LANASEVE Control de medios de cultivo Rige a partir de: Código:
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Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 1 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad 1. Objetivo Establecer el procedimiento en la recepción, preparación, control y almacenamiento de los medios de cultivo y reactivos 2. Alcance Aplica al Área de Medios de Cultivo de la Unidad de Servicios Generales del Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios. 3. Responsabilidad y autoridad 3.1 Jefe de Unidad Velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento. 3.2 Personal de Medios de Cultivos Es responsable de la ejecución de las actividades descritas en este procedimiento. 3.3 Coordinador de la Unidad de Gestión de Calidad: Velar por que se cumpla lo establecido en este procedimiento 4. Definiciones No aplica 5. Abreviaturas y/o siglas No aplica 6. Referencias y/o Bibliografía SEG-PE-005-RE-001 Control de esterilidad de Medios de cultivo SEG-PE-005-RE-002 Control de selectividad de medios de cultivo SEG-PE-005-RE-003 Control de efectividad de medios de cultivo SEG-PE-005-RE-004 Control de preparación de medios de cultivo y soluciones SEG-PE-005-RE-005 Verificación de volúmenes de medios de cultivo. SEG-PE-005-RE-006 Control de entrega de agua destilada para análisis. SEG-PE-005-RE-007 Solicitud de medios de cultivo SEG-PE-005-RE-008 Control de pH. SEG-PE-005-RE-010 Registro de tiempo de exposición de luz ultravioleta. LANASEVE-PG-021-RE-002 Control de temperatura LANASEVE-PG-08 Acciones Correctivas y/o Preventivas SENASA-PG-002-RE-009 Seguimiento de Acciones Correctivas y/o Preventivas Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 2 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad 7. Descripción de procedimiento 7.1 Materiales, Reactivos y material de referencia Balanza granataria Balanza analítica Plantillas de calentamiento pH-metro Cristalería Autoclave Incubadora Medios de cultivo “Agar selectivos” Agar tripticasa de soya Agar Nutritivo Escala Mc Farland 0,5 Buffer Butterfield Microorganismo de prueba “cepas control” 7.2 Recibo y almacenamiento de medios de cultivo 7.2.1 Al ingresar un nuevo frasco de medio de cultivo o reactivo debe anotar en cada uno la fecha de ingreso y las iniciales del responsable. 7.2.2 Almacenar de acuerdo a las instrucciones del fabricante. 7.2.2 Utilizar los medios de acuerdo a la fecha de vencimiento. 7.3 Preparación del medio 7.3.1 Cada dependencia del laboratorio solicita el medio de cultivo o reactivo a través del formulario SEGPE-005-RE-007 Solicitud de Medios de Cultivos. 7.3.2 El encargado de la preparación debe verificar la fecha de vencimiento antes de abrir un producto. 7.3.3 Descartar cualquier medio de cultivo en el que se observe algún cambio físico, como por ejemplo hidratación, cambio de color o textura. 7.3.4 Seguir las instrucciones de preparación de acuerdo al fabricante o instructivo. 7.3.5 Esterilizar por 15 minutos a una temperatura de 121 ºC ± 1 ºC . Ver las instrucciones del fabricante. 7.3.6 Registrar el pH de los medios preparados antes de autoclavado. Este debe estar dentro del rango que indica el fabricante y debe anotarse en el registro SEG-PE-005-RE-008 Control de pH. 7.3.7 Dispensar el medio de cultivo de a lo solicitado. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad 7.3.8 LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 3 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad Antes de utilizar la cámara de flujo laminar, esterilizarla por exposición a la luz ultravioleta por un mínimo de 15 minutos. Registrar el tiempo de exposición en el formulario SEG-PE-005-RE-010 Registro de tiempo de exposición de luz ultravioleta. 7.3.9 Etiquetar el medio preparado con las siglas asignadas según Anexo 1, Abreviaturas de Medios de Cultivo, y un número de lote interno que corresponde a un consecutivo seguido del año en curso. Ejemplo: XLD-30-09. 7.3.10 Completar el formulario SEG-PE-005-RE-004 Control de preparación de medios de cultivo y soluciones. 7.4 Verificación de volúmenes. 7.4.1 Dispensar el volumen de medio solicitado. 7.4.2 Autoclavar el medio y dejar enfriar si corresponde. 7.4.3 Verificar el volumen a 1 de cada 25 medios dispensados (tubos, botellas) utilizando pipeta o probeta graduada. 7.4.4 Descartar el lote de medio si al menos uno de los volúmenes esta fuera del margen de error permitido según lo establecido en Anexo 2 Verificación de volúmenes de medios de cultivo. 7.4.5 Anotar la información requerida en el SEG-PE-005-RE-005 Verificación de volúmenes. 7.5 Control de calidad de los medios preparados 7.5.1 Prueba de selectividad 7.5.2 Inocular con una cepa de referencia dos placas seleccionada al azar de cada nuevo lote para evaluar la selectividad del medio de cultivo. Incubar de acuerdo a la cepa y el medio a evaluar. 7.5.3 Evaluar los resultados de acuerdo al Anexo 4 Morfología de las colonias en los agares selectivos y/o diferenciales. 7.5.4 Si los resultados no son los esperados verifique la viabilidad de la cepa y la composición del medio. 7.5.5 Inocule nuevamente dos placas del mismo lote con esta cepa. Incubar. 7.5.6 Evaluar los resultados. Si los resultados son correctos libere el lote correspondiente. 7.5.6 Si no se observa la colonia típica esperada, descartar el lote correspondiente. 7.5.7 Anotar los resultados en el formulario SEG-PE-005-RE-002 Control de selectividad de medios de cultivo. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 4 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad 7.6 Prueba de esterilidad 7.6.1 Verificar la esterilidad de cada nuevo lote de la siguiente forma: escoger al azar el 5% del nuevo medio de cultivo preparado, incubar a 35 °C 2 °C por 24 horas. 7.6.2 Revisar los medios, si se observa crecimiento o turbidez descartar todo el lote. 7.6.3 Si no hay contaminación en el medio liberar el lote. 7.6.4 Anotar el resultado de la prueba, Satisfactorio o No conforme, en el formulario SEG-PE-005-RE-001 Control de esterilidad- Medios de Cultivo. Nota. Las placas y tubos utilizados para la prueba de esterilidad son descartados. 7.7 Prueba de efectividad 7.7.1 1º día - Activar la cepa del microorganismo de prueba - Se raya en un agar de enriquecimiento (Nutritivo, Sangre, Tripticasa de soya) - Se incuba por 24 horas a 37 °C 2 °C. 7.7.2 2º día - Preparar una suspensión de la bacteria con turbidez equivalente a 0,5 Mc Farland - Hacer diluciones seriadas en buffer butterfield 10-2, 10-3,.....10-7. - Inocular placas de agar tripticasa de soya con 0,1 ml de cada dilución por duplicado. Esparcir por toda la placa. - Inocular placas del medio selectivo para aislar el microorganismo de prueba. 0,1 ml de cada dilución por duplicado. - Incubar las placas a 37 °C 2 °C por 24 horas. 7.7.3 3º día - Hacer el recuento de colonias de todas las placas. - Sacar un promedio de cada dato obtenido por dilución en cada medio. - Comparar los resultados por dilución, del crecimiento obtenido en el agar tripticasa de soya y el obtenido en las placas con agar selectivo. % efectividad = N° de colonias en el medio selectivo / N° de colonias en agar tripticasa de soya Un resultado ≥ a 75 % es satisfactorio. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad 7.7.4 LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 5 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad Anotar los resultados en el formulario SEG-PE-005-RE-003 Control de efectividad de medios de cultivo. 7.8 7.8.1 Almacenamiento de los medios preparados Los medios de cultivo preparados se almacenan de acuerdo a su vida media. Anexo 3 Vida media de los medios y reactivos preparados. 7.8.2 Almacenar los medios en las cámaras de refrigeración de modo que se utilicen primero los de menor Nº de lote interno de preparación. 7.8.3 Registrar el control de temperatura de las cámaras en el LANASEVE-PG-021-RE-002. 7.9 Control de calidad del agua 7.9.1 El agua usada para preparar reactivos, medios de cultivo y diluciones debe ser analizada para asegurar que esta libre de trazas de metales, compuestos bactericidas e inhibitorios y que es microbiológicamente aceptable, deben de realizarse diferentes análisis y anotarse en SEG-PE-005-RE-006 Control de entrega de agua destilada para análisis. Análisis mensuales: Conductividad: debe ser de < 2 microSiemens/cm o resistencia de >1,0 megohms-cm resistencia a 25 ºC. Residuos de cloro total < de 0,10 mg/l Conteo mesófilos aeróbicos < 1000 ufc/ml. Se hace por duplicado 1 ml en Petrifilm Conteo Aerobio. Análisis Anuales: Metales Pesados: Cd, Cr, Cu, Ni, Pb, y Zn < 0,05 mg/l Metales Pesados Totales < 0,10 mg/l. 7.9.2 Archivar todos los análisis realizados en el archivo SEG-A-005 Control de calidad del agua destilada. 7.10 Trabajo No conforme Cuando se presenta una falla o desviación en el proceso se debe reportar como trabajo No conforme y atender según el procedimiento LANASEVE-PG-08 Acciones Correctivas y/o Preventivas . Analizar las posibles causas según anexo 5. Fallas y causas en la preparación de medios de cultivo. Utilizar el formulario SENASA-PG-002-RE-009 Seguimiento de Acciones Correctivas y/o Preventivas Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 6 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad 8. Anexos Anexo 1 Abreviaturas de Medios de Cultivo Anexo 2 Verificación de volúmenes Anexo 3 Vida media de los medios y reactivos preparados Anexo 4 Morfología de las colonias en los agares selectivos y/o diferenciales Anexo 5: Fallas y causas en la preparación de Medios de Cultivo. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 7 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad Anexo 1 Abreviaturas de Medios de Cultivo Medio de cultivo ANTIBIOTICO # … AGAR BAIRD PARKER AGAR AGAR SULFA VERDE BRILLANTE AGAR CONTEO EN PLACA CALDO CAMPYLOBACTER AGAR EMB CALDO LAURYL TRIPTOSA AGAR ENTERICO HEKTOEN CALDO ENDO Siglas ANT #... BP Medio de cultivo CALDO TETRATIONATO AGAR TCBS Siglas TT TCBS BGS CALDO LACTOSA VERDE BILIS BRILLANTE BGLB AC CP EMB LST HE ENDO AGAR XILOSA LISINA TERGITOL-4 AGAR MODIFICADO DOBLE LISINA HIERRO AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO AGAR LISINA HIERRO CALDO TRIPTICASA SOYA FOSFATO DE BUTTERFIELD CALDO MODIFICADO UNIVERSIDAD DE VERMONT CALDO DE ENRIQUECIMIENTO ACIDO MORFOLINPROPANO SULFONICO CALDO BUFERADO DE ENRIQUECIMIENTO LISTERIA AGAR SANGRE DE CABALLO 5% DOBLE CAPA CALDO INFUSION CEREBRO CORAZON XLT4 AMDLH TSI LIA CTS FB CALDO FRASER CF CALDO EC EC AGAR DESOXICOLATO LISINA XILOSA XLD CALDO LACTOSADO CL AGAR MAC CONKEY AGAR MAC CONKEY – SORBITOL MCK MCK-S CALDO NEUTRALIZANTE DEY-ENGLEY UVM MOPS BLEB AS DOBLE CAPA ICC o BHI D/E AGAR MUELLER HILTON MH AGAR MYP MYP AGAR MOTILIDAD CALDO mFC AGAR OXFORD MODIFICADO AGAR OXFORD AGAR RAMBACH CALDO RAPPAPORT VASSILIADIS PEPTONA DE SOYA AGAR SANGRE AGAR SPS AGAR SULFITO BISMUTO PETRIFILM AGUA PEPTONADA BUFERADA AM mFC MOX OXA RB AGAR EXTRACTO DE LEVADURA TRIPTICASA SOYA CALDOTRIPTONA DE SOYA MODIFICADO CON NOVOBIOCINA+CASAMINOACIDOS CALDO TETRATIONATO HAJNA AGUA PEPTONADA ALCALINA AGAR TRIPTICASA DE SOYA AGAR RAINBOW AGAR CITRATO DE SIMMONS RVS AGAR BILIS ESCULINA AZIDA ABEA AS SPS SB PF CALDO LETHEEN AGAR KF AGAR SLANETZ-BARTLEY AGAR m CLOSTRIDIUM PERFRINGERS CLE KF ASB mCP TSA-YE mTSB+n TTH APA TSA ARB AG APB Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 8 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad Anexo 2 Verificación de volúmenes Cantidad (ml) 9 90 99 225 400 Margen error permitido ± 0.2 ± 2.0 ± 2.0 ± 5.0 ± 5.0 Anexo 3 Vida media de los medios y reactivos preparados Tipo de medio Medios en placas Petri Agar o caldo en tubos Empaque Bolsas plásticas opacas Condición de Almacenamiento (2 – 8) °C Expiración Ver instrucciones del fabricante, si no indica 4 Semanas 4 semanas Tapas o tapones con aberturas (2 – 8) ° C con intercambio de gases Agar o caldo en tubos Tapas o tapones con aberturas Temp. ambiente 2 semanas con intercambio de gases Agar o caldo en tubos Tapas de rosca (2 – 8) °C 3 meses Agar o caldo en tubos Tapas de rosca Temp. ambiente 1 meses Caldo en botellas Tapas de rosca (2 – 8) ° C 3 meses Caldo en botellas Tapas de rosca Temp. ambiente 1 meses Buffers y diluentes Tapa de rosca (2 – 8) ° C 3 meses Buffers y diluentes Tapa rosca Temp. ambiente 1 meses Agua estéril Tapa de rosca (2 – 8) °C 3 meses Agua estéril Tapa de rosca Temp. ambiente 1 meses Nota: Los medios utilizados para productos lácteos se almacenan en temperatura de (0 - 4.4) ºC. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Elaborado por: Jefe de Unidad Medio de Cultivo LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 9 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Aprobado por: Jefe de Unidad Anexo 4 Morfología de las colonias en los agares selectivos y/o diferenciales Cepas de referencia Control positivo Control negativo Control positivo: S.aureus ATCC 29213 Control negativo: S.epidermidis ATCC Agar Baird Parker 12228 Control selectividad: Salmonella Typhimurium Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: Agar BGS E.coli ATCC 25922 Control selectividad: Sthaphylococcus aureus Control positivo: Enterocococus Agar Bilis Esculina Azida Control selectividad: Sthaphylococcus aureus Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: Agar Citrato Simmons E.coli 25922 Control selectividad: Escherichia coli Control positivo: E.coli 25922 Control selectividad: Agar EMB Sthaphylococcus aureus rojizo Rojo violeta Control de Selectividad Colonias negras, forma Colonias negras, lisas, convexas, de 1- 1,5 irregular, a las 24 horas mm de diámetro, rodeada con una zona se forma una zona opaca clara y dentro de ésta hay un halo opaco. alrededor. Poco o ningún crecimiento Colonias rosadas, opacas, lisas y borde entero. Rodeadas por un color rojo en el medio. Poco o ningún crecimiento Colonias rodeada de un halo café a negro Cambio de color del medio de verde al azul Colonias con brillo metálico, lisas, de 2-3 mm de diámetro. Enterobacter Sakasaki Colonias lisas de color rojizo Colonias color amarillas. ____________ No hay cambio de color del medio. ----------S. Epidermides Colonias blancas Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Poco o ningún crecimiento Poco o ningún crecimiento Poco o ningún crecimiento S. aureus No hay Crecimiento Elaborado por: Jefe de Unidad Medio de Cultivo LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 10 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Cepas de referencia Control positivo: E.coli 25922 Agar Fluorocult Control negativo: E.coli O157:H7 ATCC 700728 Control selectividad: Enterococcus Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: Agar Hecktoen E.coli ATCC 25922 Control selectividad: Enterococcus faecalis Control positivo: Salmonella sp. Agar LIA ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: E.coli ATCC 25922 Control positivo: E.coli ATCC 25922 Control negativo: Agar Maconckey Sorbitol E.coli O157:H7 ATCC 700728 Control selectividad: Enterococcus Control positivo: Clostridium Agar mCP Control selectividad: E. coli Control positivo: Bacilus cereus Control negativo: Agar MYP Sthaphylococcus aureus Control selectividad: Control positivo Aprobado por: Jefe de Unidad Control negativo Control de Selectividad Colonias lisas, con fluorescencia al ser expuestas a luz UV Colonias lisas, sin fluorescencia al ser expuestas a luz UV Colonias, lisas, color verde-azuladas con centro negro, bordes claros. Colonias de color amarillo a naranja. Fondo color púrpura Fondo color amarillo Poco o ningún crecimiento Poco o ningún crecimiento __________ Colonias de color rosado, pueden rodearse de un precipitado opaco de sales Colonias transparentes biliares. Poco o ningún crecimiento Colonias amarillas opacas Poco o ningún crecimiento Colonias rosadas __________ Colonias amarillas Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Poco o ningún crecimiento Elaborado por: Jefe de Unidad Medio de Cultivo Agar Oxford Agar Rambach Agar RAIMBOW Agar Sangre Agar SLANETZBARTELEY Agar Sulfito Bismuto LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 11 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Cepas de referencia E. coli Control positivo: L. monocytogenes ATCC 43257 Control selectividad: Escherichia coli Control positivo: Salmonella spp Control negativo: Escherichia coli Control selectividad: Sthaphylococcus aureus Control positivo: E.coli O157 Control negativo: E.coli Control selectividad: Sthaphylococcus aureus Control positivo: L. monocytogenes ATCC 43257 Control negativo: L. innocua ATCC 33091 Control positivo: Enterococcos Control selectividad: E. coli Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: E.coli ATCC 25922 Control selectividad: Sthaphylococcus aureus Control positivo Colonias pequeñas de aprox 1 mm de diámetro, color crema rodeadas por un halo negro. Aprobado por: Jefe de Unidad Control negativo Control de Selectividad ___________ Poco o ningún crecimiento Colonias fusia Colonias verde azuladas Poco o ningún crecimiento Colonias negras o grises Colonias rojas Poco o ningún crecimiento Colonia beta hemolítica Colonia sin hemólisis. Colonias de color rojo a púrpura Colonias pequeñas, negras si producen H2S. Alrededor de la colonia presenta un halo negro grisáceo con brillo metálico después de 36-48 horas de incubación. Si son H2S negativo son colonias color pardo-verdosas. ____________ Colonias de color verde o café, crecen de forma inhibida, son muy pequeñas y sin brillo metálico en el medio que rodea la colonia. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada __________ Poco o ningún crecimiento Poco o ningún crecimiento Elaborado por: Jefe de Unidad Medio de Cultivo Agar TCBS Agar TSI Agar XLD Agar XLT4 LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 12 de 13 Revisado por: Encargado de calidad de sección Cepas de referencia Control positivo: V.cholerae Control selectividad: Escherichia coli Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: E.coli ATCC 25922 Control positivo: Salmonella sp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: E.coli ATCC 25922 Control selectividad: Enterococcus faecalis Control positivo: Salmonella spp. ATCC 8400, ATCC 13311 Control negativo: E.coli ATCC 25922 Control selectividad: Enterococcus Control positivo Aprobado por: Jefe de Unidad Control negativo Colonias de color amarillo, de 2-3 mm de diámetro, lisas, con una elevación en el centro. La superficie es de color rojo (reacción alcalina) y en el fondo es color amarillo (reacción ácida) se denomina: K/A Colonias rojas transparentes y bordes amarillos con centro negro si producen H2 S ---------- Control de Selectividad Poco o ningún crecimiento Todo el medio vira de color amarillo (tanto en la superficie como en el fondo) se denomina: A/A ___________ Colonias de color amarillo, opacas. Poco o ningún crecimiento Colonias negras o rojas con centro negro si producen H2S Pueden ser amarillas con centro negro a las 24 horas que luego se Colonias amarillas. tornan rojas. Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada Poco o ningún crecimiento Elaborado por: Jefe de Unidad LANASEVE Rige a partir de: 19/07/11 Código: SEG-PE-005 Control de medios de cultivo Versión 07 Página 13 de 13 Revisado por: Analista Aprobado por: Jefe de Unidad Anexo 5 Fallas y causas en la preparación de medios de cultivo 1. Valor de pH incorrecto: Medir el pH por encima de los 25 ºC Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento prolongado a 50 ºC Solución incompleta del medio Mala calidad del agua Recipiente mal lavado o con residuos químicos Mala conservación del medio deshidratado o vencido 2. Turbidez o precipitación: Mala calidad del agua Sobrecalentamiento pH incorrecto Solución incompleta 3. Oscurecimiento: Sobrecalentamiento Solución incompleta Alteración pH 4. Gel Blando Bajo porcentaje de agar en el medio Errores en a pesada del medio deshidratado o en los suplementos Sobrecalentamiento Mala homogenización del medio Exceso de agua 5. Crecimiento bacteriano pobre: Exceso de calentamiento Substancias inhibidoras en el agua Alteración de pH Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no controlada