TITULO: SEPARACIÓN MAGNÉTICA DE SUBPOBLACIONES DE CÉLULAS B

TITULO: SEPARACIÓN MAGNÉTICA DE SUBPOBLACIONES DE CÉLULAS B
NAÏVE, CENTRO GERMINAL Y MEMORIA, EN AMÍGDALA
Domínguez L, Alonso I, Campos-Martín Y, Mollejo M.
BioB-HVS. Biobanco Hospital Virgen de la Salud. Toledo
INTRODUCCIÓN:
Las células B se desarrollan en la médula ósea. Una vez han madurado migran
hacia los ganglios linfáticos, en este estadio se conocen como células B naïve. Una
vez que se han puesto en contacto con un antígeno específico, son activadas y
migran a los centros germinales presentes en los tejidos linfoides donde dan lugar a
células B de memoria y células plasmáticas. Las amígdalas forman parte del tejido
linfoide y se encuentran localizadas en la faringe.
OBJETIVO:
Separación de las distintas poblaciones de células B presentes en la amígdala.
METODOS:
Las poblaciones de células B son obtenidas a partir de amígdalas procedentes de
amigdalectomía rutinaria. El tejido en fresco es sometido a disgregación mecánica y
gradiente de densidad (Ficoll), obteniéndose las células mononucleares. Las células
B de la amígdala son enriquecidas con el kit CD19 Multisort (Miltenyi Biotech). Las
tres subpoblaciones de células B se aislaron según: Las células B de Centro
Germinal fueron incubadas con CD38 Microbeads a una baja dilución (1:1000) para
facilitar la selección positiva de células CD38high. Las células deplecionadas fueron
incubadas con CD27 Microbeads, obteniéndose las células B de memoria. A partir
de las células CD27 negativas y tras una selección positiva con anti-IgD, se
obtuvieron las células B naïve.
RESULTADOS:
Se han separado las subpoblaciones de células B naive, células B de memoria y de
centro germinal de 5 amígdalas.
La pureza de las poblaciones aisladas fue
analizada en función de sus marcadores específicos por Citometría de flujo (FACS
Calibur, Becton Dickinson).
CONCLUSIONES:
El protocolo diseñado para la separación celular por bolas magnéticas de
poblaciones de células B procedentes de amigdalectomias, ha permitido aislar
células B naïve, células B de Memoria y de Centro Germinal con un alto porcentaje
de pureza.