Actividades del año 2009 Tuberculosis bovina M.V. Bernardo Alonso SENASA-Argentina Av. Fleming 1653, Martínez, Buenos Aires Tel.: (+54-11) 4836-1992 / 1173, Fax: (+54-11) 4836-1992 [email protected] / www.senasa.gov.ar Resumen de las actividades generales relacionadas con la enfermedad Las actividades principales del área pueden dividirse en algunos grandes grupos: a) b) c) d) e) f) Control y evaluación de reactivos: de esta manera se controlan la totalidad de las series de PPD bovina elaboradas por laboratorios privados productores de dicho reactivo. En la República Argentina y dentro del Plan Nacional de Control y Erradicación de la Tuberculosis Bovina, la tuberculinización constituye la única prueba oficialmente aceptada para la certificación de rodeos libres de la enfermedad, en este sentido, como ejemplo durante el año 2009 se controlaron casi 3.000.000 de dosis, constituyentes de 14 series. Elaboración de reactivos biológicos: DILAB, a través de su área de micobacterias elabora también PPD bovina y aviar. Si bien las cantidades son considerablemente menores a los producidos por la industria privada, (32.500 dosis de ppd bovina y 10.000 dosis de ppd aviar en este año 2009) las series elaboradas en el organismo oficial tienen una doble finalidad, por un lado constituirse en patrones regionales, los cuales son utilizados como referencia para la estandarización de los reactivos que se aplicarán en el marco del programa de control y erradicación de la enfermedad ya mencionado y por otro lado son las tuberculinas que habitualmente utiliza el propio personal de SENASA en sus certificaciones a campo, las universidades o los institutos de investigación gubernamentales. Diagnósticos: En cuanto al diagnóstico bacteriológico, rutinariamente se utiliza el aislamiento a partir de medios de cultivo tradicionales, continuando con la identificación por los métodos bioquímicos recomendados habitualmente para micobacterias, habiéndose desarrollado en los últimos años la posibilidad de identificación mediante técnicas moleculares, utilizando PCR (especialmente sondas dirigidas a hsp65, is6110 y is900) o mediante enzimas de restricción (PRA con BstEII y HaeIII). En este sentido este laboratorio constituye un centro de referencia nacional al cual llegan, ya sea envíos realizados por el propio personal de SENASA, como muestras y cepas remitidas por otros laboratorios no especializados en busca de una confirmación definitiva, con un promedio anual de aproximadamente 50 muestras. Provisión de cepas: el SENASA, a través de su Dirección de Laboratorios provee, renueva y actualiza las cepas que se usan en la fabricación de tuberculinas a nivel nacional (M. bovis AN5 para la PPD Bovina y M. avium D4ER para la PPD aviar), estando también a disposición de aquellos servicios oficiales de los países que lo soliciten. Por otro lado, y a raíz de este proceso de búsqueda, recepción y tipificación de muestras antes mencionado se posee también un interesante banco de cepas disponible para aquellos laboratorios dedicados a investigación o simplemente para aquellos que necesiten de controles confiables en sus diagnósticos. Evaluación de nuevas técnicas: como apoyo al Programa de Control y Erradicación de Tuberculosis el laboratorio tiene la misión de evaluar nuevas técnicas diagnósticas. En este marco actualmente se están comenzando las pruebas a campo y en frigoríficos para evaluar la verdadera utilidad en la República Argentina de las técnicas de estimulación de la liberación de gamma interferón y la de polarización fluorescente para el diagnóstico de tuberculosis bovina. Entre las objetivos de este siguiente año, figura el seguir consolidando el diagnóstico molecular a través de la incorporación de nuevas sondas y puesta a punto de algunas técnicas de seguimiento epidemiológico como el spoligotyping. Capacitación y consultas: el laboratorio se ha constituido a lo largo de los años en una fuente de capacitación y consulta, ya sea como apoyo a nuestro programa de control en la redacción de normas, disposiciones, resoluciones y sugerencias que hacen al diagnóstico de la tuberculosis animal, como en la formación y adiestramiento de profesionales y técnicos que trabajan con esta enfermedad. Dicha capacitación se vino realizando de manera formal a través de cursos y talleres programados, como de manera informal a través de innumerables auditorías a plantas elaboradoras o laboratorios de diagnóstico, o Informes anuales de los Laboratorios de Referencia y Centros Colaboradores de la OIE, 2009 1 Tuberculosis bovina g) 1 2. simplemente a través de jornadas de trabajo conjunto en nuestras instalaciones sobre temas relacionados a toda nuestra área de incumbencia. Trabajos de investigación en curso: si bien no es el objetivo principal de nuestro organismo, el Area de Micobacterias de DILAB se encuentra trabajando en varios proyectos de investigación, entre los cuales se pueden destacar algunos involucrados dentro del marco de convenio SENASA-INTA como “Desarrollo de una nueva PPD”, estudio del contenido de lípidos y proteínas bajo diferentes condiciones y su relación entre composición y efectividad en el test en bovinos y “Control de la tuberculosis y paratuberculosis bovina, mejoramiento de las técnicas de diagnóstico y epidemiología molecular en tuberculosis y paratuberculosis bovina”. Prueba(s) que se usa(n)/o disponible(s) para la enfermedad especificada, en su laboratorio Prueba Para Especificidad Total Cultivo bacteriológico Aislamiento bacteriano género 50 Tipificación bacteriana Aislamiento bacteriano especie 15 PCR Detección molecular sonda Hsp65 Género 100 PCR Detección molecular sonda is6110 Complejo M.tbc 100 PRA Detección molecular sonda Hsp65 + HaeIII y BstEII Género / especie 20 Producción y distribución de reactivos de diagnóstico ¿Qué reactivos produce para la enfermedad / infección especificada? Como reactivos, se producen PPD Bovina, PPD Aviar y Polvo liofilizado de Mycobacterium phlei, así como también reactivos para tipificación bioquímica y enzimática de micobacterias. También se produce y distribuye dentro del país y para organismos gubernamentales medios de cultivo de Stonebrink, Lowestein-Jensen, 7H9, 7H10. Se producen y distribuyen para el país y la región cepas de referencia, utilizados tanto para la producción de reactivos diagnósticos como controles en pruebas de tipificación de micobacterias o diagnóstico molecular. ¿Qué cantidad ha suministrado a nivel nacional (incluyendo la que ha usado su laboratorio)? Aproximadamente 15.000 dosis de PPD bovina, y 20.000 dosis de PPD aviar ¿Qué cantidad ha suministrado a otros Miembros de la OIE? PPD bovina: 350 dosis PPD Aviar: 350 dosis Actividades específicamente relacionadas con el mandato de los Laboratorios de Referencia de la OIE 3. Armonización y normalización internacional de los métodos para las pruebas de diagnóstico o la producción y el análisis de vacunas En el marco de la armonización de los diagnósticos y tendiendo a poseer un único criterio en la interpretación de resultados obtenidos se han establecido nexos con nuestros países vecinos, los cuales constituyen los principales receptores de la exportación de hacienda en pie, con el fin de contar con un mismo patrón de tuberculina PPD para 2 Informes anuales de los Laboratorios de Referencia y Centros Colaboradores de la OIE, 2009 Tuberculosis bovina estandarizar el comercio en la zona. En esta iniciativa se han iniciado conversaciones con los servicios sanitarios de Chile, Uruguay, Paraguay, Bolivia y Perú. 4. Preparación y suministro de estándares internacionales de referencia para las pruebas de diagnóstico o las vacunas Durante el año 2009 se produjo una serie de PPD bovina Estándar para ser utilizado como referencia nacional y regional de 9050 dosis. Y una serie de PPD Aviar Estándar de 10.000 dosis. Los mismos son distribuidos a los laboratorios productores de PPD para usar como estándares secundarios del producto y a los servicios sanitarios de los países vecinos en el marco de los acuerdos anteriormente citados. 5. Investigación y desarrollo de nuevos procedimientos para el diagnóstico y el control Se inició, de acuerdo a lo comentado, la toma de muestras y recopilación de información para la evaluación del Kit de Gamma Interferon, Bovigam®, con el fin de determinar el comportamiento, la sensibilidad y especificidad de esta técnica en la República Argentina. Se inició y concluyó también la toma de muestras para la evaluación de un kit de ELISA por anticuerpos contra Tuberculosis para evaluar su especificidad sobre una población bovina libre de la enfermedad en el sur de la República Argentina. 6. Recopilación, análisis y difusión de datos epizootiológicos concernientes a la lucha internacional contra las enfermedades Si bien esta constituye otra área de nuestra organización, los datos que quizás resultan útiles a esta recopilación son los siguientes: - bovinos faenados con control SENASA: 12.110.928 - Casos de lesiones compatibles con tuberculosis bovina detectados en faena: 111.611 - Establecimientos certificados libres de la enfermedad: 7.713 -Veterinarios acreditados: 6.657 7. Facilitación de pericia por expertos a la OIE o a los Miembros de la OIE Durante el año 2009 se trabajó en la revisión y modificación del capítulo correspondiente a Tuberculosis Bovina del Manual de Test Diagnósticos y del Código Sanitario para Animales Terrestres. 8. Suministro de formación científica y técnica al personal de otros Miembros de la OIE Se ofreció en el curso de este año 2009, formación, ya sea mediante cursos formales o de manera informal a personal de los servicios sanitarios de Chile, Uruguay, Paraguay, Perú, República Dominicana y Venezuela, entre otros. 9. Suministro de servicios para las pruebas de diagnóstico a otros Miembros de la OIE Con respecto a este ítem se controlaron tuberculinas PPD bovinas comerciales provenientes de Uruguay y elaboradas por el servicio nacional de Perú. Informes anuales de los Laboratorios de Referencia y Centros Colaboradores de la OIE, 2009 3 Tuberculosis bovina Se realizó también tipificaciones de cepas provenientes de países vecinos con los cuales se mantienen contactos técnicos y profesionales. 10. Organización de reuniones científicas internacionales en nombre de la OIE o de otros organismos internacionales No se realizaron durante el año 2009 11. Participación en estudios científicos internacionales colaborativos No se realizaron durante el año 2009 12. Publicación y difusión de información concerniente al trabajo de la OIE (incluidas una lista de las publicaciones científicas, las actividades de publicación por internet, las presentaciones en conferencias internacionales) No se realizaron durante el año 2009 13. Inscripción de kits de diagnóstico en el Registro de la OIE i) ¿Participó usted a grupos de expertos para asesorar kits candidatos a la inscripción en el Registro de la OIE? Si la respuesta es positiva, ¿cuáles reactivos fueron asesorados? Como ya fue comentado, se está trabajando en la evaluación en la Argentina d unl kit comercial de gamma interferon y una evaluación del comportamiento de un kit de serología comercial sobre una población libre al sur de la República Argentina. ii) ¿Presentó usted la candidatura de kits para inscripción al Registro de la OIE? Si la respuesta es positiva, ¿cuáles kits? No se han presentado _______________ 4 Informes anuales de los Laboratorios de Referencia y Centros Colaboradores de la OIE, 2009