i. tema del proyecto - Facultad de Ingeniería Química

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
“Estudio de la Fermentación Láctica para la Extracción de
Quitina a partir de Desechos de Crustáceos”
Maritza Sánchez Christoffle
Coordinadora del Proyecto
Managua, 28 de Septiembre del 2009
TABLA DE CONTENIDO
I.
TEMA DEL PROYECTO ....................................................................................................... 2
II.
ÁREA DEL CONOCIMIENTO ............................................................................................. 2
III.
COORDINADOR ................................................................................................................... 2
IV. INTEGRANTES/EJECUTORES............................................................................................ 2
V.
INSTITUCIONES INVOLUCRADAS .................................................................................. 2
VI. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 3
VII. ANTECEDENTES .................................................................................................................. 4
VIII. JUSTIFICACIÓN.................................................................................................................... 5
IX. HIPÓTESIS ............................................................................................................................. 5
X.
OBJETIVOS............................................................................................................................ 5
10.1
10.2
Objetivo General .............................................................................................................. 5
Objetivos Específicos ....................................................................................................... 5
XI. METODOLOGÍA ................................................................................................................... 6
11.1
11.2
Materiales y Equipos ........................................................................................................ 6
Parte Experimental ........................................................................................................... 7
XII. ALCANCES E IMPACTO DEL PROYECTO .................................................................... 11
XIII. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ................................................................................ 12
XIV. PRESUPUESTO DETALLADO Y PROGRAMA DE DESEMBOLSO............................. 12
XV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................................. 14
1
I.
TEMA DEL PROYECTO
Estudio de la Fermentación Láctica para la Extracción de Quitina a partir de Desechos de
Crustáceos
II.
ÁREA DEL CONOCIMIENTO
Ingeniería de Procesos: Extracción de biomateriales a partir de desechos utilizando métodos
microbiológicos.
III.
COORDINADOR
MP. Ing. Maritza Sánchez Christoffle
[email protected]
Ext. 244 (UNI)
Facultad de Ingeniería Química,
Profesor Titular del Departamento de Química y Medio Ambiente
IV.
-
V.
INTEGRANTES/EJECUTORES
Alejandro Hernández, Facultad de Ingeniería Química, Técnico con especialidad en
procesamiento de Alimentos. E-mail: [email protected].
Ezra Martín Marcia Palma, Facultad de Ingeniería Química, Egresado de la Carrera de
Ingeniería Química. Celular 8492 5428, E-mail: [email protected]
Julia Mercedes Malespín Rocha, Facultad de Ingeniería Química, Egresada de la Carrera de
Ingeniería Química, Celular 8437 8951. E-mail: [email protected]
INSTITUCIONES INVOLUCRADAS
La Empresa Acuarios Internacional y la Empresa CAMANICA suministrarán la materia
prima (desechos de langostino y desechos de camarón) para llevar a cabo este estudio. Los
beneficiarios directos serán la Facultad de Ingeniería Química (FIQ) y la Empresa Acuarios
Internacional. La aplicación de microorganismos para la extracción de materiales valiosos a partir
de desechos, a nivel de laboratorio, podrá servir de base a las Empresas involucradas para la
producción de biomateriales a mayor escala y a menor costo.
2
VI.
INTRODUCCIÓN
Actualmente, existen 15 plantas procesadoras de camarón y langostino en Nicaragua, de niveles y
capacidad de proceso diferenciados, 8 de ellas localizadas en la zona del Pacifico. Sin embargo,
la industria acuícola produce una gran cantidad de desechos de crustáceos los cuales pueden
repercutir negativamente en el medio ambiente y pueden generar un costo adicional para su
deposición, reduciendo las utilidades del sistema de producción.
Estudios anteriores han demostrado que los desechos de langostinos y camarón pueden ser
utilizados como materia prima para la producción de quitina y proteínas (Escorcia y Hernández,
2009). Así como también, para la obtención de otros valiosos subproductos para la industria, tales
como quitosano y glucosamina (Agulló et al., 2004). Estos productos presentan numerosas
aplicaciones en distintas áreas, principalmente en medicina, farmacia, remoción de metales
pesados en el tratamiento de aguas naturales y efluentes industriales, cosméticos, industria
alimenticia, etc. (Harish et al., 2007).
El procesamiento químico para la extracción de estos productos involucra la utilización de altas
concentraciones de ácidos y bases fuertes como el hidróxido de sodio y ácido clorhídrico, así
como grandes volúmenes de agua, lo que provoca contaminación ambiental debido a los
desechos químicos. Además, por medio de esta técnica el %Recuperación, para el caso de la
extracción de quitina a partir de cabeza de langostino, es muy baja ya que solamente se logra una
recuperación del 58.6% (Escorcia y Hernández, 2009).
Como una alternativa, el proceso microbiológico para la extracción de quitina por fermentación
ácido láctica ha sido estudiado. Estos estudios involucran el uso de bacterias del ácido láctico
(Lactobacilo o Lactobacillus) para la desproteinización y descalcificación del material,
obteniéndose quitina como producto final. Lactobacillus es un género de bacterias Gram
positivas anaerobias facultativas que tienen la propiedad de producir ácido láctico de la lactosa y
otros azúcares por un proceso llamado fermentación. Algunas especies de lactobacillus son
usadas industrialmente para la producción de yogur y otros alimentos fermentados.
Por otro parte, el suero de la leche, el cual es un gran contaminante de las aguas superficiales
debido a su alta demanda bioquímica de oxigeno (DBO), puede ser utilizado como sustrato en las
reacciones de fermentación láctica (Trujillo, 1998). El suero de la leche es un líquido obtenido en
el proceso de fabricación del queso y de la caseína, después de la separación de la cuajada. Sus
características corresponden a un líquido fluido, de color verdoso amarillento, turbio, de sabor
fresco, débilmente dulce, de carácter ácido, con un contenido de nutrientes o extracto seco del
5.5% al 7% provenientes de la leche.
Con la elaboración de este proyecto se pretende estudiar y aplicar un método microbiológico para
la extracción de quitina a partir de desechos de crustáceos por fermentación ácido láctico,
utilizando suero de la leche como sustrato.
3
Desechos de camarón
Lactobacillus
Quitina
VII.
ANTECEDENTES
Desde el 2005, en el área de Ingeniería de procesos del Programa de investigación UNIAsdi/SAREC-FIQ se ha extraído quitina y quitosano, a nivel de laboratorio, a partir de caparazón
de camarón por tratamiento químico con bases y ácidos fuertes. El quitosano producido se ha
utilizado como un adsorbente en estudios de remoción de metales pesados de aguas naturales y
residuales.
En un estudio realizado por Escorcia y Hernández (2009) para el diseño y montaje de una planta
piloto para producir quitina, se encontró que utilizando la metodología por tratamiento químico
se puede obtener un %Recuperación de quitina del 99.8% de caparazón de camarón y del 58.6%
a partir de desechos de langostinos. Además, que el costo de producción para la obtención de
quitina a partir de desechos de langostino es muy alto en comparación con los precios
internacionales. Este dato es muy importante principalmente si se quiere comercializar este
producto a nivel internacional.
Por otro lado, estudios de purificación de quitina a partir de desechos de crustáceos por
fermentación ácido láctica han reportado tener mayores ventajas con respecto al tratamiento
químico (Carvalho et al., 2009; Xu et al., 2008): no produce desechos tóxicos, mayor calidad del
producto obtenido y disminución de los costos de producción. Dentro de estos estudios se puede
mencionar el realizado por Khanafari et al. (2008), el cual extrajo quitina a partir de desechos de
camarón con Lactobacillus plantarum a diferentes condiciones. Este estudio reportó que la
efectividad de desmineralización del ácido láctico (producido por esta bacteria) fue mucho mayor
que la del ácido sulfúrico en el tratamiento químico.
4
VIII. JUSTIFICACIÓN
Los desechos derivados de la producción de camarón y langostino, así como la producción de
suero por las industrias queseras crean un problema ambiental que puede afectar la salud de las
comunidades aledañas. Sin embargo, estos materiales pueden ser aprovechados para la obtención
de productos de interés comercial y de investigación tales como la quitina, el quitosano y la Dglucosamina.
Estudios previos han demostrado que la quitina puede ser extraída de desechos de crustáceos por
fermentación con bacterias de ácido láctico. Además, se puede usar suero de leche, un
contaminante biológico, como sustrato para llevar a cabo la fermentación. El uso de esta
metodología permitirá: obtener mayor rendimiento en la producción de quitina (en el caso de
cabeza de langostino), menor costo de producción, ya que se evita la adquisición de reactivos
caros, y la contaminación ambiental, ya que no se producirían sustancias tóxicas en los efluentes
líquidos.
La Empresa Acuarios Internacional está muy interesada en utilizar los desechos de langostino en
diferentes proyectos entre los que se encuentra la extracción de quitina para su comercialización
y la producción de harina. Actualmente, esta empresa produce un promedio de 12 contenedores
de desechos de Langostinos, equivalentes a 450,000lb mensuales.
IX.
HIPÓTESIS
Con la extracción de quitina a partir de desechos de crustáceos por métodos microbiológicos, se
obtendrá una mayor recuperación de quitina y proteínas, y una disminución en los costos
ambientales y de producción.
X.
OBJETIVOS
10.1
Objetivo General
Estudiar la fermentación láctica para la extracción de quitina a partir de desechos de camarón y
cabeza de langostino.
10.2
Objetivos Específicos

Establecer los parámetros óptimos para la fermentación láctica de caparazones de camarón y
cabeza de langostinos usando suero de la leche como sustrato.

Determinar el pH, la acidez total, la concentración de Ca, el %Nitrógeno proteico y el
%Nitrógeno total como variables de medición, durante la fermentación láctica del caparazón
de crustáceos.

Comparar los resultados obtenidos de la fermentación láctica con los obtenidos con el
tratamiento químico.
5
XI.
METODOLOGÍA
Este estudio se llevará a cabo en las instalaciones del laboratorio de Ingeniería de los alimentos,
en la Facultad de Ingeniería Química (FIQ) y los análisis para la determinación de los parámetros
de medición se realizarán en los diferentes laboratorios de la FIQ.
11.1
Materiales y Equipos
11.1.1 Suero de Leche
Para la elaboración del suero se hace coagular la leche mediante la adición de una pastilla de
cuajo. Con ello la leche se descompone en dos partes: una masa semisólida, compuesta de caseína
y un líquido, que es el suero de leche. El suero de leche es transparente y de color amarillo
verdoso y tiene un sabor ligeramente ácido, bastante agradable (Ver Fig. 1a).
(a) Suero de leche
(b) Caparazón de camarón
(c) Langostino
Figura 1: Materiales a utilizar en la extracción microbiológica de quitina
11.1.2 Caparazón de Camarón
El Caparazón de camarón será proporcionado por la Empresa CAMANICA. El material esta
compuesto principalmente de cabeza, patas y caparazón (ver Fig. 1b)
11.1.3 Cabeza de Langostino
Los desechos de cabeza de langostino serán proporcionados por la Empresa Acuario International
(ver Fig. 1c).
11.1.4 Reactivos
Los reactivos a utilizar para la determinación de las variables de medición se presentan en la
Tabla 1. La preparación de todos los reactivos incluye la utilización de agua desionizada.
11.1.5 Materiales de Laboratorio
Los materiales de laboratorio para llevar a cabo este estudio incluyen: pipetas, beakers, matraz
volumétricos y probetas de diferente graduación, bureta de 25mL, envases de plástico de 100mL
para almacenar muestras, matraz erlenmeyer de 150mL, soporte universal, gotero, agitador
magnético.
6
Tabla 1: Descripción de los Reactivos a utilizar para la determinación de las
variables de medición.
No.
Descripción
Análisis
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Acido Nítrico concentrado
Estándar de Ca de 1000 mg/L
Acido Sulfúrico concentrado
Hidróxido de sodio al 40%
Acido Bórico
Verde de Bromocresol
Rojo de Metilo
Sulfato de amonio
Acido Clorhídrico 0.10M
Hidróxido de sodio 0.1M
Fenolftaleína
Determinación de Ca
Determinación de Ca
Determinación de N
Determinación de N
Determinación de N
Determinación de N
Determinación de N
Determinación de N
Determinación de N
Acidez Titulable
Acidez Titulable
11.1.6 Equipos
En la Tabla 2 se enlistan los equipos que se van a utilizar para la realización del estudio y la
determinación de las variables de medición durante la fermentación láctica.
No.
1
2
3
4
5
6
7
11.2
Tabla 2: Equipos de Medición
Descripción
Observación
Procesador de alimentos
Trituración de la materia prima
Equipo de Fermentación
Estudio de la fermentación láctica
Balanza de precisión
Para pesar la materia prima
pH–metro
Análisis de pH
Equipo Kjeldahl
Determinación de N total y proteico
Espectrómetro de Absorción Atómica
Determinación de Calcio
Microscopio
Conteo de bacterias
Parte Experimental
11.2.1 Fermentación Láctica de Desechos de Crustáceos
Para la obtención de la quitina por fermentación láctica, se utiliza caparazón, patas y colas de
camarón y cabeza de langostino. En la Figura 2 se muestra el diagrama de bloque del proceso.
7
Masa de material
1.0kg
Leche (5.0L)
Pastillas de
cuajo
Lavado
Triturado
Suero de la
leche
Fermentación
Láctica (10 días)
NaClO 0.38%
Blanqueo
Proteínas y CaCl2
Pigmentos
Filtración
Secado en el horno
a 50ºC
QUITINA
Figura 2: Diagrama de bloque de la obtención de quitina por fermentación láctica.
8
El procedimiento incluye los siguientes pasos:

Pesado: se pesa 1.0kg de materia prima en una balanza de precisión como la mostrada
en la Fig. 3a.

Lavado: para descongelar el material y eliminar los restos de carne.

Trituración: el material es triturado en un procesador de alimentos (ver Fig. 3b) con el
propósito de garantizar una buena fermentación del material.
(a) Balanza de precisión PCE BS 3000
(b) Procesador de alimentos Oster
Figura 3: Equipos a utilizar para el pesado y triturado de la materia prima.

Fermentación Láctica: el material se coloca en una canastilla de acero inoxidable y se
introduce en el fermentador, el cual contiene el suero de leche (ver Fig. 4). La
fermentación transcurre a temperatura ambiente por 10 días aproximadamente. Cada 6
horas la mezcla es agitada con ayuda de un agitador de paletas y se toma una muestra de
suero de 50mL para el análisis de pH, acidez total, calcio, nitrógeno proteico y
nitrógeno total. Posteriormente, la canastilla se retira del fermentador, el material se
saca y se lava con abundante agua.
Figura 4: Esquema del equipo de fermentación y sus componentes
para llevar a cabo la extracción de quitina.
9

Blanqueo: si el sólido obtenido en el paso anterior contiene pigmentos, éste se tratará
con una solución de hipoclorito de sodio al 0.38% para blanquear el producto.

Filtración: el sólido (quitina) es separado de la solución por medio de la decantación a
través de un colador. El sólido es recogido y lavado para la siguiente etapa.

Secado: la humedad de la quitina producida se reduce hasta aproximadamente el 0% de
humedad en un secador a una temperatura entre 45–50ºC, para proceder al enfriamiento,
empaque y almacenamiento del producto final.
En el Equipo fermentador se llevarán a cabo un total de 2 corridas preliminares para tener una
idea del comportamiento del material y las variables de medición durante la fermentación láctica;
y 10 corridas para estudiar la fermentación láctica y el comportamiento de las variables (pH,
acidez total, concentración de Ca, N total y N proteico): 5 con caparazón de camarón y 5 con
langostino.
Cada corrida para estudiar el proceso, tendrá un tiempo de duración entre 10 – 15 días,
dependiendo de los resultados obtenidos en las corridas preliminares, y cada cierto tiempo se
tomará una muestra de 50mL para realizar una medición cuantitativa de las variables, para un
total de 20 muestras por corrida (240 muestras en total). A continuación se describe como se
llevará a cabo la medición de cada variable considerada.
11.2.2 Determinación del pH
El pH de las muestras recolectadas del fermentador se mide directamente en un pH-metro como
el mostrado en la Fig. 5a.
11.2.3 Determinación de Calcio
El análisis de Ca en las muestras se realizará por Espectrometría de Absorción Atómica,
utilizando un Equipo GBC, modelo AAS 932 (ver Fig. 5b), en el Laboratorio de Ingeniería de
Procesos de la FIQ.
(a) pH-metro Metttler
(b) Espectrómetro de Absorción Atómica GBC AAS 932
Toledo
Figura 5: Equipos a utilizar para analizar (a) el pH y (b) la concentración de Ca en las
muestras de la fermentación láctica.
10
A 10mL de muestras se le agregará 0.5mL de HNO3 concentrado para su posterior análisis. El
análisis abarca la preparación de estándares para preparar la curva de calibración (Absorbancia
vs. concentración). Los estándares serán preparados a partir de una solución madre de 1000mg/L
de Ca, con agua desionizada.
11.2.4 Determinación de Acidez Titulable
Esta determinación se hace por titulación con una base fuerte. Se mide 2mL del licor-muestra con
una pipeta aforada y se coloca en un matraz Erlenmeyer de 125mL. Se agrega 50mL de agua
destilada y 5 gotas de la solución indicadora de fenolftaleína. Se titula con una solución valorada
de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1M, que esta contenida en una bureta de 25mL, con agitación
constante hasta el viraje del indicador.
11.2.5 Determinación de Nitrógeno total y Nitrógeno Proteico
El análisis de nitrógeno total y nitrógeno proteico se realizará por el Método Kjeldahl. Para ello
se hará uso del Equipo Kjeldahl ubicado en el nuevo Laboratorio de Ingeniería Química de la
FIQ (ubicado en las cercanías del IES).
XII.
ALCANCES E IMPACTO DEL PROYECTO
Durante el período en que se llevará a cabo el proyecto, se presentarán informes mensuales del
avance del mismo, con resultados experimentales, discusión y conclusiones. Al finalizar el
proyecto se presentará un informe final que contendrá lo siguiente:
 Resultados del proceso de optimización para la extracción de quitina por fermentación
láctica para los dos tipos de material.
 Análisis gráficos de los resultados de pH, mg/L C, %N proteico y %N total en función del
tiempo (horas) de la fermentación láctica.
 Producción de quitina y proteína a partir de caparazón de camarón y cabeza de langostino
por métodos biológicos.
 Comparación del método biológico y el método químico para la obtención de quitina a
nivel de laboratorio. El análisis abarcará el balance económico y ambiental del proyecto.
Con los resultados de este estudio se planea escribir un artículo para ser publicado en la Revista
NEXO de la UNI.
11
XIII. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Para llevar a cabo este estudio se necesitarán 6 meses de ejecución. Las actividades a realizar se
presentan en la Tabla 3.
Tabla 3: Actividades contempladas para el Estudio de la Fermentación Láctica.
No.
Item
Semanas
2
Actividades
Fecha de inicio del
proyecto.
Solicitud de Desembolso
3
Desembolso
4
Rendición de cuentas
5
Solicitud de cotizaciones
1
6
7
8
9
10
11
Oct.
3
Nov.
4 1 2 3 4
Dic.
1
2
Enero
3 2 3
Feb.
Marzo
Abril
4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Abastecimiento de la
materia prima.
Adquisición de Artículos
de oficina, Reactivos y
Equipos
Estudio preliminar para
establecer parámetros
Estudio de la fermentación
láctica
Análisis de pH, Ca, N total
y N proteico
Análisis y discusión de los
resultados
Entrega de Informe
Mensual
Entrega del Informe
Final
XIV. PRESUPUESTO DETALLADO Y PROGRAMA DE DESEMBOLSO
En la Tabla 4 se presenta el presupuesto detallado del proyecto que muestra la descripción de los
gastos y el monto involucrado (en dólares). Dado que los precios pueden variar durante el
próximo año, se considera un imprevisto del 5.6%. El monto total del proyecto es de USD
$3,748.36 (Tres mil setecientos cuarenta y ocho Dólares con 36/100)
El programa de desembolso se muestra en la Tabla 5. Se programaron 2 desembolsos y por lo
tanto, 2 Rendiciones de cuentas, las cuales están reflejadas en la tabla del cronograma de
actividades (ver Tabla 3)
12
Tabla 4: Presupuesto Detallado
No.
Descripción
UND
Presupuesto
(USD)
Unitario
Sub-Total
3
35.00
105.00
3
20.00
60.00
20
3.00
60.00
1
200.00
200.00
4
Transporte (combustible) a
Chinandega/Corinto por viaje
Viáticos (alimentación) p/4 personas
($5.0/persona) por viaje
Transporte (pasaje para movilización en la
ciudad)
Papelería y artículos de oficina.
5
Leche pura (5L/corrida)
60
1.00
60.00
6
2
2.00
4.00
1
30.00
30.00
8
Pastillas de cuajo (caja)
Hipoclorito de sodio al 12% (NaClO)/bidón de
5 galones
Estándar de Calcio de 1000mg/L (500mL)
1
60.95
60.95
9
Hidróxido de sodio en lentejas (NaOH)/1kg
12
30.00
360.00
10
Acido Clorhídrico concentrado (HCl) 2.5L
2
41.30
82.60
11
Acido Sulfúrico concentrado (H2SO4) 2.5L
2
42.91
85.82
12
Sulfato de amonio en sólido ((NH4)2SO4)/500g
4
44.75
179.00
13
Acido Bórico en sólido (H3BO3)/500g
3
60.07
180.21
14
Verde de Bromocresol/5g
1
84.18
84.18
15
Rojo de Metilo/25g
1
65.69
65.69
16
Etanol 99% (CH3CH2OH)/4L
1
68.57
68.57
17
1
82.56
82.56
1
592.58
592.58
19
Fenolftaleína
Balanza de Precisión marca OHAUS.
Capacidad de pesaje: 3000g. Lectura: 0.1g
pH–metro, marca Mettler Toledo
1
832.20
832.20
20
Procesador de Alimentos, marca Oster
1
250.00
250.00
21
Canasta
1
105.00
105.00
22
Imprevistos
1
200.00
200.00
1
2
3
7
18
Total (USD)
3,748.36
13
Tabla 4: Programa de Desembolso
No.
Descripción
1
Primer
desembolso
2
Segundo
desembolso
XV.
Observación
 Compra de Reactivos, papelería y
artículos de oficina,
 Adquisición
de
Procesador
de
alimentos,
 Transporte y viáticos (1er. muestreo),
 Transporte para movilización interna
 50% de imprevistos.
 Compra de Reactivos, papelería y
artículos de oficina,
 Adquisición de Canasta de acero
inoxidable, la Balanza de precisión y el
pH-metro,
 Transporte y viáticos (2do y 3er.
muestreo),
 Transporte para movilización interna
 50% de imprevistos.
Desembolso
(USD)
1,412.80
2,335.56
Fecha
1ra sem/Nov
2009
2da sem/Enero
2010
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Agulló E., R. Mato, C. Tapia, A. Heras, J. San Román, W. Argüelles, F. Goycoolea, A.
Mayorga, J. Nakamatsu, y A. Pastor (2004). “Quitina y Quitosano: Obtención, Caracterización
y Aplicaciones”, Pontificia Universidad Católica del Perú, Fondo Editorial 2004, pp. 244 – 245.
Carvalho T., V. Nogueira, G. Melo, P. Pinheiro, A. Craveiro y V.M. Melo (2009).
“Bioprocessing of Crustacean Shell Waste to Recovery Chitin, Proteins and Pigments”, 9 th
International Conference of the European Chitin Society, Venice, Italy, PO1-26.
Escorcia, D. y D. Hernández (2009). “Propuesta Técnica para la obtención de Quitina a partir de
caparazones de Crustáceos a nivel de Planta Piloto”. Tesis Monográfica. Universidad Nacional de
Ingeniería, Managua, Nicaragua.
Harish, K. V. y R. N. Tharanathan (2007). “Chitin/Chitosan Modifications and Their
Unlimited Application Potential – An Overview”. Trends in Food Science & Technology 18: 117
– 131.
Khanafari A., R. Marandi y Sh. Sanatei (2008). “Recovery of Chitin and Chitosan from
Shrimp Waste by Chemical and Microbial Methods”, Iran J. Environ. Health Sci. Eng. Vol 5, No.
1, pp. 19 – 24.
Trujillo, M., F. Suárez y D. Gallego (1998). “Fermentación Láctica en continuo a partir de
Suero Dulce de Leche Desproteinizado”. Revista Colombiana de Biotecnología 1(1): 45 – 50.
Xu, Y., C. Gallert y J. Winter (2008). “Chitin Purification of Shrimp Wastes y Microbial
Deproteination and Decalcification”. Appl Microbiol Biotechnology, Vol. 79, pp. 687 – 697.
14
15