ÁCIDO FÓLICO

FÓLICO, ÁCIDO
C19H19N7O6
PM: 441,4
59-30-3
Definición - Ácido Fólico es Ácido N-[4[[(2-amino-1,4-dihidro-6-pteridinil)metil]amino]be
nzoil]-L-glutámico. Debe contener no menos de
97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de
C19H19N7O6, calculado sobre la sustancia anhidra y
debe cumplir con las siguientes especificaciones.
Caracteres generales - Polvo cristalino amarillo, amarillo pardo o amarillo anaranjado, inodoro.
Soluble en ácido clorhídrico 3 N caliente, en ácido
sulfúrico 2 N caliente y en ácido clorhídrico da
soluciones de color amarillo pálido. Fácilmente
soluble en soluciones diluidas de hidróxidos y carbonatos alcalinos; muy poco soluble en agua; insoluble en acetona, alcohol, cloroformo y éter.
Sustancia de referencia co SR-FA.
Ácido Fóli-
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos bien cerrados.
ENSAYOS
Identificación
A - Absorción ultravioleta <470>
Solvente: solución de hidróxido de sodio
1 en 250.
Concentración: 10 µg por ml.
Relación de absorbancias: A256 / A365 entre
2,80 y 3,00.
B - Disolver 250 mg de Ácido Fólico en hidróxido de sodio 0,1 N y diluir a 25 ml con el mismo
solvente. La rotación específica (ver 170. Determinación de la rotación óptica) debe ser aproximadamente + 20°, calculada con respecto a la sustancia anhidra.
Determinación de agua <120>
Titulación volumétrica directa. Agitar el metanol antes, durante el agregado de la muestra y en la
determinación. No más de 8,5 %.
Determinación del residuo de ignición <270>
No más de 0,3 %.
Pureza cromatográfica
[NOTA: emplear materiales de vidrio inactínico].
Sistema cromatográfico, Solución de ácido fosfórico 3 N, Solución de hidróxido de amonio 6 N,
Fase móvil, Solución del estándar interno, Solución
madre del estándar, Preparación estándar y Aptitud del sistema - Proceder según se indica en Valoración.
Solución muestra - Emplear la Solución madre
de la muestra preparada según se indica en Valoración.
Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo
aproximadamente 10 µl de la Solución muestra.
Desarrollar los cromatogramas durante al menos
dos veces el tiempo de retención del ácido fólico.
Registrar los cromatogramas y medir las respuestas
de todos los picos. La suma de las respuestas de
todos los picos, excepto el correspondiente al ácido
fólico, no debe ser mayor de 2,0 %.
Impurezas orgánicas volátiles <520>
Método II.
VALORACIÓN
[NOTA: emplear materiales de vidrio inactínico].
Sistema cromatográfico - Emplear un equipo
para cromatografía de líquidos con un detector
ultravioleta ajustado a 280 nm y una columna de
25 cm × 4,0 mm con fase estacionaria constituida
por octadecilsilano químicamente unido a partículas
porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. El
caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minuto.
Solución de ácido fosfórico 3 N - Disolver 9,8 g
de ácido fosfórico en 100 ml de agua.
Solución de hidróxido de amonio 6 N - Diluir
40 ml de hidróxido de amonio a 100 ml con agua.
Fase móvil - Transferir 2,0 g de fosfato monobásico de potasio a un matraz aforado de 1 litro y
disolver en aproximadamente 650 ml de agua.
Agregar 15,0 ml de solución de hidróxido de tetrabutilamonio 0,5 M en metanol, 7,0 ml de Solución
de ácido fosfórico 3 N y 270 ml de metanol. Enfriar
a temperatura ambiente y ajustar a pH 5,0 con Solución de ácido fosfórico 3 N o Solución de hidróxido
de amonio 6 N. Completar a volumen con agua,
mezclar y filtrar. [NOTA: controlar el pH antes de
usar.]
Solución del estándar interno - Disolver aproximadamente 50 mg de metilparabeno en 1,0 ml de
metanol, diluir a 25,0 ml con Fase móvil y mezclar.
Solución madre del estándar - Preparar una solución de Ácido Fólico SR-FA en Fase móvil de
aproximadamente 1 mg por ml. [NOTA: para disolver el Ácido Fólico emplear 1 ml de hidróxido
de amonio al 10 % por cada 100 ml de la Solución
madre del estándar.]
Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre del estándar a un matraz aforado de
50 ml, agregar 4,0 ml de Solución del estándar
interno, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Solución madre de la muestra - Pesar exactamente alrededor de 100 mg de Ácido Fólico, transferir a un matraz aforado de 100 ml y agregar aproximadamente 40 ml de Fase móvil y 1 ml de hidróxido de amonio al 10 %. Completar a volumen con
Fase móvil y mezclar.
Preparación muestra - Transferir 4,0 ml de la
Solución madre de la muestra a un matraz aforado
de 50 ml, agregar 4,0 ml de la Solución del estándar
interno, completar a volumen con Fase móvil y
mezclar.
Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) Cromatografiar la Preparación estándar y registrar
los cromatogramas según se indica en Procedimiento: la resolución R entre los picos de metilparabeno
y ácido fólico no debe ser menor de 3,6; la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no
debe ser mayor de 2,0 %.
Procedimiento - Inyectar por separado en el
cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente
10 µl) de la Preparación estándar y la Preparación
muestra, registrar los cromatogramas y medir las
respuestas de los picos principales. Calcular la
cantidad de C19H19N7O6 en la porción de Ácido
Fólico en ensayo.