Documento 218708

Código:
LAB-PO-01-01
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y
LABORATORIOS
Revisión: 1
Página:
PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS
1 de 5
CICLO ESCOLAR: 2014-2015 P
NOMBRE DEL DOCENTE: Dr. Luis Humberto May Hernández
CARRERA(S): Ingeniería de Materiales
SEMESTRE: 4
ASIGNATURA: Caracterización Estructural
PARCIAL:
GRUPO(S): A
2o Parcial
NOMBRE DE LABORATORIO O DE LA INSTITUCIÓN EN CASO DE PRÁCTICA
EXTERNA:
NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA:
# 02 – Preparación de muestras para microscopio.
FECHA Y HORA PROPUESTA DE LA PRÁCTICA: 21 de Mayo de 16 a 18 PM
MATERIALES REQUERIDOS:
Regla milimétrica
Pinzas
Bisturí, gotero, 4 porta y 4 cubre objetos.
Colorante Wright o Giemsa (diluido con PBS en proporción 1G:9PBS)
Muestras varias proporcionado por el profesor
EQUIPO REQUERIDO:
Microscopio óptico y objetivos de 10x-100x y 1000x c
Cámara digital (Profesor).
SE DEBE ANEXAR LA DESCRIPCIÓN DEL DESARROLLO DE LA PRÁCTICA.
______________________
Dr. Luis Humberto May Hernández
23 de Febrero de 2015
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PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA MICROSCOPIO
A. Objetivos
El objetivo de la preparación de muestras para microscopía óptica es permitir que las estructuras de
los materiales se revelen con suficiente contraste de modo que las características de interés sean
descritas, grabadas y caracterizadas en detalles visibles a una escala menor que la agudeza visual
del ojo humano. La escala última de observación estará limitada por la resolución del sistema de
imagen del microscopio.
Para este caso se realizara un recuento de glóbulos blancos, lo que se denomina Fórmula
Leucocitaria. En general, los estudios de sangre se hacen en extensiones (preparaciones obtenidas
por la expansión de un líquido biológico, en este caso la sangre).
B. Introducción
Las muestras biológicas pueden ser examinadas en muchos estados como combinación de los
siguientes:

Vivas o muertas

Frescas o preservadas/fijadas

Enteras o en secciones

Teñidas o sin teñir

hidratadas o deshidratadas

Opacas o aclaradas
Las muestras lo suficientemente pequeñas como para ser observadas enteras pueden también
ser observadas vivas, obteniéndose el contraste mediante dispositivos ópticos tales como contraste
de fases o contraste interferencial u, ocasionalmente, por medio de tintes vivos (tinciones no
tóxicas que tienen afinidad por ciertos componentes celulares).
Por ello no pueden ser observados vivos sino que hay que matarlos y entonces (generalmente)
deben ser deshidratados, incluidos, cortados, teñidos y montados antes de su examen al
microscopio.
ERITROCITOS (Glóbulos rojos) :
Los Glóbulos rojos son las células que contienen en su interior la
hemoglobina. Son los principales portadores de oxígeno a las
células y tejidos del cuerpo. Tiene forma bicóncava para adaptarse a
una mayor superficie de intercambio de oxígeno por dióxido de
carbono en los tejidos. En los mamíferos, no poseen núcleo.
PLAQUETAS:
Las plaquetas son células de la sangre producidas por los
megacariocitos en la médula ósea mediante el proceso de
fragmentación citoplasmática, circulan por la sangre y tienen un
papel muy importante en la coagulación. Son los componentes
celulares mas pequeños de la sangre.
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LEUCOCITOS (Glóbulos Blancos):
.
NEUTRÓFILOS:
Células de 7-9 um con granulación menos evidente que la de los
eosinófilos, presentan núcleos polilobulados, contienen proteínas de
propiedades bactericidas (fagocitan y destruyen células
bacterianas). También denominados polimorfonucleares, de núcleo
arriñonado, formando cuatro o cinco lóbulos; reciben por ello, el
nombre de polimorfonucleares o, simplemente "polis".
EOSINÓFILOS:
Su nivel aumenta en las infestaciones por parásitos, en reacciones
alérgicas, en el asma y en alguna patología del miocardio. Tienen el
Núcleo bilobulado y granulación de tamaño medio, con fuerte
apetencia por la eosina. Núcleo bilobulado y granulación de tamaño
medio y fuerte apetencia por la eosina
BASÓFILOS:
Los gránulos de los basófilos son gruesos pero escasos. Son células
de unas 10 micras de diámetro y su núcleo tiene una forma que
recuerda a un 5. Se originan en el mismo lugar que el resto de los
granulocitos, y son los menos numerosos, ya que constituyen sólo el
0,5% del total. Tienen una activa participación en la respuesta
alérgica a través de la liberación de histamina y otras sustancias
químicas.
LINFOCITOS:
Los linfocitos son las células responsables de las respuestas
inmunitarias. Se dividen en dos grandes grupos, linfocitos B y
linfocitos T, según que estos progenitores linfoides maduren en
la médula ósea (B) o en el timo (T), respectivamente. No existe
diferencia morfológica , observable a Microscopio óptico, entre
ambos tipos de linfocitos. Son los glóbulos blancos más
pequeños, con núcleo que ocupa casi la totalidad del volumen celular y no presentan
granulación específica.
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MONOCITOS:
Al igual que otros glóbulos blancos, los monocitos se originan en la
médula ósea y luego entran en el flujo sanguíneo. En unas horas,
emigran a los tejidos donde se convierten en macrófagos, y
constituyen las células defensivas (fagocitos). Son de mayor tamaño
C. Parte Exprimental
Frotis sanguíneo
1. Preparamos el material que vamos a utilizar y nos colocamos los guantes.
2. Procedemos a desinfectar el dedo del cual extraeremos el frotis sanguíneo (por lo general
el dedo índice o el anular).
3. Pinchamos con aguja en el pulpejo del dedo, sobre la zona anterior o lateral. Una vez
hecho, apretamos el dedo para bombear sangre hacía afuera. Una vez se haya formado una
gota la acercamos al portaobjetos poco a poco hasta que pase a éste.
4. Limpiaremos el dedo y curamos la zona lesionada, tiraremos la aguja y gazas utilizadas
al contenedor de residuos biológicos.
5. Realizamos la extensión del frotis sanguíneo: Tras realizar la extensión, se obtienen tres
partes de la muestra:
Cabeza (con demasiados eritrocitos).
Cuerpo (zona óptima para la observación, existe
un reparto equilibrado de células).
Cola (eritrocitos en escaso número).
6. Tras dejar secar el frotis durante un par de minutos, aplicaremos el metanol sobre la
muestra que actuará como fijador, lo dejamos reposar durante tres minutos
7. Teñimos la muestra con el colorante Giemsa(diluido con PBS en proporción 1G:9PBS).
Las partes ácidas de la muestra (como por ejemplo el DNA del núcleo) se teñirán de un
color azulado mientras que las básicas se teñirán de un color rosado.
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8. Limpiamos la muestra con agua destilada para sacar el colorante tras haberlo dejado
sobre la muestra unos diez minutos.
9. Aplicamos el cubreobjetos sobre el cuerpo del frotis, ya está listo para la visualización en
el microscopio
D. Resultados
Anota todas tus observaciones en la bitacora, así como realiza bosquejos de las imágenes
observadas.
Responde a las siguientes preguntas:

¿Por qué se debía esperar a que se seque la muestra a temperatura ambiente?¿por
que no utilizar vacio o temperaturas mas elevadas?

¿Por qué no se utilizó un cubreobjetos?

¿Cuál era la finalidad del colorante?¿Se pudo utilizar otro?

¿Por qué te resulto fácil identificar los tipos de estructuras en la sangre?

De la metodología propuesta ¿Qué le cambiarias?