MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos INDICE INDICE ____________________________________________________________________ 1 1. TITULO __________________________________________________________________ 2 2. ANTECEDENTES _________________________________________________________ 2 3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ________________________________________ 3 4. JUSTIFICACIÓN__________________________________________________________ 3 5. OBJETIVOS ______________________________________________________________ 4 5.1 Objetivo general: _____________________________________________________________ 4 5.2 Objetivos específicos: _________________________________________________________ 4 6. MARCO TEÓRICO ________________________________________________________ 5 LECHE CRUDA ________________________________________________________________ 5 Generalidades. __________________________________________________________________ 5 Calidad de la leche:: ______________________________________________________________ 5 CONTAMINACIÓN ENDÓGENA DE LA LECHE ____________________________________ 5 Contaminación Exógena De La Leche _______________________________________________________ 5 Fuentes de Contaminación de exógena de La Leche ___________________________________________ 5 MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA EN LECHE CRUDA ______________________ 6 Bacterias Gram. positivas: ________________________________________________________________ 6 Bacterias Gram. Negativas ________________________________________________________________ 7 7. MARCO METODOLÓGICO ________________________________________________ 8 7.1 DIAGRAMAS DE FLUJO REAL Y TEORICO DEL PROCESO DEPRODUCIÓN PRIMARIA DE LA LECHE CRUDA DE BOVINO ____________________________________ 8 7.2 Análisis de Riesgo del proceso real de producción primaria de la leche cruda ___________ 9 8. MUESTREO _____________________________________________________________ 10 8.1 Tipo De Muestreo ___________________________________________________________ 10 8.2 Procedimiento ______________________________________________________________ 10 8.3 Toma De Muestras Para El Análisis Microbiológico _______________________________ 10 8.4 MÉTODOS ESPECÍFICO DE ANÁLISIS ____________________________________ 11 8.4.1 MÈTODOS GENERALES____________________________________________________ 11 8.4.2 MÉTODOS ESPECÍFICOS __________________________________________________ 11 8.4.2.1 Análisis Microbiológico cualitativo y Análisis Microbiológico cuantitativo ___________________ 11 9. FACTIBILIDAD __________________________________________________________ 12 10. CRONOGRAMA ________________________________________________________ 12 11. BIBLIOGRAFÍA _________________________________________________________ 13 12. ANEXOS _______________________________________________________________ 14 Norma Argentina Requisitos microbiológicos de la leche cruda ________________________ 14 Lista de patógenos que se encuentra en la leche cruda ________________________________ 14 1 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 1. TITULO ANÁLISIS DE RIESGO DE CONTAMINACIÓN POR PATÓGENOS EN LA PRODUCCIÓN PRIMARIA DE LECHE CRUDA DE LA HACIENDA “SANTA RITA” 2. ANTECEDENTES La leche proveniente de la Hacienda “Santa Rita” localizada en la provincia de Imbabura, en la ciudad de San Pablo del Lago (aprox. 63.061 habitantes en el cantón Otavalo). Se producen en promedio 800-1000 Litros de leche diarios, la producción se entrega a los distribuidores informales, para la elaboración de quesos frescos dentro de la misma zona. No existe un historial veterinario ni de manejo zootécnico, las pruebas de mastitis son realizadas esporádicamente. El establecimiento ganadero no garantiza su funcionalidad, y no brinda facilidades para buenas prácticas, mantenimiento y limpieza adecuada. La infraestructura de los corrales es inconveniente para el ganado lechero, el piso es de tierra, hay cúmulo de desechos orgánicos, no existen zonas limpias destinadas para cada actividad. Los equipos no se limpian ni desinfectan correctamente para evitar la proliferación de microorganismos. Mala calidad de piensos y tolvas, por la falta de un proveedor de referencia que certifique la inocuidad de los forrajes, piensos y agua. El agua que se utiliza para todos los procesos es potable, no cuenta con instalaciones adecuados para la disposición final de aguas negras y efluentes industriales. La hacienda cuenta con 6 personas que se encargan de los diferentes procesos, y no tienen conocimientos básicos teóricos de proceso. El personal no es sometido a exámenes clínicos (pro-cultivos) para reportar portadores sanos, capaces de provocar contaminaciones de los alimentos que se manipulan; El personal no cumplen con buenas prácticas de manufactura para higiene personal y uniformes (no utilizan mascarillas ni guantes). En las etapas de ordeño, existe una inadecuada manipulación de los instrumentos y utensilios (recipientes, pezoneras, etc.,) generando una contaminación exógena. El sistema de succión de la leche se lo hace a través de pezoneras y mangueras que luego son colocadas en el piso. El trasvase hacia y desde las cubas no se realiza bajo estrictas condiciones higiénicas. El transporte de la leche cruda se realiza en vehículos que no son destinados exclusivamente a este fin. 2 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La Hacienda “Santa Rita”, se dedica a la producción y distribución de leche de una forma informal, su producción y comercialización es realizada sin un adecuado registro sanitario ni documentos de compra/venta, el expendio de la misma se la hace de una forma clandestina. No hay capacitación para el trabajador, la infraestructura no está adecuada a estándares internacionales, y el proceso de transporte no es el adecuado, por lo que es necesario realizar un análisis de riesgos microbiológicos para este tipo de productos ya que estos van ligados directamente con la salud de la población que los consume. 4. JUSTIFICACIÓN Existe aprox. 63.061 habitantes en el cantón Otavalo, entre la cual encontramos a varios grupos vulnerables como niños, ancianos y mujeres embarazadas. Estos grupos son reconocidos como entes altamente susceptibles a la transmisión de enfermedades a través de alimentos (Leche cruda), por lo tanto mediante este proyecto se pretende concienciar a los trabajadores del peligro que está sometido la población día a día 3 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 5. OBJETIVOS 5.1 Objetivo general: Identificar y Realizar un análisis de riesgo de los puntos de contaminación por patógenos en la producción primaria de la leche. 5.2 Objetivos específicos: Realizar una lista de los principales patógenos que pueden existir en la leche cruda Bovina. Determinar los Factores de crecimiento de patógenos y posibilidad de proliferación, supervivencia de las fases del proceso de producción y expendió de la leche cruda. Levantamiento del proceso real y teórico con los posibles microorganismos presentes en las diferentes fases en exclusivo orden de severidad luego de constatar el proceso. Ejecutar el análisis de riesgo de contaminación por patógenos del proceso teórico y real. Establecer si la contaminación es de origen exógeno o endógeno proveniente del análisis de Riesgo durante el proceso producción y expendió de la leche cruda bovino de la hacienda “Santa Rita”. Comparar el proceso teórico de producción primaria de la leche cruda bovina del proceso real para establecer los puntos riesgo y/o sitios de muestreo. Aplicar técnicas y estrategias de muestreo y asegurar resultados precisos en el análisis microbiológico. Aislamiento, identificación y recuento de patógenos en el laboratorio. Recopilación y discusión de los resultados obtenidos en el laboratorio. 4 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 6. MARCO TEÓRICO LECHE CRUDA Generalidades. La leche es el producto de la secreción normal de la glándula mamaria de las hembras de los mamíferos sanos, obtenida por varios ordeños diarios, higiénicos, completos e interrumpidos. Es un líquido de color blanco y opaco, de sabor dulce, su pH es próximo a la neutralidad de (6.4- 6.6) y un aw de 0.99, son los que hacen que la leche sea un medio ideal para el crecimiento y multiplicación de microorganismos, especialmente de las bacterias. Estas bacterias pueden provenir de la micro flora normal y habitual de la vaca, del ambiente de la vaquería, las máquinas y equipo de ordeño y hasta de los mismos empleados. Calidad de la leche:: CALIDAD DE LA LECHE EN EL ESTABLO FACTORES QUE DETERMINAN LA CALIDAD DE FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD DE LA LA LECHE LECHE Salud animal Ordeño Alojamiento de las vacas Nutrición Especie y Raza Practicas de ordeño Agua Manejo de la leche Alimentación Mastitis y Período de lactancia Temperatura CONTAMINACIÓN ENDÓGENA DE LA LECHE Algunos componentes de la leche se forman en la glándula mamaria como la caseína y otros ya existentes en la sangre, que pasan directamente a constituir parte de este producto. Este proceso facilita la contaminación endógena de la leche durante su formación y almacenamiento en la glándula mamaria por los agentes físicos, químicos o biológicos que se encuentran en la sangre de los animales productores. La protección de la salud de los animales por los servicios médicos veterinarios y las aplicaciones correctas de las normas zootécnicas contribuyen a evitar importantes agentes biológicos que pueden afectar la salud del hombre. Entre estas se encuentra la brucelosis y la tuberculosis, que deja de constituir un problema sanitario, a través de la leche, por la erradicación de estas enfermedades en los animales. Contaminación Exógena De La Leche La posibilidad de crecimiento o incremento de los contaminantes en la leche durante la producción primaria está en relación directa con la temperatura a que se mantenga después de su obtención. Las principales fuentes de contaminación son las heces, el suelo, las camas, el pienso, el aire, agua, los equipos de ordeño y de almacenamiento, los manipuladores y los vectores. (Fuentes de contaminación Exógena) Fuentes de Contaminación de exógena de La Leche Aire: el aire representa uno de los medios más hostiles para la supervivencia de los microorganismos debido a la constante exposición al oxigeno, cambios de temperatura y humedad relativa, radiación solar, etc. Es por ello que solo aquellos microorganismos resistentes podrán ser capaces de permanecer en el aire y llegar a contaminar los alimentos. Los microorganismos Gram negativos mueren 5 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos rápidamente mientras que los Gram positivos y aquellos esporulados pueden persistir por largo tiempo. En el aire se pueden encontrar Micrococcus, Streptomyces y esporas de mohos como Penicillium y Aspergillus. Las levaduras raramente se encuentran en suspensiones aéreas. Agua: el agua utilizada para la limpieza de los equipos y utensilios de ordeño, la higiene del animal y del personal, debe ser lo más limpia posible. El agua puede ser una fuente importante de microorganismos psicróffilos (Pseudomonas) y por contaminación de esta, de bacterias coliformes. Suelo: el suelo es la principal fuente de microorganismos termodúricos y termófilos. La leche nunca entra en contacto con el suelo pero si los animales, utensilios y personal, de manera que es a través de ellos que los microorganismos telúricos (Clostridium) pueden alcanzar a contaminar la leche. El ordeñador: el ordeñador puede llegar a jugar un papel importante en la contaminación de la leche, sobre todo cuando el ordeño es manual. En nuestro medio es frecuente observar como el personal encargado del ordeño no se lava las manos y peor aún se las humedece en la misma leche para lograr lubricación que facilite el ordeño. Se ha señalado al ordeñador como responsable de la contaminación de la leche con microorganismos patógenos (S. Aureus, Leptospiras, E. coli, M. tubercolosis, Streptococcus, etc.). Las heridas infectadas en manos y brazos pueden ser fuentes de algunos de estos microorganismos. Estiércol: el estiércol es la fuente principal de microorganismos coliformes. Estos pueden alcanzar la leche a través del animal o del ordeñador así como también por medio de los utensilios mal higienizados. Utensilios y Transporte: el contacto de la leche con el material de ordeño y su permanencia en los tanques y transporte puede multiplicar por un factor de 2 a 50 la flora microbiana presente. De allí que la higiene adecuada de estos, por medio de agentes desinfectantes, afecta significativamente la calidad sanitaria de la leche. La flora microbiana proveniente de esta fuente puede ser diversa, pero la más frecuente es flora termorresistente, razón más que suficiente para exigir al máximo la higiene. MICROORGANISMOS DE IMPORTANCIA EN LECHE CRUDA A continuación presentamos una descripción de los principales microorganismos que pueden encontrarse en leche cruda. Patógenos de particular interés son Bacterias Gram. positivas: Listeria monocytogenes es un patógeno considerado por la FDA como uno de cero tolerancia en los alimentos, ya que puede causar desde meningitis hasta abortos en mujeres embarazadas. L. monocytogenes es un peligro para el ganado lechero ya que puede ocasionar mastitis. Estafilococos: Son anaerobios facultativos, fuertemente fermentadores. Son de gran importancia desde el punto de vista sanitario. Causan mastitis y pueden provocar enfermedades o intoxicaciones en los humanos. Staphilococus aureus produce una exotoxina que causa fuertes trastornos intestinales en los humanos, la cual es termorresistente, por lo cual no es destruida con la pasteurización. El Staphilococcus epidermidis se ve implicado en algunos casos de mastitis, por lo cual puede llegar a contaminar la leche. Bacterias esporuladas: los Bacillus son bacterias aeróbicas con actividad enzimática variada producen acidificación, coagulación y proteolisis. Los Clostridium son anaerobios estrictos, producen gas. Algunos producen toxinas patógenas (Clostridium botulinum). Ambos géneros son de poca importancia en leche cruda, su crecimiento es inhibido por las bacterias lácticas. Cobran importancia en productos lácteos como en leches pasteurizadas, quesos fundidos, leches concentradas, quesos de pasta cocida. Resisten la pasteurización por su capacidad de producir esporas, las cuales solo se destruyen a temperaturas por encima de 100 ºC. 6 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos Otras bacterias Gram +que pueden encontrarse en la leche son Corynebacterium , bacterias propionicas, Brevibacterium estos últimos se encuentran en las cortezas de algunos quesos madurados almacenados en condiciones húmedas. Bacterias Gram. Negativas Enterobacterias: los miembros de la familia Enterobacteriacea e son huéspedes normales del intestino de los mamíferos, por lo tanto su presencia en el agua y la leche se relaciona con contaminación de origen fecal. Las enterobacterias son menos abundantes en la leche que otras bacterias gran negativas, sin embargo, tienen una gran importancia desde dos puntos de vista, higiénico. Enterobacterias más comunes de la leche cruda: Escherichia coli, Enterobacter aerógenes, Klebsiella, Citrobacter, Salmonella, Shigella, Proteus, Serratia. Los últimos dos géneros se consiguen poco frecuentes, son microorganismos inocuos pero por su poder proteolítico pueden provocar alteraciones en la leche. Salmonella spp. Es una bacteria que puede causar una deshidratación crónica y muerte en los niños mientras que en el ganado puede causar abortos. Una vez la vaca es infectada con Salmonella su erradicación es difícil ya que hay cepas resistentes a antibióticos. Además, puede transmitirse por contacto directo del animal. Bacteria Dosis infectiva [células] Factores de crecimiento pH aw T ºC Metabolismo Modo de patogenicidad E. Coli 10 ----- ----- 7-48 Listeria. M 100 4.3-9.1 ----- 1.1-45 Anaerobio Facultativo Infectante exógeno S. Aureus 106 cél /g 4.5 -7-9.4 >0.86 10-35-47 Anaerobio Facultativo Intoxicante exógeno Salmonella 15 – 20 4.5-9 0.93 Anaerobio Facultativo Infectante endógeno y 7 5-45 Anaerobio Facultativo Infectante Endógeno y exógeno exógeno MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 7. MARCO METODOLÓGICO 7.1 DIAGRAMAS DE FLUJO REAL Y TEORICO DEL PROCESO DEPRODUCIÓN PRIMARIA DE LA LECHE CRUDA DE BOVINO 8 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 7.2 Análisis de Riesgo del proceso real de producción primaria de la leche cruda ETAPA El heno y la paja siempre cargada de M.O contaminan la precedentes de excrementos, paja y leche con M.O alimentos, los cuales son Micrococcus y transportados por el aire. Las primeras fuentes de peligros microbiológicos en los piensos son los pastizales contaminados, los forrajes y las harinas proteicas animales y vegetales suministradas directamente a los animales. clostridios. Lavado de las Inadecuada higiene del personal: ubres : Agua no contaminada: E. coli, S. Aureus Pseudomona Є Los microorg. Alcanzan la ubre, Mastis: S. Aureus pueden llegar a contaminar la leche Via sanguínea : antes o después del ordeño. Estos salmonella, pueden alcanzar la leche por vía brucella, de la vaca PARA EL ORDEÑO Colocación de las pezoneras ORDEÑO MECÁNICO PC Colocación de recipientes Brucella(piensos) mamaria mycobacterium Pezonera mal lavadas, desinfectadas micrococos y Tamb=27ºC Enterecocos HR= 82% microflora psicrófila y enterobacterias Recolección en recipientes que nos Mesófilos: E. Coli, son de acero inoxidable L. Monocytogenes Recipientes mal lavados y salmonella, S. Aureus desinfectados ENFRIAMIENTO agua fría EXOGENA Є B. Estanques de T= 14-27º C Salmonella EXOGENA Є EXOGENA PC RECOLECCIÓN mohos y levaduras y secadas Utensilios CONDICIONES Aire: Micrococcus, Alimentación EXÓGENA Є La atmósfera de los establos esta ENDÓGENA DE LA VACA BACTERIAS Є PREPARACIÓN FUENTES DE CONTAMINACIÓN Temperatura inadecuada de Tleche= 35ºC pH= 6.3-6.8 t= 5-10 min psicrofilas: Pseudomonas enfriamiento; tiempo Mesófilos: E. Coli, Insuficiente de enfriamiento L. Monocytogenes No existe control de temperatura salmonella, T= 6-8 ºC S. Aureus ALMACENAJE Transporte Y inadecuado TRANSPORTE PC 9 EXOGENA Є Mesófilos: E. Coli, Supervivencia Proliferación contaminación endógena Contaminación exógena Є Tiempos largos de espera Interrupción en la cadena de frío No existe control de temperatura L. Monocytogenes S. Aureus B. Cerus B. psicrofilas: Pseudomonas Tamb: 14- 26ºC Tleche : 8-16ºC pH= 6.3-6.8 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 8. MUESTREO 8.1 Tipo De Muestreo Mediante las comparaciones entre el proceso experimental y el proceso teórico se decidió realizar un muestreo en tres puntos donde hay mayor riesgo de contaminación ya sea propia de la leche o contaminación exógena. Se realizara en los siguientes puntos: Ordeño (Al momento de salir la leche por el conducto de la máquina de ordeño) Equipos y utensilios Transporte Se determinó realizar el muestreo no probabilístico, selección intencional 8.2 Procedimiento Ubicación del estudio. El estudio se realizará en la Hacienda “Santa Rita ” ubicado la provincia de Imbabura, en la ciudad de San Pablo del Lago en el cantón Otavalo, donde se tomaran muestras para análisis microbiológicos de los diferentes puntos de riesgo proveniente de esta Hacienda. 8.3 Toma De Muestras Para El Análisis Microbiológico Cuando las muestras de leche o derivados lácteos se destinan a análisis de tipo microbiológicos, es necesario tomar una serie de precauciones que además de garantizar la obtención de muestras verdaderamente representativas, eviten la contaminación por fuentes externas y la proliferación de la carga bacteriana ya presente en los productos. Entre esas precauciones destacan las siguientes: a) Todos los equipos empleados en la toma de muestras deben encontrarse estériles y desinfectados antes de cada recolección. Por ejemplo, para tomar varias muestras de leche cruda puede emplearse un probador adecuado que se va esterilizando en un baño de agua hirviente (1 minuto) o una solución que contenga 250 a 500 ppm de cloro residual (“esterilización química”) cuyo exceso se elimina por enjuague en agua estéril a fin de evitar que el desinfectante contamine el producto, donde actuaría como inhibidor microbiano. b) Tomar precauciones para evitar la contaminación externa, incluso de las manos de la persona que hace la operación. c) Recolectar porciones representativas (no menos de 150 g) directamente de tanques, recipientes de transporte o pesada, pero no de envases al por menor, los cuales deben tomarse completos en numero proporcional al lote. Parámetro Rcto. Aerobios Mesóf. 10 Plan de muestreo Categoría Clases 3 3 Límite por gr/ml n c m M ^5 5 1 5x10 10^6 MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 8.4 MÉTODOS ESPECÍFICO DE ANÁLISIS 8.4.1 MÈTODOS GENERALES En este caso se utilizó las técnicas certificadas por los organismos de la AOAC y normas ISO, las cuales ofrecen resultados confiables en el aislamiento e identificación de las bacterias en estudio. 8.4.2 MÉTODOS ESPECÍFICOS 8.4.2.1 Análisis Microbiológico cualitativo y Análisis Microbiológico cuantitativo Bacteria Código de la técnica Justificación Staphylococcus Aureus ISO Escherichia Coli Método oficial de la AOAC 998.08 Método para determinar E. coli en los alimentos por el método petrifilm Determinación selectiva y cuantitativa de Staphylococcus Aureus Determinación cuantitativa y cualitativa Escherichia Coli por medios selectivos Salmonella Listeria Monocytogenes Medio de Cultivo Agar Baird-Parker M.O Estafilococo Aureus BHI Estafilococo Aureus TSB Listeria Monocytogenes Agar PALCAM (Agar Selectivo para Listeria) Listeria Monocytogenes Salmonella Enriquecimiento 11 Gisela Aguirre USDA-FSIS ISO 11290 Método altamente selectivo para aislar e identificar presencia o ausencia de Salmonella. La composición de los medios es selectiva para aislar Listeria Justificación Contiene Cloruro de litio y Telurito para la inhibición de la flora acompañante en tanto que el Piruvato y la Glicocola actúan favorecienndo selectivamente el crecimiento Es especialmente adecuado para el cultivo es Estafilococos, su composición es D(+)Glucosa, Cloruro Sódico, Hidrogeno Fosfato disódico Adecuado para cultivos exigentes, exentos de sustancias inhibidoras e indicadoras. Medio altamente selectivo y diferencial. La selectividad del medio se debe a las sustancias inhibidoras del crecimiento, tales como Polimixina B-sulfato, Acriflavian, cloruro delitio y Ceftacidina. Este medio tiene una mayor selectividad que otros medios, considerándose mayor rendimiento en Salmonella Colonias Negras, lustrosas convexas. Dentro del halo claro presencia de anillos opacos no visibles antes de las 48 horas de incubación. Crecen formando colonia de color verde grisáceo con un halo marrón-negro. MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 9. FACTIBILIDAD MÉTODO OFICIAL MEDIOS Y REACTIVOS DISPONIBILIDAD AGAR BAIR PARKER AGAR BHI si Método oficial de la AOAC 998.08 Método para determinar E. coli en los alimentos por el método petrifilm AGUA DE PEPTONA PETRIFILM si Gisela Aguirre Caldo lactosado Tetrationato de miuller Rappaport Vassidialis Bismuto sulfito XLD agar Hektoen Entérico SI USDA-FSIS ISO 11290 TSB PALCAM ISO SI 10. CRONOGRAMA MUESTRA Enriquecimiento MICROORANISMOS MEDIO FASE Ordeño mecánico Ordeñadores Agua de peptona Petrifilm Enriquecimiento Agua de Peptona Agua de Peptona Baird Parker BHI Coagulasa Catalasa TSB Preenriquecimiento MARTES MIERCOLES JUEVES LUNES Enriquecimiento MARTES EB/ Enriquecimiento PALCAM OXFORD Aislamiento Identificación E. COLI transporte Ordeño Ordeñadores S. AUREUS Transporte Ordeño mecánico Equipos y utensilios L. MONOCYTOGENES transporte Ordeño Ordeñadores Equipos 12 salmonella Caldo lactosado Tetrationato de miuller Rappaport Vassidialis XLD agar Hektoen Entérico Aislamiento Identificación Aislamiento TÉCNICA (Días) LUNE AOAC ISO MIERCOLES Identificación JUEVES Preenriquecimiento LUNES ISO MIERCOLES JUEVES Lunes Preenrequcimiento Enrequecimiento Enriquecimiento Selectivo Selectivo y diferencial Identificación Aislamiento selectivo MARTES Martes Gisela Aguirre Miércoles Jueves Lunes Martes MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 11. BIBLIOGRAFÍA MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS, Fundamentos ecológicos para garantizar y comprobar la inocuidad y la calidad de los alimentos, D.A.A. MOSSEL, editorial ACRIBIA, S.A, ZARAGOZA(España), primera edición. PROGRAMA DE SALUD PUBLICA VETERINARIA, “Guía para el establecimiento de sistemas de vigilancia epidemiológica de enfermedades transmitidas por alimentos (VETA) y la investigación de brotes de toxi-infecciones alimentarias”, INPPAZ,Pág. 16, 20,26, 27. ROBINSON. R.K, “Microbiologia Lactologíca“Vol 2, Pág 151-217 FOSTER, NELSON, “Microbiologia de la leche“ Pág 120 -151 SPEER EDGAR, LACTOLOGIA INDUSTRIAL editorial ACRIBIA, S.A, Pág 25-74 Dr. SANCHEZ, Carlos, “Tratado de Microbiología”, 22ava edición, México DF, Ed Interamericana, 1991, Pág Capitulo 13,14,15,17,18,19,21. E:\Microbiologia\clostridium perfringes.htm E:\Microbiologia\e.coli.htm E:\Microbiologia\campylobacter spp.htm E:\Microbiologia\clostridium botulini.htm E:\Microbiologia\Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA).htm E:\Microbiologia\ETA.htm E:\Microbiologia\Listeria.htm E:\Microbiologia\salmonella spp.htm E:\Microbiologia\stafylococus aureus.htm http://www.tecnologiadelqueso.com/noticias/20010.php http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/notas_de_microbiologia_d e_los_al.htm http://cvu.rediris.es/pub/bscw.cgi/d311175-1/*/Normicro/ISO MICROORGANISMS IN FOODS 2 Sampling fo microbiologica analysis:Principles and specific applications, ICMSF Blackwell Scientific Publications 13 (*) INEC (http://www.inec.gov.ec/) MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Análisis de Riesgo de Patógenos 12. ANEXOS Norma Argentina Requisitos microbiológicos de la leche cruda Microorganismos Coliformes, NMP/g (a 30°C) Coliformes, NMP/g (a 45°C) Estafilococos coagulasa (+), UFC /g Salmonella spp, UFC/25 g Listeria monocytogenes, UFC /25g Criterios de Aceptación n=5; c=2; m=100; M=5000 n=5; c=2; m=10; M=500 n=5; c=2; m=10; M=1000 n=5; c=0; m=0 Categoría ICMSF (1) 5 5 5 10 n=5; c=0; m=0 10 Lista de patógenos que se encuentra en la leche cruda Bacterias Escherichia Coli Staphylococcus Aureus Salmonella Listeria Monocytogenes 14 Alimentos implicados Alimentos crudos, leche sin procesar y derivados, huevos pollos frutas Crece en comidas, lácteos Producen entero toxinas. Habitual en leche no pasterizada Fuentes fecales : contaminación leche y productos lácteos Alimentos fermentados Productos frescos, leche y sus derivados Factores de crecimiento Anaerobio facultativo T= 7ºC-50ºC t optima= 37ºC pH= 6.9-7.4 AW= 0.95-1 Anaerobio facultativo T= 10-35-47 ºC T optima = 40ºC P. toxina T= 25-37-40ºC pH= 4,5-7-9,4 P toxina pH= 5,5-7-9 Aw= >0,86 – 0,90 toxina Aerobiosis Resistentes al 10 % Aerobio facultativo Mesófilo T= 45ºC Tolerante al frio (4-5ºC) no crecen congelación Aw= 0.93 Eh= aerobios facultativos Poco resistente a agentes curado (5.8%) Anaerobio facultativo T optima = 30-37º C t min= 4ºC pH= 6 resiste bajo pH Acido tolerante tolera % salinas Crio tolerante Característica Anaerobio facultativo bacteria endógena y exógena Toxinas termoresistente 30min---- 100ºC Medidas de control de la temperatura De conservación post tratamiento , higiene en manipulación Destruidos tratamiento térmico 27 min ----- 60ºC No resistentes al calor Sensible a calor En donde se encuentran Heces de animales, hombre Comensal : de piel y mucosa Fosas nasales , heridas Portador. Manipulador contaminación cruzada Hombre, animales, Contaminación exógena y endógena Aves, hombre, suelo