Elaborado por: Analista LANASEVE Rige a partir de: 28/03/11 Código: IA-MBA-PE-008 Control de Ambiente y Superficie de Cámaras de Flujo Laminar y Mesas de trabajo Versión 04 Página - 1 - de 3 Revisado por: Coordinador Técnico de Sección Aprobado por: Jefe de Sección 1. Objetivo Establecer un procedimiento para el control microbiológico del ambiente y las superficies de las mesas de trabajo y las cámaras de flujo laminar. 2. Alcance Se aplica al Laboratorio de Microbiología de Alimentos 3. Responsabilidad y Autoridad El Jefe de sección debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento. El Coordinador Técnico de Sección debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento. El analista debe ejecutar las actividades descritas en este procedimiento. 4. Definiciones No aplica 5. Abreviaturas y/o Siglas No aplica 6. Referencias IA-MBA-PE-008-RE-001 Análisis de superficie IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y superficies IA-MBA-PE-004-RE-001 Limpieza de mesas de trabajo y cámaras de flujo laminar Manual para el control de calidad de los alimentos 7. Descripción del Procedimiento 7. 1 Materiales Hisopos estériles Bolsas estériles con esponja Petrifilm Recuento Aerobio Petrifilm Recuento de Hongos y Levaduras Tubos de 10 ml de Agua peptonada Tubos de 10 ml y 15 ml de Buffer Butterfield Tubos de 10 ml de Caldo D/E Neutral Tubos de 5 ml de Caldo Letheen Agua peptonada Caldo Ec modificado Caldo UVM Listeria Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Analista 7.2 LANASEVE Rige a partir de: 28/03/11 Código: IA-MBA-PE-008 Control de Ambiente y Superficie de Cámaras de Flujo Laminar y Mesas de trabajo Versión 04 Página - 2 - de 3 Revisado por: Coordinador Técnico de Sección Aprobado por: Jefe de Sección Control de ambiente 7.2.1 Agregar 1 ml de butterfield a la placa de petrifilm Recuento Aerobio y presionar con el dispensador. 7.2.2 Dejar a temperatura ambiente por 30 minutos para que solidifique el agar. 7.2.3 Exponer por 15 minutos en el área a ser muestreada; con una cinta adhesiva pegada en la parte externa se sostiene la parte superior del petrifilm. 7.2.4 Mantener encendida la cámara durante el tiempo de exposición de la placa y en las mesas de trabajo el mechero encendido. 7.2.5 Incubar a 35 ºC 2 ºC por 48 horas. 7.2.6 Realizar el conteo de las colonias por placa, reportar como número ufc/15 min / 40 cm2 para recuento de Mesófilos y ufc/15 min / 60 cm2 para recuento de Hongos. 7.2.7 Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y superficies 7.2.8 Evaluar los resultados obtenidos ;si se obtiene un valor mayor al límite de aceptación (1 ufc/min) se deben tomar las acciones correctivas necesarias (ver apartado 7.5) 7.2.9 Realizar el control de ambiente una vez al mes en las mesas de trabajo y las cámaras de flujo laminar. 7.3 Control de limpieza y desinfección de superficies 7.3.1 Realizar el control de superficie en un área previamente desinfectada. 7.3.2 Introducir un hisopo estéril en un tubo de 5 ml de Caldo Letheen. 7.3.3 Frotar con el hisopo un área de aproximadamente 50 cm2 7.3.4 Introducir en el tubo el hisopo y agitar bien. 7.3.5 Pasar 1 ml de ese cultivo a un petrifilm de Recuento de Aerobios, presionar con el dispensador. 7.3.6 Incubar a 35 ºC 2 ºC por 48 horas. 7.3.7 Contar las colonias y calcular el número ufc/cm2 de la siguiente forma: Nº ufc x 5 ml 50 cm2 7.3.8 Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y superficies 7.3.9 Evaluar los resultados obtenidos de acuerdo a la siguiente tabla: Resultado 0-10 ufc/cm2 10-100 ufc/cm2 Mayor de 100 ufc/cm2 Evaluación de limpieza y desinfección Conforme Parcial No conforme 7.3.10 Tomar las acciones correctivas necesarias si se obtiene una condición parcial o no conforme de la limpieza de la superficie de trabajo analizada (ver apartado 7.5). 7.3.11 Realizar este control una vez al mes en las mesas de trabajo y las cámaras de flujo laminar. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Analista LANASEVE Rige a partir de: 28/03/11 Código: IA-MBA-PE-008 Control de Ambiente y Superficie de Cámaras de Flujo Laminar y Mesas de trabajo Versión 04 Página - 3 - de 3 Revisado por: Coordinador Técnico de Sección Aprobado por: Jefe de Sección 7.4 Análisis de Superficie (Determinación de patógenos) 7.4.1 Realizar el control de superficie en un área previamente desinfectada. 7.4.2 Hidratar una esponja estéril con el medio de cultivo adecuado de acuerdo al tipo de análisis, como se detalla a continuación: Análisis Medio hidratante Medio de enriquecimiento E.coli O157:H7 10 ml de Butterfield 100 ml Caldo Ec modificado Listeria monocytogenes 10 ml de Caldo D/E Neutral 200 ml Caldo UVM Listeria Salmonella spp. 10 ml de Agua Peptonada 50 ml Agua Peptonada 7.4.3 7.4.4 7.4.5 7.4.6 7.4.7 7.4.8 7.5 Muestrear un área de 0,4 m2 aproximadamente de cada una de las mesas de trabajo y todo el área de las cámaras de flujo laminar. En el caso de la determinación de E.coli O157:H7 agregar 15 ml de Butterfield después de tomar la muestra. Seguir los análisis de acuerdo a la metodología empleada por el laboratorio. Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-001 Análisis de superficie. Tomar las acciones correctivas necesarias si se determina la presencia de los microorganismos patógenos: E.coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Salmonella spp. (ver apartado 7.5) Realizar el análisis de patógenos cada tres meses en las mesas de trabajo y las cámaras de flujo laminar. Acciones correctivas 7.5.1 Si en el resultado del control de ambiente se obtiene un valor mayor de 1 ufc/min se deben revisar el estado del filtro de la cámara, limpiarlo y desinfectarlo debidamente. 7.5.2 Cuando en el control de limpieza de superficie se obtiene un RT mayor de los niveles aceptables se deben revisar el registro IA-MBA-PE-004-RE-001 para verificar si se realizó una limpieza pre-operatoria y post-operatoria. En el caso de que se haya realizado la limpieza previa y se detectara un RT mayor de 10 ufc/cm2 se debe evaluar el estado de la solución de desinfectante en uso (verificar la fecha de vencimiento, la concentración, etc) para decidir si se debe utilizar un nuevo desinfectante. 7.5.3 Cuando alguno de los análisis de E.coli O157:H7, Listeria monocytogenes y/o Salmonella spp. da un resultado positivo se deben revisar el registro IA-MBA-PE-004-RE-001 y evaluación del desinfectante en uso. Tomar las medidas necesarias y volver a realizar el análisis de superficie de nuevo. Si el proceso está bajo control y se determina nuevamente un resultado positivo se debe cambiar el desinfectante. 7.6 Equipo de protección y medidas de Bioseguridad Se aplican las normas de bioseguridad para laboratorios de nivel NB-2 Potencial Moderado 8. Anexos No aplica Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada