BIOTECNOLOGÍA PARA LA PRODUCCIÓN MASIVA DE ENTOMOPATÓGENOS NATIVOS DE ZONAS ÁRIDAS PARA EL CONTROL DE PLAGAS AGRÍCOLAS Resumen ejecutivo La producción de cultivos hortofrutícolas se ha incrementado en las zonas Costeras del Noroeste de México, incluyendo zonas semiáridas de Sonora. En estas regiones las temperaturas son superiores a los 40 ºC, así que para el control biológico de insectos es necesario utilizar microorganismos aclimatados a estos ecosistemas. Los objetivos de este proyecto fueron: a) desarrollar una tecnología de proceso para la producción masiva de agentes para el control microbiano de plagas en cultivos hortofrutícolas de zonas áridas, utilizando microorganismos nativos, y b) establecer una colección microbiana que incluya bacterias y hongos. En el primer año del proyecto, a partir de piojo harinoso y la mosquita blanca de distintas regiones de Sonora, se aislaron bacterias y hongos saprófitos y una especie de hongos entomopatógenos. Se encontró que los hongos entomopatógenos en bioensayos a nivel laboratorio tenían potencial como agentes para el biocontrol del piojo harinoso de la vid. Todos los aislados fueron identificados como Paecilomyces fumosoroseus (actualmente Isaria fumosorosea) con base en la estructura de sus conidióforos y las características morfológicas de las hifas. Por lo anterior, el proyecto se centró en hongos entomopatógenos. Para la optimización de la producción masiva de estos organismos se establece un compromiso entre el rendimiento y la calidad de los propágulos infectivos (PI), con el propósito de garantizar su estabilidad y efectividad en campo, que están relacionados con su virulencia y resistencia a condiciones ambientales. La virulencia es una medida cuantitativa de la capacidad de un organismo entomopatógeno para causar enfermedad y muerte a su hospedero, obviamente es indispensable que el hongo esté viable. En el caso de los hongos entomopatógenos, se ha observado que diferentes factores de virulencia, como por ejemplo la resistencia a condiciones ambientales adversas, pueden ser mejorados mediante un manejo adecuado de los medios y condiciones de cultivo. Por lo anterior, en el segundo año del proyecto la investigación se centró en el desarrollo de medios y condiciones de cultivo para la fermentación líquida de las cepas nativas aisladas de P. fumosoroseus, la determinación de la LT50 de los PI producidos y bioensayos en campo para el control del piojo harinoso de la vid (Planoccocus ficus) con productos comerciales formulados con conidias de hongos entomopatógenos. En el tercer y último año del proyecto se continuó la investigación sobre la optimización del proceso de fermentación para la producción de PI y las etapas de recuperación y secado. Se aumentaron dos temas de investigación: resistencia a temperatura y luz UV de las cepas y sus propágulos, y estudios sobre formulación, empaque y condiciones de almacenamiento para prolongar la vida de anaquel. Los resultados obtenidos permitieron establecer el proceso para la producción de micoinsecticidas en fermentación liquida. Es importante aclarar que el proceso presenta innovaciones en las etapas de fermentación, recuperación y formulación, por lo que se presentará una solicitud de patente. Con respecto a la tecnología de proceso para la producción masiva de hongos entomopatógenos, la planta de producción fue semiautomática, flexible, con un gran porcentaje de integración nacional. Produce diferentes bioinsecticidas para adaptarse a las demandas en las distintas épocas del año, los productos fundamentalmente son presentaciones en polvo-humectable de hongos. El investigador considera que el proceso que él implementó puede ser mejorado en cuanto a productividad y rendimiento de PI utilizando un sistema de cultivo por lote alimentado, puesto que la producción de PI está asociada al crecimiento, y que mejorar la productividad y la concentración de PI disminuye el tamaño de todos los equipos para la misma capacidad de planta, con la consiguiente disminución en la inversión y por ende en los costos de manufactura. Demanda o problemática que atiende Investigar y aislar microorganismos nativos y producirlos masivamente con el fin de de lograr el control de plagas de importancia económica en la región, como parte de un proceso de sistemas de manejo integrado de plagas. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada Los productos que se obtuvieron como resultado del proyecto son: a) colección de microorganismos entomopatógenos de zonas áridas; b) ingeniería básica conceptual de la tecnología de proceso para la producción masiva de los microorganismos (máximo 4) que dieron mejores resultados en las pruebas de campo. Impactos Las cepas nativas aisladas serán depositadas en la Colección de Hongos Entomopatógenos del Centro Nacional de Referencia de Control Biológico, Tecomán, Colima y en la “American Type Culture Collection” para proceder a la solicitud de patente. Se consideró más pertinente depositarlas en la colección mencionada que depende de la SAGARPA, que crear una nueva colección porque no se tienen los recursos económicos para mantenerla. Dos de las cepas aisladas fueron patógenas para el piojo harinoso. La morfología colonial y la de sus hifas, conidióforos y conidias permitió clasificar a ambas como pertenecientes al género Paecilomyces. Mediante técnicas de biología molecular se pudo amplificar parcialmente el gen de la subunidad mayor de ARN ribosomal de las cepas. La alineación de las secuencias de los amplicones mediante el programa BLAST mostró un 99% de identidad con las cepas PA144, PA190 de Paecilomyces fumosoroseus, PA94 de Paecilomyces sp. y un 98 % de identidad con las cepas PA208, PA176, PA207 y PA162 también de Paecilomyces fumosoroseus. Por lo tanto se concluye que las cepas nativas son: a) Paecilomyces fumosoroseus P43 aislada a partir de una hembra adulta del piojo harinoso de la vid (Planococcus ficus) colectada en la zona de Pesqueira, Sonora. b) Paecilomyces fumosoroseus K13 aislada de una ninfa de mosquita blanca (Bemisia spp.) colectada en plantas de algodón, en los campos de Quechehueca, en el Valle del Yaqui, Sonora. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada Aún no se pueden estimar costos porque la aportación consiste en producción masiva de microorganismos con miras al manejo integrado de plagas. Ámbito de aplicación Nacional. Información adicional o comentario Considerando que tanto del piojo harinoso como de la mosquita blanca se aislaron hongos entomopatógenos, y que los bioensayos en campo se hicieron también con esta clase de organismos, la investigación sobre la tecnología de proceso se hizo sobre la propagación masiva en cultivo sumergido de hongos entomopatógenos para producir propágulos infectivos. Se llevó a cabo investigación sobre las etapas típicas de un bioproceso: “up stream”, fermentación y “downstream” incluyendo además estudios sobre formulación y vida de anaquel ya que en los micoinsecticidas ésta generalmente es menor a un mes en refrigeración y el problema no ha sido resuelto. Clave del proyecto: SAGARPA 2004-C01-5 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención: control de plagas agrícolas; hongos entomopatógenos Investigador: doctora MAYRA DE LA TORRE M. Institución: CIAD, A. C.