detección y cuantificación de anticuerpos antitétanos en sueros

Resumen:
El centro de investigación y Desarrollo de nuestro Departamento, el año en
curso, ha logrado difundir nuestro quehacer científico en los siguientes
eventos.
1.- XII Congreso Chileno de Medicina Veterinaria. Realizado en Chillán del 24 al 26 de Octubre.
Med vet Claudia Lopez presentó el trabajo:
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA DEL VENENO DE LA ARAÑA DE LOS RINCONES
(Loxosceles laeta) PARA LA PRODUCCIÓN DE UN ANTIDOTO NACIONAL. Lopez Claudia;
Martinez Jocelinne, Vasquez Abel, Gonzalez Pamela , Gonzalez Patricia.
Consultas [email protected]
Estandarización y validación de un ELISA (Enzime Linked Immunoadsorbent Assay) para
la determinación de niveles séricos de anticuerpos antitetánicos.
INTRODUCCIÓN
El tétanos es producido por Clostridium tetani, un bacilo Gram positivo, anaerobio estricto con
capacidad de formar esporas que permanecen viables en el medio ambiente durante largos
periodos de tiempo. Este microorganismo, de amplia distribución geográfica, es eliminado en
heces de hombre y animales; al contaminar una herida y darse la condición de anaerobiosis
puede revertir a la forma vegetativa, liberando la exotoxina tetanoespasmina, responsable del
cuadro clínico. Esta toxina neurotrópica, impide la liberación de neurotransmisores inhibidores a
nivel de Sistema nervioso central, especialmente Glicina y GABA, lo que lleva a convulsiones y
parálisis espástica. A nivel periférico, interfiere en la liberación de acetilcolina en el músculo, lo
que se traduce en contracciones tónicas y espamos musculares (1).
El tétanos es una enfermedad de baja morbilidad y alta mortalidad. La incidencia mundial es de
un millón de casos anuales, siendo una de las 10 causas de muerte mas frecuentes en países en
vías de desarrollo (2), no así en países desarrollados, donde gracias a la aplicación de programas
de vacunación se ha logrado una tasa de incidencia que fluctua entre 0,03 a 0,04 casos por
100.000 habitantes (3).
En Chile, el tétanos es una enfermedad de bajo riesgo con casos esporádicos, manteniendo cifras
promedio de 14 casos anuales. En 1997 la tasa de incidencia fue de 0,05 y la tasa de mortalidad
de 0,02 por cien mil habitantes (4)
La prevención de la enfermedad se logra a través de la vacuna: Toxoide Tetánico, obtenido por
inactivación de la toxina tetánica con formaldehído (5). En Chile, esta vacuna se introdujo en
1975 como método de control del Tétanos, alcanzando hacia 1998 coberturas sobre el 90% en la
tercera dosis (4).
La eficacia de la vacuna es de casi 100% luego de la tercera dosis, sin embargo el título
disminuye en el transcurso del tiempo, por lo que se sugiere dar un refuerzo cada 10 años,
considerando 0,01 UI/mL el título protector mínimo de anticuerpos antitétanos (6).
La cuantificación de anticuerpos antitetánicos en la población, es una necesidad creciente en el
sistema de salud, tanto para verificar protección post vacunación contra tétanos como en el
apoyo diagnóstico de inmunodeficiencia primaria en niños (ref). Existen variados métodos
serológicos para la titulación de anticuerpos antitétanos, sin embargo los mas utilizados son la
hemoaglutinación pasiva y ELISA(referencias).
Existen kits comerciales para la determinación y cuantificación de anticuerpos antitétanos en
sueros humanos, los que no están disponibles para estudios epidemiológicos a gran escala, por el
alto costo que significa su adquisición. La estandarización y validación de un ELISA, con
antígeno local (toxoide tetánico del Instituo de Salud Pública de Chile), abre la posibilidad de
disponer de una metodología rápida, en el momento oportuno. Asi mismo, realizar estudios
epidemiológicos a gran escala que se pueden enfocar en diversos grupos etarios, adquiriendo de
esta manera información local de la población vacunada y la protección real de la población
chilena al tétanos.
MATERIAL Y MÉTODOS
Antígeno
Como fuente antigénica para el ELISA se utilizó Toxoide tetánico producido en el I.S.P (lote 049.00-01). El toxoide tetánico fue obtenido de la toxina de Clostridium tetani, por detoxificación
2
con formaldehído, diálisis y concentración, y proceso de purificación mediante corte con Sulfato
de amonio y diálisis posterior (1).
Anticuerpos antitoxoide tetanico
Patrón primario:
Inmunoglobulina antitetánica humana NIBSC (National Institute for a Biological Standards and
Control), tercera preparación estándar internacional (NIBSC.UK.EN6 3QG). El liofilizado de
cada ampolla tiene un total de 120 Unidades Internacionales (UI) de Inmunoglobulina
antitetánica humana (2).
Patrón secundario de referencia
Suero obtenido de un adulto normal, vacunado con vacuna DT (Difteria-tétanos); con alto título
de anticuerpos antitetánicos (según kit comercial ELISA). El suero fue estabilizado por
congelación y descongelación en 3 días consecutivos. Luego se centrifugó y se adicionó PMSF
(Phenyl Methyl Sulfonyl Fluoryde) como inhibidor de proteasa y mertiolato, ambos reactivos en
concentración final al 1%. El suero tratado fue almacenado a -20°C hasta ser utilizado. Se utilizó
una dilución de trabajo de 1 UI/mL en buffer fosfato salino (PBS) 0.01 M/suero equino 2% (v/v)
(REF).
Títulación de anticuerpos
El título de anticuerpos antitetánicos del patrón secundario de referencia, fue obtenido mediante
técnica de ELISA, utilizando el Kit Comercial Virotech® (datos del fabricante).
Curva de Calibración
Tanto el patrón primario NIBSC, como el Patrón Secundario de Referencia se llevaron a una
solución de trabajo de 1 UI/mL. Se realizaron dos escalas de calibración , con cada punto en
duplicado, obteniéndose 4 absorbancias para cada uno de los seis puntos: (50 mUI/mL, 20
mUI/mL, 10 mUI/mL, 5 mUI/mL, 2 mUI/mL y 1 mUI/mL)
Concentración de Proteína
3
La concentración de proteína del toxoide tetánico (lote 0-49.00-01) se determinó mediante
Método Bradford (4).
Muestras problema
Se utilizaron dos muestras de suero de individuos normales (GH y MR), sin referencia del título
de anticuerpos antitétanos.
ELISA (Enzimoinmunoensayo)
Se utilizaron placas de ELISA de poliestireno (Nunc F16 467466, superficie Maxisorp, (faltan
datos del fabricante) activadas con 100 l de una solución de 80 g/ml de toxoide tetánico (en
PBS 0.01 M, pH 7.2) durante 60 minutos a 37°C y después toda la noche a 4°C. La placa fue
lavada una vez con PBS 0.01 M pH 7.2. La placa se bloqueó con 300 l/pocillo de leche
descremada al 1% en PBS 0.01 M pH 7.2 durante 60 minutos a temperatura ambiente, luego de
lo cual fue lavada con PBS 0.01 M pH 7.2 Posteriormente, la placa fue incubada con 100
l/pocillo de las diferentes muestras de suero durante 60 minutos a 37°C. La dilución de las
muestras de suero problema utilizadas fue de 1:100 en PBS 0.01 M pH 7.2. La curva de
calibración con los anticuerpos antitoxoide tetanico se realizó con 6 puntos en duplicado (50, 20,
10, 5, 2, y 1 UI/ml). Al término de la incubación, la placa fue lavada 6 veces con PBS 0.01 M pH
7.2. Luego se incubó 60 minutos a 37°C con el segundo anticuerpo, una anti IgG conjugada con
fosfatasa alcalina (Sigma A-3152) diluída 1/800 en PBS 0.01 M/suero equino 2%. Después de
lavar con PBS 0.01 M pH 7.2, se agregó 100 l/pocillo de paranitrofenilfosfato (1 mg/mL en
buffer Carbonato/bicarbonato pH 9.6, 0.05 M) durante 30 minutos en oscuridad, a temperatura
ambiente. La reacción colorimétrica fue detenida agregando 50 l/pocillo de NaOH 3M. La
absorbancia fue determinada a 405 nm en un lector ELISA (Marca del equipo) (6), restando el
valor de absorbancia del blanco (3). El valor de absorbancia fue transformado a UI/mL, en base a
la curva de calibración de Patrón secundario de referencia, utilizando el software Statgraphics.
Análisis estadístico
El análisis estadístico se realizó en el software estadístico Statgraphics 5.0. Se evaluaron los
parámetros Linealidad, Precisión, Exacitud y Límite de detección (5).
4
Linealidad
Tanto el patrón primario como el patrón secundario fueron evaluados mediante coeficiente de
correlación (r2), coeficiente de determinación (r) y análisis ANOVA al 99% de nivel de
confianza.
Precisión
Se analizaron dos muestras problema (GH y MR) en días diferentes (2, 3 y 5). A estas muestras
se les aplicó un análisis ANOVA de una vía, además se hizo el análisis de una variable de las
absorbancias obtenidas de una serie de repeticiones del patrón secundario sobre la curva de
patrón primario NIBSC y viceversa.
Exactitud
Para el cálculo de exactitud se utilizó el Test de t de Student. Para predecir el valor de X (patrón
primario), se consideraron 10 valores de absorbancia del patrón primario (Y) sobre una curva de
patrón Secundario, al 95% del nivel de confianza.
Límite de detección
El límite de detección se calculó en base al promedio de 32 valores blancos más 3 desviaciones
estándar (L.D.= Promedio bl. + 3D.S.) (9, 10).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El Patrón Secundario de referencia se tituló frente al Patrón primario Internacional NIBSC,
resultando un valor de 4.6 UI/mL. Tanto el patrón primario de referencia, como el patrón
secundario mostraron linealidad apropiada con un coeficiente de correlación (r2) de 0.9887 y
0.9874; y coeficiente de determinación ( r ) de 97.75% y 97.49%, respectivamente. El valor de P
en el análisis de varianza es menor que 0,01, lo que demuestra una relación estadisticamente
significativa entre absorbancia y concentración al 99% del nivel de confianza. El valor de P-para
Falta de ajuste en la tabla ANOVA es mayor o igual a 0.10, lo que determina que el modelo
seleccionado para el estudio de los datos en ambos casos, es adecuado.
Curva de calibración Patrón primario
Concentraci Absorbanc Absorbanc Absorbanc Absorbanc
ón
ia
ia
ia
ia
5
(mUI/mL)
50
20
10
5
2
1
1
0.835
0.515
0.338
0.159
0.066
0.040
2
0.882
0.540
0.357
0.149
0.061
0.043
3
0.701
0.426
0.296
0.154
0.065
0.024
4
0.778
0.449
0.252
0.150
0.048
0.030
Patrón Primario
(modelo raíz cuadrada de X)
a
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
concentración
Curva de calibración Patrón secundario
Concentraci Absorbanc Absorbanc Absorbanc Absorbanc
ón
ia
ia
ia
ia
(mUI/mL)
1
2
3
4
50
0.897
0.916
0.702
0.700
20
0.554
0.580
0.448
0.461
10
0.373
0.385
0.289
0.294
5
0.162
0.165
0.139
0.159
2
0.061
0.051
0.051
0.059
1
0.034
0.034
0.026
0.029
6
Patrón Secundario
(modelo Doble recíproco)
a
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
30
40
50
concentración
Las muestras GH y MR tienen un valor P en el análisis de varianza mayor o igual a 0.05, por
cuanto no hay diferencias significativas de las medias entre un día y otro, al 95.0% del nivel de
confianza. Así mismo se demuestra que los grupos son homogéneos, es decir no hay diferencias
estadísticamente significativas entre valores de un mismo día. El coeficiente de variación de las
muestras GH y MR fue de 13.286% y 11.79%, respectivamente.
Tanto para Patrón Primario y Secundario de referencia se calculó la presición en base a el
coeficiente de variación, el que resultó 1.85% y 8,1% respectivamente. Ambas muestras
presentaron distribución normal de los datos.
La exactitud del método es tolerable, según el Método T de Student, , ya que el valor del Patrón
Primario obtenido, no es significativamente diferente de 60.
El límite de detección fue de 0.049 de densidad óptica y niveles de antitoxina de 0,0015UI/mL.
Según los resultados obtenidos en la medición de los parámetros: linealidad, presición, exactitud
y límite de detección, se concluye que el Método ELISA para la determinación de anticuerpos
antitétanos en sueros humanoses capaz de discriminar entre diferentes títulos de anticuerpos
antitetánicos con la prtesición adecuada; la técnica puede ser utilizada en el apoyo diagnóstico de
inmunodeficiencia primaria en niños, medición de título para verificar protección post
vacunación contra tétanos y en estudios epidemiológicos a gran escala, destinados a conocer la
protección de diferentes grupos etarios contra tétanos.
REFERENCIAS
7
1. Martinez B., E. (FIR II), Pellicer J., M.A. (FIR I). Terapéutica en cuidados intensivos.pag:
819-824. Barcelona.
2. Worldwide
Vaccines.
Epidemiología
Difteria,
Tétanos,
Tos
Ferina.
(www.worldwidevaccines.com/public/diseas/dtp10_sp.asp).
3.
Vacunas contra Tétanos y Difteria.(www.mpsp.org/Boletines/Boletin2/tedif.htm).
4. Departamento de Epidemiología, MINSAL. Situación del Tétanos y Tétanos neonatal en
Chile 1987-Primer Semestre 1998.(www.epi.minsal.cl/enf_trans/archivos/tetanos.htm).
5. Protocolo de Tétanos y Tétanos Neonatal. Consejería de Bienestar Social Dirección General
de
Salud
Pública
y
Consumo.
Instituto
Nacional
de
Salud.
(www.juntaex.es/consejerias/syc/dgspc/spub/ProtocoloEDO/Tetanos.pdf )
6. (www.aventispasteur.com.ar/vademecum/hexavac.asp)
7. NIBSC.
Instruccions
for
use:
The
1st
International
Standard
for
TETANUS
IMMUNOGLOBULIN, HUMAN Code:TE-3. Version 3, 1998.
8. VIROTECH®. Tetanus ELISA for detection of IgG antitoxin antibodies against Tetanus in
human serum.
9. Chaloner-Larsson G, Anderson R, Egan A. A WHO guide to good manufacturing practice
(GMP) requirements. Part 2: Validation. Validation of analytical assays. WHO Geneva;
1997. p.65-95.
10. Broughton PMG, Bergonzi C, Lindstedt G, Loeber IG, Malan PG, Mathieu M, et al.
Guidelines for a user laboratory to evaluate and select a kit for its own use. Part 1.
Quantitative tests. European Comittee for Clinical Laboratory Standard 1986; 3:3.
Referencia hemoaglutinaciön pasiva http://193.146.50.130/bes/bes9816.pdf)
1.- Ministerio de Salud Pública de Chile. Manual de Procedimientos Toxoide Tetánico. Primera
Edición, 1983.
8
2.3.- 4.-REFERENCIA BRADFORD
5.-Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria. Validación de Métodos analíticos.}
6.-REFERENCIA ELISA
7.9.-Circular No4F/14. Actualiza vigilancia epidemiológica del tétanos. Departamento de
Epidemiología. División programa de Salud. Ministerio de Salud. República de Chile. 1996.
10.-
Med Vet Patricia Gonzalez presentó el trabajo.
DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS ANTITÉTANOS EN SUEROS EQUINOS
MEDIANTE ELISA. Gonzalez Patricia, Hernandez Gastón, Rivero Bárbara., Rojas H., Lopez
Claudia, Vasquez Abel.
Consultas [email protected]
RESUMEN
DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS ANTITÉTANOS EN SUEROS
EQUINOS MEDIANTE ELISA (Quantification and detection of tetanus antibodies in horse serum by
ELISA method).1Gonzalez, P., 2Hernández, G., 1Riveros, B., 3Rojas, H., 4López C., 1Vasquez, A. 1Centro de
Investigación y Desarrollo. 2Subdepartamento de Vacunas y antitoxina. 4 Bioterios. Departamento de Producción,.
Instituto de Salud Pública de Chile.
3
Facultad de Medicina Veterinaria. U de Concepción. Email:
[email protected]
El tétanos es una enfermedad aguda inducida por la toxina de Clostridium tetani,
siendo la única enfermedad en su género prevenible por vacunación, debido a que no se
transmite entre individuos, ya que penetra en el organismo a través de una herida.
En la actualidad no existe un programa de inmunización en equinos, como tampoco un método de
evaluación de niveles de anticuerpos antitetánicos. Por otra parte, los equinos son utilizados en
algunas regiones del mundo para la producción de antitoxina tetánica de uso humano. P ara evaluar
la respuesta inmune inducida en estos equinos o determinar los niveles protectivos en animales
inmunizados con toxoide tetánico, existe una prueba biológica in vivo, la cual es de alto costo por el número
de animales de laboratorio empleados, toma varios días y no permite analizar un gran número de muestras. Por
este motivo, se hizo necesario desarrollar una metodología sencilla, rápida y que permita analizar una gran cantidad
Introducción:
de muestras en un corto periodo de tiempo. El desarrollo de esta metodología permite evaluar el estado
inmunológico de un plantel equino para analizar la necesidad y tiempo de vacunación, de la misma forma puede ser
de gran utilidad a los productores de antitoxina tetánica de origen equino a la hora de determinar el momento de
realizar una sangría con fines productivos. Objetivo: Cuantificar anticuerpos antitétanos en sueros equinos.
Método: Se utilizaron placas de ELISA sensibilizadas con toxoide tetánico como antígeno de captura. En cada placa
se realizo una curva de calibración (2, 5, 10, 20, 50, 100 y 150 mUI/ml) con suero antitetánico equino de
referencia (ISP). Las determinacion de la concentración de anticuerpos en estudio se interpolaron de la curva
estándar. Resultados: El método ELISA utilizado permite discriminar entre sueros equinos con títulos de
9
anticuerpos altos y bajos. y ha permitido evaluar la respuesta en el tiempo de equinos inmunizados
antitetánica ISP.
con vacuna
2.- Congreso latinoamericano de Microbiologia e Higiene de los Alimentos. realizado en
Santiago del 10 al 14 de Noviembre.
BQ Viviana Cachicas presentó los trabajos:
DISEÑO Y EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE SUSPENSIONES BACTERIANAS CUANTITATIVAS
PARA CUMPLIR REQUISITOS DE CONTROL DE CALIDAD. Silva Susy; Mena Gladys; Muñoz
fabiola; Morales lorena; Zazopulos M(1). Cachicas Viviana. (1) UFSM.
Consultas [email protected]
EVALUACIÓN DE ESTERILIDAD COMERCIAL POSTERIOR A UN TRATAMIENTO TÉRMICO DE
FÓRMULAS LÁCTEAS EN TRES UNIDADES DE SEDILES DE HOSPITALES DE SANTIAGO DE
CHILE. Cachicas Viviana; Mena Gladys; Muñoz fabiola; Borges Verónica.
Consultas [email protected]
EVALUACIÓN DE KIT PARA DETERINACIÓN DE Cyclospora cayetanensis EN FRAMBUESAS.
Cachicas Viviana, Uribe P. (1)., Espejo R(2). (1). (2).INTA Univerisidad de Chile.
Consultas [email protected]
3.- XXIV Congreso Chileno de Microbiología a realizarse en 4 a 6 Diciembre en Punta de Tralca:
BQ Abel Vasquez presenta los trabajos
CLONAMIENTO, EXPRESION Y PURIFICACION DEL GEN DE LA NUCLEOPROTEINA
DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL.
Vásquez Abel(1),Manzur M(2), Riveros Barbara (1), González Patricia (1), Maldonado E (3),
Avendaño LF (2), Fernández JA(2). (1)Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de
Producción, Instituto de Salud Pública. Programas de (3)Biología Celular y Molecular y
(2)
Virología, ICBM, Facultad de Medicina Universidad de Chile. [email protected]
Consultas [email protected]
CLONAMIENTO, EXPRESION Y PURIFICACION DEL GEN DE LA
NUCLEOPROTEINA DEL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL. (Cloning, expression
and purification of nucleoprotein gene from respiratory syncytial virus)
Vásquez A(1),Manzur M(2), Rivero B (1), González P (1), Maldonado E (3), Avendaño LF (2),
Fernández JA(2). (1)Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de Producción, Instituto
de Salud Pública. Programas de (3)Biología Celular y Molecular y (2)Virología, ICBM, Facultad
de Medicina Universidad de Chile. <[email protected]>
Introducción: El VRS es el principal agente causal de bronconeumonia en lactantes menores de
2 años. El análisis de la respuesta inmune contra antígenos definidos del virus es fundamental
para estudios epidemiológicos y de inmunoprofilaxis contra esta infección viral. El VRS posee 2
antígenos inmunodominantes en su envoltura (glicoproteínas GyF). Sin embargo, la variabilidad
antigénica de estas proteínas puede ser un obstáculo en el análisis de la respuesta inmune contra
el VRS. El gen N es el más conservado entre todos los aislados virales de VRS descritos y
estudios recientes indican que la proteína que codifica este gen es reconocida por anticuerpos y
linfocitos T de sujetos inmunes contra el VRS Objetivo: Clonar, expresar y purificar la
10
proteína del gen codificante de la nucleoproteína (N) del VRS, grupo A Mon3/88, cepa prototipo
de aislados VRS del Cono Sur. Métodos: Se diseñaron partidores complementarios a los
extremos 5' y 3' del gen N del VRS A2 (GenBank). Se obtuvo el cDNA por RT-PCR utilizando
como templado RNA de células Hep-2 infectadas con VRS A Mon3/88. El cDNA fue clonado
en el vector PUC19 y analizado en secuenciador automático. El gen N fue posteriormente
subclonado en el vector de expresión pET15b y transformado en E.coli BL21. La proteína
expresada fue purificada en columna Ni-NTA y analizada por SDS-PAGE y Western Blot
Resultados. El secuenciamiento parcial del gen ( 60% extremo 5') revela un 97% de homología
con el gen N de cepas VRS obtenidas en otras zonas geográficas. La proteína fue expresada
después de 2 horas de inducción a 30°C en presencia de ITPG. El análisis mediante SDS-PAGE
mostró una banda de 45 Kda aprox. La proteína fue soluble bajo las condiciones utilizadas en la
expresión y purificada utilizando los residuos de histidina ubicados en el extremo N-terminal de
la proteína. Sueros de sujetos hiperinmunes para el VRS reaccionan con la proteína
recombinante en Western-Blot. Conclusiones: El análisis de secuenciación indica que el gen
clonado corresponde al gen N del VRS. La purificada posee propiedades bioquímicas e
inmunológicas concordantes con la proteína previamente descrita. Esta proteína será utilizada en
estudios de respuesta inmune (celular) contra el VRS. El uso de la nucleoproteína N en estos
estudios podría respresentar una ventaja sobre las glicoproteínas G y F, en las cuales la extensa
varianción antigénica representa una limitante para la detección de respuesta inmune contra el
VRS.
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IDENTIFICACION DEL EXPOSITOR
Abel Eduardo Vásquez Veloso
Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de Producción, Instituto de Salud
Pública de Chile.
Av. Marathon 1000, Ñuñoa. Santiago.
tel: 3507516
[email protected]
Modalidad: Panel
AMPLIFICACION Y CLONAMIENTO DEL GEN psa A DE S. pneumoniae EN E. coli.
Velasquez Francisco (1) , Torres Jeannette(1), Riveros Barbara(1)., Maldonado Aurora(2), Seoane
M(2), Quiroga Clarita(1), Sein Jorge(1), Vásquez Abel(1). (1)Centro de Investigación y Desarrollo,
Departamento de Producción. (2)Sección Bacteriología, Departamento de Laboratorios de Salud.
Instituto de Salud Pública de Chile. Vasquez Abel [email protected]
BQ Viviana Cachicas presenta publicación en Anales de Sociedad de Microbiología :
ANALISIS COMPARATIVO DE AISLADOS CLÍNICOS Y CEPAS DE VACUNAS DE
Bordetella pertussis MEDIANTE AMPLIFICACIÓN ALEATORIA DE FRAGMENTOS DE
DNA (RAPD). Viviana Cachicas(1, Abel Vasquez(1, Cecilia Carmona(2, Soledad Prat(2,
Ivan Calderón(3 (1Perez. (3 ). (1)Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de
Producción. (2)Sección Bacteriología, Departamento de Laboratorios de Salud. Instituto de Salud
Pública de Chile. (3) , Estudiante Bioquímica USACH.
4.- Taller de Normativa Sediles por SESMA
BQ Viviana Cachicas presenta trabajo de difusión
CERTIFICACIÓN DE CICLO DE ESTERILIZACIÓN DE FÓRMULAS LÁCTEAS
Consultas: [email protected]
[email protected]
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