INHIBICIÓN DE LA PROLIFERACIÓN CELULAR INDUCIDA POR

INHIBICIÓN DE LA PROLIFERACIÓN CELULAR INDUCIDA POR UN
ANTAGONISTA DEL PÉPTIDO INTESTINAL VASOACTIVO (VIP) EN UN
MODELO DE CULTIVO CELULAR DE TESTÍCULO DE EMBRIÓN DE POLLO
Aguirre-Benítez Elsa Liliana1, Ma. Eugenia Mendoza2, Carmen Solano Agama2,
Dolores Martín2, Alfonso Velázquez Carranza1 y Margarita González del Pliego1
1Departamento de Embriología, Facultad de Medicina, UNAM. 2Departamento de
Fisiología, Biofísica y Neurociencias, CINVESTAV, México, D. F., México
([email protected])
PROYECTO APOYADO POR PAPIIT IN206007
En estudios realizados en el tracto genital de hembras y machos de mamíferos, se
demostró la participación del péptido intestinal vasoactivo (VIP). En las aves, el
VIP se ha detectado en la inervación extrínseca que llega a las gónadas y en
células esteroidogénicas. VIP juega un papel relevante en el control del flujo
vascular, la contracción muscular y la actividad reproductora; está relacionado con
la proliferación celular en las gónadas de mamíferos. Nuestro grupo ha
demostrado con inmunohistoquímica, la presencia de VIP en el tejido testicular y
ovárico de embriones de pollo. Además analizamos el efecto de la administración
del VIP en cultivos de reagregados celulares obtenidos de ovario y testículo,
donde observamos cambios en la organización de los cultivos y un incremento en
las poblaciones celulares. Proponemos que VIP juega un papel en la morfogénesis
gonadal y en la actividad esteroidogénica de aves. Como parte de los mecanismos
que conlleva la diferenciación gonadal, está la proliferación celular, la cual nos
interesa evaluar y determinar el papel del VIP en la proliferación celular,
empleando un modelo in vitro de reagregados celulares obtenidos de testículos de
embriones de pollo entre 15-20 testículos de embriones de pollo de la raza White
Leghorn, de 14 días de incubación, donde se administró un antagonista de VIP
con el fin de bloquear su efecto y determinar su efecto en la proliferación de las
células testiculares. Los tejidos se disgregaron en tripsina 0.25% y se sembraron
las células en insertos Millipore de 0.22 um de 30 mm en medio DMEM. Cada
inserto se colocó en cajas de seis pozos de 3 ml. Se incubaron durante 24 h con
medio de cultivo+suero bovino fetal (SBF). Posteriormente, los reagregados
celulares se colectaron a las 48 hs, y se dividieron en las cuatro variantes
experimentales por duplicado: control con medio + suero, control con medio sin
suero, antagonista de VIP (10-6 M) con suero y sin suero. El análisis de la
inhibición de la proliferación celular se evaluó a través de un ensayo con timidina
tritiada. Se toman 20 µl de cada pozo para cuantificar proteínas y se llevaron al
contador de tritio. Para la identificación morfológica, los reagregados se cultivaron
durante 48 hs, se fijaron en glutaraldehido al 2.5 %/Amortiguador de cacodilato de
sodio y se siguió la técnica de rutina para MET. Los resultados observados con
MET del efecto del antagonista de VIP con y sin suero en los reagregados
celulares mostraron cambios en la estructuración celular de los cultivos, en las
diferentes condiciones analizadas y se detectaron modificaciones en la
organización de los tipos de celulares, específicamente en las células
esteroidogénicas. Los cambios más evidentes se observaron entre los
reagregados donde se administró el antagonista con suero con respecto a los
controles. Los ensayos con timidina tritiada, mostraron diferencias en la
proliferación celular entre los controles y el antagonista de VIP. El antagonista del
VIP disminuyó la proliferación bloqueando su efecto, primordialmente en el ensayo
de los cultivos en presencia de suero, por lo que podemos concluir que el VIP es
un factor permisivo de la proliferación, (Ver tabla).
Proliferación celular de testículo de pollo de 14 días de incubación
40000
35000
30000
No de células
25000
20000
15000
10000
5000
0
Control
Control + SBF
Antagonista
Tratamiento
Antagonista + SBF