1 Facultad Ciencias de la Salud - Universidad Adventista del Plata/UAP - Argentina Acción del hielo y de la Arnica montana en el tratamiento del edema en ratas. Titulo en ingles Marcelo Leite da Veiga1; Antenor Aguiar Santos2; Jackson Raimundo Pena Pereira3; José Rogério Zero4 1 Doctor en Ciencias – Biología Celular e Tecidual, Titular de la Cátedra de Histología y Embriología, Facultad de Ciencias de la Salud – Universidad Adventista del Plata/UAP, 25 de mayo 99 – 3103 – Entre Ríos, Argentina. Tel.: ++54 (343) 4918000. E-mail: [email protected] 2 Magíster en Morfología, Titular de la Cátedra de Histología y Embriología, Centro Universitario Adventista de São Paulo/UNASP, Est. Itapecerica 6869 – 05858-002- São Paulo, Brasil. Tel.: ++55(011)5822-6166. E-mail: [email protected] 3 Licenciado en Fisioterapia, Centro Universitario Adventista de São Paulo/UNASP, Est. Itapecerica 6869 – 05858-002- São Paulo, Brasil. Tel.: ++55(011)5822-6166. E-mail: [email protected] 4 Licenciado en Fisioterapia, Centro Universitario Adventista de São Paulo/UNASP, Est. Itapecerica 6869 – 05858-002- São Paulo, Brasil. Tel.: ++55(011)5822-6166. E-mail: [email protected] 2 Resumen Comparó-se los efectos crioterapéuticos y los tópicos de la Arnica montana en el edema en tejido subplantar de 65 ratas Wistar. Los animales fueron divididos en el grupo no sometido a lesión o tratamiento; lesionado y no tratado; tratado con hielo; tratado con pomada de árnica, aplicada tópicamente en el edema. La lesión fue provocada por la inyección de Carragenina 1%. Se evaluaran y presentan los valores del edema y los porcentajes de leucocitos circulantes después de 1, 2, 4 y 6 horas de la lesión. Se concluyo que la acción del tratamiento crioterapéutico limita el área de edema mostrando eficacia terapéutica solamente en las dos primeras horas, mientras que la pomada de árnica presenta eficacia terapéutica en la primera hora y resulta en un aumento significativo a partir de la cuarta hora. Palabras-clave: Crioterapia, Arnica montana, Edema, Hematologia, Ratas wistar. INTRODUCIÓN Los procesos inflamatorios musculares y los microtraumas en el tejido músculo-esquelético son algunas de las lesiones más comunes que desencadenan mal-estar y dolor, perjudicando el bienestar del individuo1,2. Por la alta incidencia de estas lesiones, existen gran cantidad de antiinflamatorios que, idealmente, favorecen los efectos saludares de la inflamación y simultáneamente, controlan sus secuelas nocivas. Nuevos y potentes antiinflamatorios tienen sido sintetizados y utilizados ampliamente3,4 estando entre los agentes farmacológicos más utilizados en la práctica médica. Otro instrumento terapéutico grandemente utilizado contra estas injurias, de forma aislada o conjunta, es la aplicación local de hielo, o crioterapia5,6,7,8. En este tratamiento los efectos fisiológicos como disminución de dolor, espasmo muscular, actividad metabólica e inflamación, parecen ser universalmente aceptos, aunque los mecanismos de acción no esté totalmente esclarecido lo que lleva a varias controversias y opiniones5,6,7,8. Finalmente, una de las formas más antiguas de tratamiento, pero que todavía hoy a menudo se recorre son los estratos de plantas. Este consumo é una realidad y ven aumentando rápidamente, según datos de la Organización Mundial de Salud, 80% de la población de los países en desarrollo se tratan con técnicas de medicina popular, y de ese total, 85% usan estrato de plantas medicinales9. Uno de los fitoterapéuticos más utilizados, la Arnica montana tiene sido utilizado bajo la forma de tintura o crema en casos de contusiones, luxaciones, traumatismos, hematomas, 3 inflamaciones articulares, dolores y heridas en general9. Estudios recientes demostraran que los flavonóides, presentes en este estrato, suelen interferir en las propiedades funcionales de diferentes células, lo que lleva a algunos autores, acreditar que puedan presentar actividades antiinflamatorias, antialérgicas, antivirales y anticarcinogénicas9,10. Debido a escasez de estudios en la literatura indexada, relacionado a estos temas y utilizando bioensayo con ratas, bajo un análisis comparativo de los antiinflamatorios naturales y nohormonales, en el tratamiento de lesiones y enfermedades del aparato locomotor, se buscó evaluar la eficacia y tolerabilidad del hielo y de la Árnica en el edema agudo, por el estudio comparativo diferencial en la respuesta inflamatoria del pool circulante y análisis anatómica del tejido involucrado. MATERIALES Y MÉTODOS En este estudio fueran utilizados 65 ratas machos (Rattus norvegicus albinus) del linaje Wistar, con peso medio de 25338g y edad media de 75 días, mantenidos en jaulas apropiadas en iguales condiciones de fotoperíodo (12/12hs), ventilación y temperatura (221ºC) con agua y ración ad libitum. Los animales fueran distribuidos aleatoriamente en cuatro grupos: a) Control doble-ciego (GDC, n=5), sin ninguna forma de lesión y tratamiento; b) Control (GC, n=20), lesionados y no sometidos a tratamiento; c) Tratado con hielo (GH, n=20), lesionados tratados por crioterapia durante 15 minutos de modo estático, con la inmersión total de la pata lesionada en recipiente con hielo triturado en agua; d) Tratado con árnica (GA, n=20), lesionados y tratados con árnica. Este tratamiento consistió de aplicación de la pomada de Arnica montana® (Farmacia y Laboratorio Homeopático Almeida Prado), 1% en solución (vaselina y lanolina), de modo tópico, con masaje circular local, por 1 minuto. Todos los tratamientos fueran realizados 15 minutos, 1, 2 y 4 horas después de la inoculación de carragenina 1%. La lesión fue inducida con inyección de 0,1 mL de Carragenina 1%, diluida en agua destilada, en tejido subplantar de la pata trasera derecha de las ratas. El edema inflamatorio fue evaluado por el método de la plestimografia utilizando micrómetro (Mitutoyo®), ocurriendo verificaciones 10 minutos antes de la inoculación de carragenina y en los tiempos de 1, 2, 4 y 6 horas después de la lesión. Los valores fueran obtenidos por el promedio de tres mediciones del eje mayor (latero-medial) y del eje menor (plantar-dorsal) de la 4 pata lesionada, siendo entonces calculado el área media de la pata, según la expresión matemática A=(/6) x a2 x b, donde: a = eixo menor y b = eixo maior. La diferencia entre los valores iniciales y finales, fue convertida en porcentual y considerada como edema. Las ratas fueran anestesiadas y sacrificadas con deslocamiento cervical por tracción y colectadas muestras de sangre periférico, para confección de extensiones, posteriormente coloradas (Leishmann) y analizadas al microscopio (Nikon), donde fue realizado el conteo diferencial de los leucocitos (n=100 leucocitos/lamina). Todos los datos numéricos obtenidos en el presente estudio fueran analizados estadísticamente utilizando-se el Teste t de Student (p < 0,05) través de Software estadístico (GraphPad Prisma 4.0). RESULTADOS Los valores porcentuales y la variación del edema de los grupos suelen ser observados en la Tabla 1. En el GDC no hubo variación, o sea, edema. En el GH observamos un aumento del edema en todos los tiempos, entretanto en T1 y T2 presentaran-se debajo de los valores encontrados en GC, llegando al valor máximo de edema en T4 y permaneciendo así hasta T6. Por otro lado, en los animales del GA ocurrió un aumento gradual del edema inflamatorio en todos los tiempos del experimento, siendo mayor que del GH desde T2 y que del GC a partir de T4. Los hallados de los porcentuales de leucocitos presentes en la sangre circulante y la variación en los grupos y tiempos pueden ser verificados en la tabla 2. Las porcentajes de eosinófilos no presentaran alteraciones significativas en cualquier grupo o tiempo al paso que los basófilos, por su pequeña cantidad (menos de 1%) y por permanecieren en este valor constante en todos los grupos, no están presentes en esta tabla. Los animales del GDC presentaran valores constantes en todos los tiempos para todos los leucocitos. Los animales del GC presentaran una pequeña elevación de la cantidad de linfocitos en T2, seguida de una baja a valores menores que los iniciales y estadísticamente significativa en T4 y T6. Lo mismo ocurrió con la cantidad de monocitos, pero sin significado estadístico, además de presentar grande desvío Standard. El efecto contrario fue observado por los neutrófilos que presentaran valores arriba de la normalidad en T1, una vuelta a valores normales en T2 y una gran elevación estadísticamente significativa en T4 y T6. 5 En los valores del leucograma presentados por los animales del GH hubo una gran baja de los porcentajes de linfocitos en T4 y T6, y de monocitos en T2, T4 y T6, mientras que la cantidad de neutrófilos sufrió un crecimiento significativamente estadístico a partir de T2. Finalmente en el GA ocurrió una disminución constante en la cantidad de linfocitos, hasta alcanzar su menor cantidad en T6, mientras que los monocitos presentaran una pequeña elevación en T2, seguida de una gran baja en T4 y T6. Ya los neutrófilos no presentaran variación de T1 a T2, pero un importante aumento en T4 y T6. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES La literatura relata que la terapia con frío genera una vasoconstricción de los vasos sanguíneos cerca de 15 a 20 minutos después del inicio de la aplicación, disminuyendo el flujo sanguíneo local y la actividad metabólica del tejido, limitando secundariamente los daños del tejido causados por la hipoxia, de las acciones químicas de las células y, consecuentemente, de la cantidad de oxigeno y de nutrientes. Ese mecanismo limita el edema, habiendo menor liberación de histamina y menor activación de neutrófilos6,7. Nuestros resultados muestran que el tratamiento con crioterapia, de la manera propuesta, limitó el edema hasta 02 horas, manteniendo-o con valores similares a los que no recibieran tratamiento hasta pasadas 06 horas. Cuanto as alteraciones leucocíticas, presenciamos que el hielo evitó alteraciones en la cantidad de linfocitos durante las dos primeras horas, y de de monocitos y neutrófilos durante la primera hora, posiblemente por evitar el edema inicial, pero también retardando la llegada de estas células al local de la herida, o sea, el mecanismo clásico de proceso inflamatorio agudo. Aunque no parezca tener efectos deletéreos este facto debe servir para minimizar los síntomas del proceso inflamatório, especialmente el dolor y el incomodo. Pero, a la vez pareció-nos que no se bloquea totalmente los fenómenos inmunológicos, una vez que nos sugiere el reemplazo de los neutrófilos por esta célula, quizá para el mecanismo de fagocitosis. Segundo estudio realizado por Yui et al.9 el uso de Arnica montana vía oral en el tratamiento de edema en ratas Wistar, mostró eficacia antiinflamatoria, reduciendo el edema en la pata (provocada pela administración de formalina), lo que concuerda con nuestro hallados, una vez que el área de edema solamente creció después de la 2 hora. Por otro lado, en T4 y T6 esta área fue substancialmente más grande. 6 El aumento del porcentaje de linfocitos en T1, sin significado asociado al edema, sugiere que el árnica activó al sistema linfocítico en el primero momento del proceso inflamatorio. Simultáneamente al aumento tardío del edema ocurrió un aumento de la cantidad de neutrófilos y reducción de la cantidad de monocitos, lo que puede ser debido al metabolismo oxidativo del fagócito frente a presencia de los flavonóides y cumarinas10. Esto sugiere que el acumulo de catabólicos extracelulares del metabolismo oxidativo de los fagócitos predispone al aumento del edema. Este proceso leva a la liberación extracelular de diversas enzimas proteolíticas y de especies reactivas del oxigeno (ROS) derivados del metabolismo oxidativo del fagócito. Esto pode culminar en el establecimiento de una lesión crónica en el tejido, debido a estas substancias aumentaren la producción y liberación de ROS por células fagocíticas que no consiguen englobar la grande masa de imunocomplejos formada10. Para confirmación deben ser hechos estudios bioquímicos específicos, para identificación de la importancia de estos componentes en el local del edema, en mayor tiempo de experimento y con mayores muestras. Concluimos así, que la acción del tratamiento crioterapéutico limita el área de edema mostrando eficacia terapéutica solamente en las dos primeras horas, mientras que la pomada de árnica además de presentar eficacia terapéutica en la primera hora, resulta en un aumento significativo a partir de la cuarta hora. 7 BIBLIOGRAFIA 1- Diebchlag WO. 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T1 0 T2 0 T4 0 T6 0 GC 47,6 3,3 48,8 4,4 44,5 8,5 50,4 4,4 GH 39,0 4,2* 45,7 6,3 50,5 7,5* 49,4 2,8 GDC 38,7 4,9* 46,0 3,0 56,1 3,6* 59,9 3,7* GDC= Grupo Control Doble-Ciego; GC = Grupo Control Lesionado; GH = Grupo Tratado con Hielo; GA = Grupo Tratado con pomada de Árnica. * Valores con significado estadístico (p < 0,05). GA TABLA 2 – Porcentaje de los leucocitos en todos los tiempos y grupos estudiados. Los valores encontrados para basófilos se mantuvieran constantes y entre 0 y 1%, por lo cual no constan en la tabla. Linfocitos Monocitos Neutrófilos Eosinófilos T1 T2 GDC T4 T6 54 9 54 9 54 9 54 9 GC 60 3 63 5 52 7* 49 6* GH 52 10 50 13 32 1* 31 8* GA 67 2* 60 2 48 3 36 3* GDC 26 11 26 11 26 11 26 11 GC 17 1 20 4 16 9 13 8 GH 28 11* 20 5 19 1 20 8 GA 15 3 22 4 10 1* 11 2 GDC 17 2 17 2 17 2 17 2 GC 21 2 16 2 31 4* 38 11 GH 19 2 29 8* 50 2* 48 2* GA 17 4 16 3 42 2* 53 3* GDC 32 32 32 32 GC 22 11 11 11 GH 11 01 00 11 GA 11 11 00 11 * Valores con significado estadístico (p < 0,05). 9 REVISTA CUBANA DE PLANTAS MEDICINAIS PRESENTACIÓN DE ORIGINALES · La extensión máxima será 8 cuartillas para los trabajos originales, incluidas las tablas y figuras. · Los artículos se presentarán mecanografiados en papel blanco, a doble espacio, con márgenes no inferiores a 2,5 cm y 60 pulsaciones (comprendidos los espacios en blanco), con un total de 28 a 30 líneas por cuartilla, escrita por una sola cara, sin tachaduras ni arreglos manuscritos. Todas las páginas se numerarán, con arábigos y consecutivamente, a partir de la primera. · Primera página. Contendrá el nombre de la institución que auspicia el trabajo; el título que no excederá las 15 palabras; nombres y apellidos completos de todos los autores ordenados según su participación (si el número es superior a 4 se aclarará, por escrito, el aporte de cada uno en la investigación o preparación del artículo); grado científico y categoría docente o investigativa más importante de cada autor, así como su dirección y teléfono. · Segunda página. Incluirá un resumen informativo de 150 palabras, como máximo, contentivo de los propósitos, procedimientos empleados, resultados más relevantes y principales conclusiones del trabajo al igual que cualquier aspecto novedoso. El autor reflejará el contenido del documento a partir de 3 a 10 términos o frases (palabras clave) al pie del resumen y en orden de importancia. Por su parte, la ECIMED le insertará los descriptores correspondientes a la indización de cada trabajo según el DeCS y el MeSH. · Referencias bibliográficas. Se mecanografiarán a 2 espacios, en párrafo francés y en hoja aparte. Se seguirán las recomendaciones contenidas en los Requisitos uniformes para preparar los manuscritos que se proponen para publicación en revistas biomédicas, confeccionados por el Comité Internacional de Editores de Revistas Médicas (CIERM). Se numerarán según el orden de mención en el texto y deberán identificarse mediante arábigos en forma exponencial. Los trabajos originales no sobrepasarán las 20 citas. Se relacionarán todos los autores del texto citado; si tiene 7 o más autores, se mencionarán los 6 primeros, seguidos de «et al.» Los títulos de las revistas se abreviarán por el Index Medicus (List of journals indexed in Index Medicus). No se destacará ningún elemento con el uso de mayúsculas ni el subrayado. Se observarán el ordenamiento de los elementos bibliográficos y el uso de los signos de puntuación prescritos por el estilo Vancouver. A continuación, se ofrecen ejemplos de algunos de los principales casos: REVISTAS 1. You CH, Lee KY, Chey RY, Menguy R. Electrogastro-graphic study of patients with unexplained nausea, bloating and vomiting. Gastroenterology 1980;79(2):311-4. Opcionalmente, se admite la omisión del número en las revistas con paginación consecutiva para cada volumen. You CH, Lee KY, Chey RY, Menguy R. Electrogastrographic study of patienst with unexplained nausea, bloating and vomiting. Gastroenterology 1980;79:311-4. Goate AM, Haynes AR, Owen MJ, Farrall M, James LA, LaiLy, et al. Predisposing locus for Alzheimer's disease on chromosome 21. Lancet 1989;1:352-5. New linking salt and hypertension [editorial]. BMJ 1981;282: 1993-4. LIBROS Y OTRAS MONOGRAFÍAS Weinstein I, Swartz MN. Pathologic properties of invading microorganism. En: Sodeman WA Jr Sodeman WA, eds. Pathologic physiology: mechamisms of disease. Philadelphia: WB Saunders, 1974:457-72. Eisen HN. Immunology: an introduction to molecular and celular principles of the immune response. 5. ed. New York: Harper and Row, 1974:406. 10 · Tablas, modelos y anexos. Se presentarán en hojas aparte (no se intercalarán en el artículo) y en forma vertical numeradas consecutivamente y mencionadas en el texto . No se aceptarán en papel fotográfico. Las tablas se ajustarán al formato de la publicación y la editorial podrá modificarlas si éstas presentan dificultades técnicas. Los autores residentes en Ciudad de La Habana o en el extranjero enviarán sus trabajos a la Ecimed o al Email: [email protected]. Los del interior del país, los entregarán al centro provincial de información correspondiente.