresión relativa (en escala logarítmica en base 2) de
citoquinas en células Caco-2 tratadas con fluoruro (20 µg/mL) durante 24
y 48 horas ............................................................................................... 227
Figura 8. Ratio de expresión relativa (en escala logarítmica en base 2) de
citoquinas en células Caco-2 tratadas con fluoruro (20 µg/mL) durante 14
días ......................................................................................................... 228
Figura 9. Estructura de las uniones intercelulares…………………….232
xv
Índice
16