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INSTITUTO TECNICO MUNICIPAL LOS PATIOS
GUIA DE APRENDIZAJE
GRADO NOVENO
MICROBIOLOGIA
Observación de Bacterias
Introducción
Son
técnicas
que
permiten
observar
microorganismos en función de la capacidad de
los mismos para retener o no determinadas
sustancias colorantes, lo que depende de la
carga de la célula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:

Catiónicos. Son sustancias que tienen
carga positiva. Penetran en el interior de las
células y las tiñen. Ejemplos: azul de metileno,
cristal violeta, safranina.

Aniónicos. Con carga negativa. No
penetran en el interior celular, de modo que no
tiñen las células, sino el entorno. En este caso
se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina
nigrosina.

Liposolubles. Se mezclan con los
lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro
sudán.
de esporas,
de flagelos, de paredes celulares, de
corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse
uno o más colorantes.
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite
teñir el interior celular. Tiñe microorganismos
procarióticos (vivos o muertos). Los eucarióticos
sólo se tiñen si están muertos. Algunas
estructuras,
como
los
corpúsculos
metacromáticos, se tiñen más intensamente con
este colorante que el resto de la célula.
b) Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un
colorante aniónico, que no penetra en el
interior celular. Proporciona una visión de la
forma y el tamaño celulares al observarse los
microorganismos brillantes sobre un fondo
oscuro.
Objetivos
1.
Realizar una tinción simple de
bacterias procedentes de distintas
muestras naturales.
2.
Realizar dos tipos de fijaciones
bacterianas y saber en qué casos se
recomienda una u otra.
Las tinciones pueden ser:

Simples. Utilizan un solo colorante. Se
basan en el hecho de que las células tienen una
composición química diferente a la de su
entorno, de modo que ambos se comportan de
forma diferente frente a un colorante. El
colorante tiñe las células (azul de metileno,
safranina) o no (nigrosina).

Diferenciales. Se basan en el hecho de
que distintos tipos de células tienen distinta
composición química, y por lo tanto reaccionan
de forma diferente frente a una tinción, lo que
permite clasificar los microorganismos en
diferentes grupos, según su capacidad de
tinción. En este apartado están dos tinciones de
importancia taxonómica y médica: la tinción de
Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de ZiehlNeelsen). Estas tinciones utilizan más de un
colorante.

Selectivas. Se basan en el hecho de
que distintas estructuras celulares tienen distinta
composición química, de modo que se tiñen
selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción
3.
Observar
la
morfología
bacteriana y aprender a distinguir los
distintos tipos de agrupaciones que
existen.
4.
Practicar con el microscopio al
máximo aumento y con el correcto
empleo del aceite de inmersión.
MATERIAL

Mechero Bunsen o de alcohol

Asa de siembra o aguja ebmangada

Pinzas

Portaobjetos

Muestras bacterians de origen natural:
yogurt, vinagre, sarro dental, suelo,etc.

Colorantes para tinción:

a) Solución de cristal violeta al 1%

b) Solución de safranina al 0.5%

c) Azul de metileno al 1%
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
Mi
croscopio y aceite de inmersión
BACTERIAS DEL YOGURT
El yogur es un producto lácteo producido por la
fermentación natural de la leche. A escala
industrial se realiza la fermentación añadiendo a
la leche dosis del 3-4% de una asociación de
dos
cepas
bacterianas:
elStreptococcus
termophilus, poco productor de ácido, pero muy
aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy
acidificante. En esta preparación se podrán, por
tanto, observar dos morfologías bacterianas
distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupación (estreptococos, cocos en cadenas
arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo
(unos 30µm de longitud) facilita la observación
aunque no se tenga mucha práctica con el
enfoque del microscopio.
Procedimiento
1.
Extension: Realizar el frotis disolviendo
una mínima porción de yogur en una pequeña
gota de agua.
2.
Fijación Fijar con metanol o Xilol para
eliminar parte de la grasa.
3.
Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el
soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul
de metileno ocon un colorante cualquiera de los
arriba indicados durante 4-5 minutos.
4.
Lavar con agua destilada
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6.
ñadir una gota de glicerina y colocar el
cubreobjetos
Observar primero con el objetivo 40×; luego se
añade aceite de inmersión y se observa con el
objetivo 100×
Contestar las siguientes preguntas:
1) El yogur es un alimento más fácilmente
digerible que la leche, ¿por qué?
R/. Es debido a que los cultivos de bacterias que
contiene el yogur rompen las cadenas de lactosa
y la hacen más fácil de digerir. el proceso de
hacer yogur tambien modifica las proteínas de la
leche haciéndolas mas digerible.
2) En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué
alimento será más fácilmente tolerado, la leche o
el yogur? ¿Por qué?
R/. El yogur, porque es un derivado de la leche y
se elabora mediante la fermentación bacteriana
de leche que transforma a los azucares
en ácidos, así la
lactosa
se
convierte
en ácido láctico. El menor contenido de lactosa
del yogur con respecto a la leche, hace que sea
mejor tolerado por quienes no consumen leche
habitualmente y ademas, permite comenzar a
tolerar la lactosa.
3) ¿Qué papel desempeña cada una de estas
bacterias en la formación del yogur a partir de la
leche?
R/. Tanto Lactobacillus
bulgaris como Streptococcus
thermophilus realizan
la fermentación del ácido lactico.
Transforman
los azucares presentes en la leche (lactosa
formada
por
glucosa
y
galactosa)
en ácido lactico. se trata de un proceso
anaerobico que confiere acidez al yogur.
4) ¿Qué otros procesos conoces en que se
empleen bacterias para la elaboración de algún
producto alimenticio?
5.
Secar. pasar el portaobjetos varias
veces por encima de la llama del mechero de
alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta
que se seque.
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Proces
o
Organ
ismo
Papel en
proceso
molécul
a
original
Produ
cto
final
Fabrica
ción de
la
cerveza
Sacch
aromy
ces
cerevis
idae(le
vadura
)
S.
cerevis
idae
Fermenta
ción
alcohólica
y
carbonata
ción
Glucosa
i/o
fructosa
Etanol
+CO2
Fermenta
ción y
carbonata
ción
Oxidación
aerobios
estrictos
Azucar
Co2
F. del
pan
F. del
vinagre
Bacteri
as del
ácido
acético
dependiend
o de las condiciones que se den en el momento
de hacer la preparación, pero suelen abundar
bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran
variedad
de
morfologías:
espiroquetas,
cocobacilos, diplococos y bacilos.
1.
Con una aguja enmangada
tomar una pequeña porción de sarro
dental y disolverla en una gota de agua
sobre el portaobjetos.
2.
Dejar secar y fijar con calor.
3.
Teñir 2-3 minutos,
exceso de colorante y secar.
Alcohol
(etanol)
Acido
acétic
o
BACTERIAS DEL VINAGRE
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido
acético
resultante
de
la
fermentación
espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de
baja graduación. La acetificación del vino es
producida por bacterias aeróbicas del ácido
acético,
principalmente Acetobacter
aceti,
aunque también Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.
1.
Tomar
con
una
aguja
enmangada una pequeña porción de
madre de vinagre natural o de la telilla
que se forma sobre la superficie de los
vinos agriado.
2.
Extender la muestra en el
portaobjetos con una gota de agua y
hacer el frotis.
3.
4.
Dejar secar y fijar con calor.
4.
Teñir 2-3 minutos,
exceso de colorante y secar.
lavar
el
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y
adherente localizado sobre el esmalte de los
dientes. Está constituido principalmente por
restos proteicos, sales minerales y bacterias
junto con sus productos metabólicos. La flora
bacteriana de la cavidad bucal es muy variable
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