INTRODUCCIÓN

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
FACULTAD DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA Y TECNOLOGIA
CATEDRA DE BIOQUÍMICA
PRACTICA DE LABORATORIO Nº 4
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIÓN
Todos los organismos heterótrofos obtienen fundamentalmente su energía de las reacciones de
óxido-reducción a partir de moléculas combustibles, particularmente de la D-glucosa. En los
organismos aeróbicos la mayor parte de la energía se obtiene de la oxidación total de los
combustibles orgánicos por el oxígeno molecular (proceso de respiración). Los heterótrofos
anaerobios también obtienen la mayor parte de la energía de las reacciones de óxido-reducción,
pero en este caso, es el proceso de fermentación en donde se produce una oxidación parcial del
combustible y el último aceptor electrónico es un intermediario orgánico como el acetaldehído en el
proceso de fermentación alcohólica.
Los organismos que pueden vivir anaeróbicamente emplean, por tanto, la fermentación como
fuente de energía y se dividen en dos clases:
-
Anaeróbicos estrictos: no pueden emplear el oxígeno (Clostridium botulinum)
Anaeróbicos facultativos: pueden vivir tanto en ausencia como en presencia de oxígeno. Caso
de las levaduras.
En 1861, Luis Pasteur comprobó que, por gramo de glucosa consumida, un cultivo de levadura
crece a mayor velocidad en presencia de aire que en su ausencia. Este hecho indica que cuando hay
aire, la levadura metaboliza la glucosa de forma más eficiente que en condiciones anaeróbicas, por
lo que para obtener la misma cantidad de energía metabólica el consumo de glucosa es menor en
presencia de oxígeno. Así pues este efecto se conoce con el nombre de Efecto Pasteur que consiste
en la disminución de la velocidad de la glucólisis al aumentar la asequibilidad del oxígeno por la
célula.
OBJETIVOS
-
Determinar la cantidad de glucosa consumida por un cultivo de levadura en condiciones
aeróbicas y anaeróbicas, utilizando el método de Lane-Eynon (fehling modificado).
-
Comparar la eficiencia energética, en el uso de la glucosa, en el proceso anaeróbico y aeróbico
MATERIALES
 1 Pinza
 1 gotero P/E
 6 Fiolas de 250 ml P/ E
 Tapones
 1 Beakers de 250 ml P/ E
 Tubos de ensayo
 2 Beakers de 100 ml P/E
REACTIVOS
Soluciones de Felhing (A y B)
Solución de azul de metileno al 0,2%
(A) Solución de Sulfato de Cobre
Solución de glucosa al 0,20% a PH 3,6
(B) Solución de Tartrato alcalino
Solución de glucosa al 0,25% a PH 6
Solución de levadura al 5%
Solución de glucosa patrón al 0,25%
NaOH 1 Mc
Se trabajará en equipos de 4 estudiantes
PROCEDIMIENTO
1.- Tome una (1) fiola de 250 ml y 1 Beakers de 250 ml y procéselas de la siguiente manera:
a) Condición anaeróbica: esta condición se garantiza por la rápida saturación con CO2 del
ambiente en la fiola cerrada (con un tapón de goma). Agregar 50 ml de glucosa 0,20% a pH 3,6
de concentración en una fiola y colocarle un tapón de goma. En el mesón encontrará un frasco
contentivo de la solución de glucosa con las condiciones de PH óptimo.
b) Condición aeróbica: Condición que se garantiza por el acceso del (O2) en el Beakers
descubierto y con agitación constante (30 minutos). Agregar 50 ml de glucosa 0,25% a pH 6 de
concentración en un Beakers (en el mesón encontrará un frasco contentivo de la solución de
glucosa con las condiciones de ph óptimo.)
2.- Agregue a la fiola de la condición anaeróbica (a) y al Beakers de la condición aeróbica (b) 5 ml
de levadura al 5%, inmediatamente se llevan al agitador por ½ hora. El tiempo comienza a
transcurrir desde que se añade la levadura.
3.- Transcurrida la media hora se agrega 5ml de NaOH (1Mc) a ambas condiciones (para inactivar
las levaduras) y luego, se procede a titular la solución de Felhing.
Nota: Para realizar esta titulación proceda primero a la valoración de la solución de Felhing con una
solución patrón de glucosa al 0,25% y luego titular con cada una de las soluciones de levadura
(condición anaeróbica y aeróbica).
4.- Se procede a titular la solución de Felhing como sigue:
a) Colocar en la plancha para calentamiento una fiola con la solución de Fehling (Ver
composición)
Composición de la Solución de Felhing
-
5 ml de tartrato de sodio y potasio (Bureta)
-
5 ml de CUSO4 5H2O (Bureta)
10 ml de H2O destilada (Bureta)
b) Enrasar una Bureta con el patrón de azúcar (Glucosa al 0,25%)
c) Al comenzar a hervir la solución de Felhing dejar caer gota a gota la solución patrón de azúcar
desde la Bureta, cuando se pierda el color azul agregar 20 gotas (gotero) de azul de metileno y
continuar la titulación hasta que cambie a color ladrillo y la espuma sea totalmente translúcida.
d) Repita la titulación con solución patrón de glucosa al 0,25%
e) Tomar nota del volumen de azúcar patrón gastado en cada fiola (tome un promedio para los
cálculos)
5.- Efectúe el procedimiento 4 dejando caer gota a gota desde la Bureta la solución en condiciones
anaeróbicas primero y después repetir para la condición aeróbica (en este caso se realizará una sola
titulación por cada condición).
6.- Efectúe los cálculos como sigue:
CONDICIÓN AERÓBICA:
V1 = 22,2 ml (solución de glucosa patrón)
C1 = 0,25% = 0,25 gr/100ml = 2,5 mg/ml
V2 = 28,6 ml (solución de glucosa + levadura)
C2 = 
V1 x C1 = V2 x C2
C2 = 22,2 ml x 2,5 mg/ml = 1,94 mg/ml
28,6 mg
CONDICIÓN ANAERÓBICA:
Azúcar que queda para la condición aeróbica.
V1 = 22,2 ml (solución de glucosa patrón)
C1 = 2,5 mg/ml
V2 = 37,8 ml (solución de glucosa + levadura)
C2 = 
C2 =
C2 = 22,2 ml x
37,8 ml
2,5 mg/ml =
C2 = V1 x C1
V2
1,46 mg/ml
V1 x C2
V2
Azúcar que queda para la condición
anaeróbica
AZÚCAR QUE SE CONSUME
Para la condición aeróbica
2,5 mg/ml - 1,94 mg/ml
= 0,56 mg/ml
Para la condición anaeróbica
2,5 mg/ml
- 1,46 mg/ml = 1,04 mg/ml
7.- Concluya sobre la diferencia en el consumo de glucosa en condiciones anaeróbicas y aeróbicas.
UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
FACULTAD DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA Y TECNOLOGIA
CATEDRA DE BIOQUÍMICA
Fecha
Grupo
Nota
PRACTICA DE LABORATORIO Nº 3
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
NOMBRE
CARNET
Resultados obtenidos en la titulación
Volumen gastado en la titulación
Solución patrón
Solución en condición aeróbica
Solución en condición anaeróbica
Post Laboratorio N°3
1) Determinación cuantitativa de glucosa usando el reactivo de Fehling.
2) Calcular la concentración de glucosa para ambas condiciones (aeróbica y anaeróbica)
3) Esquematizar las rutas metabólicas empleadas para metabolizar la glucosa en condiciones
aeróbicas y anaeróbicas.
4) ¿Cuántos ATP se produce por molécula de glucosa en condiciones aeróbicas y en condiciones
anaeróbicas?