TOR.pdf

El crecimiento depende tanto de
factores genéticos como ambientales
En organismos isogénicos la disponibilidad
de nutrientes determina el crecimiento
Pregunta a la clase:
¿Cuales son las bases celulares de
la determinación del tamaño
de los organismos?
El tamaño de un individuo resulta de la cantidad
de células que lo componen y del tamaño
de cada una de esas células
Rapamicina, un macrólido producido
por Streptomyces hygroscopicus
- Aislado de una muestra de suelo en la Isla de Pascua
- Inicialmente utilizado como antimicótico
- Luego como inmunosupresor (Rapamune; Pfizer)
- Aprobado por la FDA en 1999
- Actualmente usado como droga oncológica (Pfizer)
La rapamicina se une a la kinasa
TOR (Target of Rapamycin)
Mutaciones en el gen TOR afectan el crecimiento
Eye-flp tor2l9
Sobre-expresión de un inhibidor de TOR
Clones mutantes de
un inhibidor de TOR
TOR forma parte de dos complejos distintos
¿Cuáles son los mecanismos por los que TOR controla el crecimento?
…se sabe poco
ATG13
Biogénesis de ribosomas
y síntesis de proteínas
Autofagia
Síntesis de proteínas
4E-BP hipo-fosforilado (activo) inhibe la
síntesis CAP-dependiente de proteínas
¿Cómo está regulado TOR?
…se sabe mucho más
Rheb es una GTPasa
pequeña que activa a TOR
TSC2 es la GAP (GTPase Activating Protein) de Rheb
… y un inhibidor de la vía TOR
El complejo TSC1/TSC2 es un nodo de señalización intracelular
Receptor de insulina o de IGF
P110
P85 IRS
IRS
Fosfatidil inositol 3-Kinasa
(PI3K)
PIP2
PIP3
PTEN
PDK1
PKB/AKT
El mutante chico (IRS del receptor de insulina)
Clon chico/chico
Receptor de insulina o de IGF
P110
P85 IRS
IRS
Fosfatidil inositol 3-Kinasa
(PI3K)
PIP2
PIP3
PTEN
PDK1
PKB/AKT
Crecimiento
Los mutantes PTEN son mas grandes, acumulan
mas grasas y tienen menor resistencia a stress
La vía de AKT activa a la vía TOR
¿Cómo está regulado TOR?
Las Rags son GTPasas
pequeñas muy particulares
Se determinó que en presencia de aa, TOR se asocia a membranas
¿Cuáles son estas membranas donde se encuentra
TOR, Raptor?
Co-Inmunotinciones HEKT293
mTOR y raptor colocalizan con marcadores de
lisosomas en presencia de aa
¿Dónde localizan las Rags?
Co-Inmunotinciones HEKT293
Ensayos de sobreexpresión de las Rags fusionadas a GFP no altera la localización de éstas!
Las Rags colocalizan con marcadores de lisosomas en
presencia o ausencia de aa
¿Es importante el estado GDP-GTP de las Rag para su
localización?
Co-Inmunotinciones HEKT293
Las Rags localizan en lisosomas independientemente
de su estado GDP/GTP
¿Son necesarias las Rags para que mTOR se mueva a los
lisosomas en rta a aa?
Co-Inmunotinciones – RNAi en células HEKT293
En ausencia de las Rags TORC1 no se desplaza a los
lisosomas en respuesta a aa
aa
TSC
Rheb
Regulan la
Actividad Kinasa
de TORC1
mTOR
GBL raptor
mTORC1
Rags
- Regula la localización
submembranal en rta a aa
lisosomas
Localización de mTORC1 y de las Rags depende del complejo
“Ragulator”; Rheb se encuentra en la membrana lisosomal
aa (-)
(+)
Membrana
plasmática
p14
p18 MP1
mTOR
GBL raptor
Rags
Localización
mTORC1
Actividad Kinasa
Rheb
lisosomas
¿La presencia de Rheb t TORC1 en la misma membrana es
suficiente para dispara la vía independientemente de aa?
HEK293 – Expresan Rheb mp y Raptor mp
Análisis de la Actividad Kinasa de TORC1
MODELO