ETAPA FECHA 04/03/99 01/03/00 Agosto 00 21/03/01 Junio 01 ANTEPROYECTO DE RESOLUCION OENO/SCMA/00/160/Et.5 CUANTIFICACION DEL NITROGENO TOTAL LA ASAMBLEA GENERAL, Visto el Artículo 5, apartado 4 de la Convención internacional de unificación de los métodos de análisis y de apreciación de los vinos del 13 de octubre de 1954, A propuesta de la Subcomisión de métodos de análisis y de apreciación de los vinos, DECIDE completar el Anexo A del Compendio de los métodos internacionales de análisis de los vinos y de los mostos, con el método siguiente: CUANTIFICACION DEL NITROGENO TOTAL SEGUN EL METODO DE DUMAS (Mostos y Vinos) 1. CAMPO DE APLICACION El presente método se aplica al análisis del nitrógeno total de los mostos y de los vinos en la gama de 0 a 1000 mg/l. 2. DESCRIPCION DE LA TECNICA 2.1 Principio del método de Dumas El análisis del nitrógeno total que se encuentra en una matriz orgánica puede ser realizado por el método de Dumas (1831). El métodoconsiste en una combustión total de la matriz en presencia de oxígeno. Los gases producidos se reducen por medio de cobre y luego desecados; el CO 2 queda retenido. El nitrógeno se cuantificapor medio de un detector universal. 2.2 Principio del análisis (figura n° 1) - Inyección de la muestra y del oxígeno en el tubo de combustión a 940°C (1) ; - Combustión « flash » (2) ; - La combustión de la cápsulacapsula(3) lleva temporalmentela temperatura a 1800°C ; - Oxidación complementaria y retención de los halógenos sobre óxido de cobalto cobáltico plateado y sesquióxido de cromo granular (4) ; - Reducción de los óxidos de nitrógeno a N2 y retención de los componentes azufrados y del exceso de oxígeno por medio del cobre a 700°C (5) ; - Los gases presentes en el helio son los siguientes: N 2, CO2 et H2O (6) ; - Retención de los elementos no dosificados: H 2O con anhidrona (perclorato de magnesio anhidro granular) (7) y del CO2 por medio de la ascarita (hidróxido de sodiosobre silicio) (8) ; - Separación cromatográfica del nitrógeno y del metano eventualmente presente como consecuencia de la toma de una alicuota demasiado importante. (9) ; - Detección sobre catarómetro (10) ; - Registro de la señal y tratamiento de los datos (11). 11 6 He 1 10 2 7 3 5 8 9 4 Figura 1 : Esquema del principio del análisis 3. REACTIVOS 3.1 Nitrógeno (calidad técnica) ; 3.2 Helio (pureza 99,99994%) ; 3.3 Oxido de cromo (sesquióxdo de cromo en gránulos) ; 3.4 Oxido de cobalto (óxido cobalto-cobáltico plateado granulado) ; 3.5 Lana de cuarzo; 3.6 Cobre (cobre reducido en hilos) ; 3.7 Ascarita (hidróxido de sodio sobre silicio) ; 3.8 Anhidrona (perclorato de magnesio anhidro granular) ; 3.9 Oxígeno (pureza 99,995%) ; 3.10 Atropina ; 3.11 Clorhidrato de ácido glutámico; 3.12 Agua desmineralizada; 3.13 CápsulaCápsulas de estaño. 4. APARATOS 4.1 Centrifuga equipada de recipientes de 25 ml ; 4.2 Analizador de nitrógeno; 4.3 Crisol metálico; 4.4 Tubo de reacción de cuarzo (2) ; 4.5 Balanza de precisión entre 0,5 mg y 30 g a 0,3 mg ; 4.6 Porta-cápsula cápsulas; 4.7 Estufa ; 4.8 Aparato paracerrar las cápsulas; 4.9;Muestreador 4.10 Ordenador e impresora. 5. MUESTREO Desgasificación por barboteo al nitrógeno (2.1) durante 5 a 10 mn, de los vinos efervescentes. Los mostos son centrifugados (3.1) durante 10 mn a 10°C, a 4200 g. 6. MODO OPERATORIO - Abrir el programa del aparato (3.1) ; - Calentar el aparato (3.2). 6.1 – Principales parámetros analíticos Analizador de nitrógeno (3.2)en las condiciones siguientes: - gas vector : helio (3.2) ; - crisol metálico (4.3) a vaciar cada 80 análisis ;tubo (4.4) de oxidación, calentado a 940 °C, conteniendo óxido de cromo (3.3) y óxido de cobalto (3.4) mantenidos por lana de cuarzo (3.5). El conjunto tubo y reactivos debe ser cambiado cada 4000 análisis. - tubo (4.4) de reducción, calentado a 700 °C, conteniendo el cobre (3.6) mantenido por lana de cuarzo (3.5). El cobre debe cambiarse cada 450 análisis; - tubo de absorción conteniendo 2/3 de ascarita (3.7) y 1/3 de anhidrona (3.8). Cada 200 análisis, la ascarita en bloque debe ser eliminada.Los absorbentes se cambian completamente una vez al año. -Cuanto mayor es la cantidad de materia orgánica que debe ser quemada, más cantidad de oxígeno es necesario: el tiempo de apertura del circuito de oxígeno (3.9) es de 15 segundos para el mosto y de 5 segundos para el vino. NOTA : los metales son recuperados para ser enviados a un centro de destrucción o de reciclaje especializado. 6.2 – Preparación de la gama patrón Preparar dos muestras de atropina (3.10) entre 4 y 6 mg. Pesarlas (4.5) directamente en las cápsulas. La curva patrón pasa entonces por tres puntos (origen=cápsula vacía). 6.3 – Preparación de autocontroles Los autocontroles se hacen regularmente al principio y en medio de una serie de análisis. Los autocontroles son realizados por medio de de ácido glutámico bajo forma de corohidrato utilizado en forma de solución de 600 mg/l de nitrógeno en aguadesmineralizada (3.12). Masa molar del ácido glutámico = 183,59 Masa molar del nitrógeno = 14,007 18359 . 0.6 = 7,864 g/l 14.007 Pesar (4.5) 7,864 g de ácido glutámico (3.11) y diluirlo en el agua desmineralizada (3.12) c.s.p. 1 litro, para obtener una solución de 600 mg/l de nitrógeno. Esta solución se diluye a la mitad, para obtener una solución de 300 mg N/l y esta solución se diluye a la mitad para obtener una solución de 150 mg/l. 6.4 Preparación de las muestras: 6.4.1 – En una cápsula (3.13), pesar (con una exactitud de 0,01 mg) 20 µl de mosto o 200 µl de vino con la balanza de precisión (4.5). Repetir la operación tres veces por muestra; 6.4.2 – Anotar cada peso; 6.4.3 – Colocar a medida que se anota el peso las cápsulas en el porta cápsulas(4.6) ; 6.4.4 – Poner las cápsulas en la estufa (4.7) regulada a ~ 60° C, hasta la desecación completa del líquido (lo cual tarda por lo menos una hora) ; 6.4.5 Cerrar y aplastar las cápsulas en un aparato previsto para ello (3.8), ponerlas en el muestreador(4.9) en el orden de los números. 7. EXPRESION DE LOS RESULTADOS La impresora conectada al ordenador imprime directamente los resultados ylos expresa en g/l con 4 cifras significativas después de la coma. La lista impresa es conservada en la unidad enología el primer año, luego en archivos. Los resultados son inscritos a mano en el boletín de análisis. 8. CONTROL DE LOS RESULTADOS Conexión indirecta por masa, temperatura y volumen. 9. BIBLIOGRAFIA Dumas A. (1826) : Annales de chimie, 33,342. Buckee G.K. (1994) : Determination of total nitrogen in Barley, Malt and Beer by Kjeldahl procedures and the Dumas combustion method. Collaborative trial. J. Inst. Brew., 100, 57-64.