TXA 025 - Universidad Autónoma del Estado de México

PROPIEDADES DE LOS COMPUESTOS CON CAPACIDAD ANTICOLINESTERÁSICA PRESENTES EN MUESTRAS DEL SISTEMA
HIDROLÓGICO DEL ESTADO DE TLAXCALA
1,2Juana Fernández-López, 1,2Guilermina Palomec Sánchez, 2Juana Sánchez-Alarcón, 1Rosa
María López-Durán, 1*José Luis Gómez Olivares, 1,2Rafael Valencia-Quintana. 1Departamento de
Ciencias de la Salud. Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa. Av. San Rafael Atlixco 186.
Vicentina. CP. 09340. México. DF. Fax: 55+5804-47-27. e-mail: [email protected]. 2Centro de
Investigación en Genética y Ambiente y Posgrado en Ciencias Ambientales. Universidad Autónoma
de Tlaxcala. Av. Universidad No. 1. Col. La Loma Xicohténcatl. CP. 90070, Tlaxcala, Tlax. México.
Fax 012484815500. *Corresponde al autor
Cartel (X) Temática (Toxicología y Salud Ambiental)
Palabras clave: contaminación, plaguicidas, colinesterasas
Introducción. Los compuestos con capacidad
inhibidora de las colinesterasas (ChEs) pueden
tener dos vías: a) interaccionar con el sitio
activo vía el residuo de la serina (200Ser) como
es el caso de plaguicidas organofosforados y
carbamicos, y b) bloqueando la entrada del
mismo sitio, siendo el caso del detergente,
Triton X-100. En este mismo foro, en un trabajo
previo mostramos que la: acetilcolinesterasa
(AChE) y butirilcolinesterasa (BuChE) de
músculo de ratón se inhibían al incubarse con
muestras de agua del sistema hidrológico del
estado de Tlaxcala. Evidenciando que la
actividad colinesterásica (ChEsa) es un sensor
de la presencia en el ambiente de agentes anticolinesterásicos, que conlleva un riesgo a la
salud humana. Objetivo Establecer las
propiedades de los compuestos con capacidad
anti-colinesterásica presentes en muestras del
sistema hidrológico del estado de Tlaxcala.
Metodología. Se emplearon ratones silvestres
Peromyscus, que se sacrificaron por exceso de
vapores de éter dietílico y dislocación cervical,
se obtuvo la masa muscular de las
extremidades. La actividad ChEasa se extrajo
utilizando amortiguador Hepes-salino sin
detergente para liberar las ChEs débilmente
ligadas a la membrana (S1) y con detergente
para liberar a las enzimas fuertemente unidas a
la membrana (S2). La actividad ChEasa se
estimó por tetraplicado por el método de Ellman
que se basa en el uso de los tioanálogos;
acetil- y butiriltiocolina, e los inhibidores
específicos; Iso-OMPA (BuChE) y BW51c251
(AChE) respectivamente. Se emplearon 16
muestras del sistema hidrológico del estado de
Tlaxcala previamente confirmadas que inhibían
a las ChEs. Se midió el pH en las muestras de
agua antes y durante varios tiempos, para
descartar interferencia en la actividad
enzimática. Para conocer las características de
los
compuestos
con
capacidad
anticolinesterásica en las muestras de agua, se
emplearon tres enfoques: a) dilución de la
muestra 1:5 (V/V), b) incubación a temperatura
ambiente durante 3 meses, c) ebullición
durante 10 min, d) Interacción con una matriz
de afinidad (Proteína A-AChE). La variación en
el potencial inhibidor se evaluó por un
micrométodo al incubar las muestras con los
distintos extractos musculares. Resultados y
discusión. En músculo esquelético de ratón
silvestre, la actividad colinesterásica fue
abundante. La actividad AChE fue superior
entre 1.2 y 1.4 veces a la actividad BuChE. Los
resultados mostraron que todas las muestran
presentaron pH ácido, y que no interfirió en la
estimación de la actividad enzimática. Teniendo
en cuenta, que el cromógeno (ácido ditionitrobenzoico, DTNB) es sensible a pHs
extremos. La dilución de las muestras provocó
disminución en la capacidad de inhibición en
ambas ChEs. Los compuestos con capacidad
inhibidora presentes en las muestras de agua,
al parecer son termoestables, debido a que, la
incubación a temperatura ambiente por tres
meses o la ebullición, no disminuyeron su
capacidad inhibidora. Finalmente, la interacción
de las muestras de agua con la matriz de
afinidad, proteína A-AChE mostró que los
compuestos interaccionan directamente con la
enzima vía el sitio activo. Conclusiones. Los
compuestos presentes en las aguas del
sistema hidrológico del estado de Tlaxcala son
termosestables, su capacidad de inhibición se
reduce con la dilución y ebullición, e
interaccionan directamente con el sitio activo
de la acetilcolinesterasa. Agradecimientos.
Este trabajo es parte del proyecto FOMIX-CONACyT TLAX2004-C01-21: “Diagnostico de la problemática ambiental
generada por la exposición a contaminantes ambientales
presentes en aguas superficiales con énfasis en sus
impactos en la salud”.