EFECTOS DE LA INFLUENCIA AMBIENTAL Y GENÉTICA EN LA FISIOLOGÍA Y DESARROLLO EN DIFERENTES VARIEDADES DE MAÍZ (Sea Mays) Casasola Zamora S. (1); Tiessen Favier A. (2) (1) Facultad de Química Universidad Autónoma de Querétaro (2) Departamento de Ingeniería Genética, Laboratorio de Metabolómica y Fisiología Vegetal Centro de Investigaciones Avanzadas del IPN RESUMEN En el presente trabajo se realizó una evaluación de los efectos ambientales sobre el desarrollo y crecimiento de distintas variedades de maíz, también se estudiaron diferencias fisiológicas al someter plantas a estrés hídrico severo así como diferencias en la síntesis de azúcares solubles en variedades de maíz de distintas edades. Los resultados obtenidos revelaron diferencias significativas en el crecimiento en plantas crecidas en condiciones controladas dentro del invernadero y plantas cultivadas en condiciones ambientales variables fuera del invernadero, sin embargo no se encontraron diferencias fisiológicas. En las plantas sometidas a estrés hídrico se observaron diferencias significativas en procesos fisiológicos como la transpiración en relación con controles en condiciones normales de riego. También fue notable que la síntesis de azúcares solubles como glucosa, fructosa y sacarosa se encuentran directamente relacionadas con la edad de la planta sin importar INTRODUCCIÓN El maíz (Zea Mays) es una planta monocotiledónea de origen mesoamericano con producción anual, presenta inflorescencia monoica con inflorescencia masculina y femenina separada dentro de la misma planta. El cultivo de esta planta es de gran importancia a nivel mundial ya que forma la base de la alimentación de distintas culturas, además de ser utilizado como forraje para ganado o como materia prima para la manufactura de diversos productos de importancia industrial. Para su correcto desarrollo el maíz requiere mantener una temperatura constante de entre 25 a 30ºC, sin embargo puede llegar a soportar temperaturas mínimas de 8ºC y máximas de 38ºC. Con temperaturas altas pueden aparecer problemas serios debido a mala absorción de nutrientes minerales y agua. Las variaciones periódicas de temperatura tienen un efecto directo sobre el desarrollo vegeta, afecta el crecimiento e interviene con las floraciones (Burke y col. 1991) l. Esta variación cíclica de temperatura se conoce como termo periodo y se relaciona con el parámetro definido como TKW (termal kinetic window). Este parámetro relaciona las características bioquímicas de la planta con rangos de temperatura óptima. Cuando una planta se encuentra fuera del TKW la planta experimenta reducción de crecimiento y temperatura. Como mecanismo de defensa al estrés térmico las plantas tienen la capacidad de regular la temperatura de sus hojas por medio de la transpiración durante el día, sin embargo cuando la temperatura ambiental se encuentra debajo del TKW la planta no puede elevar su temperatura foliar. En condiciones de sequía, con un nivel de estrés hídrico considerable, la transpiración de las planta disminuye reduciendo su capacidad para mantener su temperatura óptima. Esta capacidad esta directamente relacionada con la cantidad de agua almacenada en el suelo. (Burke y col. 1991) La capacidad de resistencia a estrés por temperatura y sequía varía entre especies así como entre variedades de la misma especie. La bioquímica de las plantas, producción de metabolitos y medios de respuesta a estrés es el resultado de la expresión de los genes propios de la especie. 1 MATERIALES Y MÉTODOS Determinación de influencia de la temperatura. Se utilizaron cuatro variedades de maíz (Zea Mays), 2 variedades comerciales adaptadas a las condiciones climáticas del bajío mexicano; ASGROW OSO y ASGROW PUMA, y 2 variedades híbridas; TL08B CML 495*CML494 y LPSC7-F64--2-6-2-2-BB* CML495. Las semillas fueron sembradas en macetas con tierra estéril preparada y fueron crecidas en invernadero. Cuando las plantas alcanzaron la edad de 5 hojas se sacaron del invernadero la mitad de las plantas con el fin de no controlar las condiciones ambientales. Se midió la Tasa de Crecimiento relativo (RGR), conductancia estomal (transpiración, utilizando un porometro de hoja marca DECAGON), porcentaje de clorofila en hoja (SPAD, marca Minolta) así como la temperatura foliar (utilizando un termómetro infrarrojo) Determinación de las diferencias fisiológicas en estrés hídrico Se sembraron 45 variedades de maíz en macetas, 8 macetas por variedad y fueron crecidas en invernadero a condiciones constantes. 2 semanas antes de la floración se suspendió el riego en cuatro macetas de cada variedad dejando las otras 4 como control. Se determinó la respuesta al estrés al medir transpiración, temperatura de hoja y cambios en los tiempos de floración (ASI Antesis, Silk Interval) Diferencias en síntesis de azucares solubles Para determinar diferencias en la síntesis de azúcares solubles se tomaron plantas de diferentes genotipos y de diferentes edades. Se utilizaron variedades ASGROW OSO y PUMA de 61 días, TL08b CML495*CML494 y LPSC7-F64--2-6-2-2-BB* CML495 de 41 Días. Se les midió el largo y el peso de la caña. Se realizó también un extracto de la caña, el jugo fue pesado y después se utilizo para determinar azucares solubles utilizando el método de reacciones enzimáticas acopladas en un lector de microplacas. RESULTADOS Al comparar el crecimiento de las variedades de maíz cultivadas en condiciones de temperatura controladas dentro del invernadero con las variedades en condiciones aleatorias fuera del invernadero se observaron diferencias significativas (.1 > Valor P) en crecimiento total. Mientras que en la conductancia estomal (transpiración mM CO2 m-2s-1), tasa de crecimiento relativo y porcentaje de clorofila foliar no hubo diferencias significativas entre las variedades en las diferentes condiciones. En cuanto a las plantas sometidas a estrés hídrico y térmico, se observó que las plantas en condiciones de sequía presentaban una menor tasa de transpiración y una temperatura foliar más elevada; confirmando la dificultad de las plantas de mantener su temperatura óptima en ausencia de agua. Figura 2 Se midió la transpiración en el día -5 al inicio del estrés, sin observar diferencias significativas entre las plantas usadas; esta medida fue utilizada como control. Al realizar el seguimiento de las mediciones de transpiración fue posible apreciar una disminución significativa en las plantas sometidas a estrés. Figura 3. La inflorescencia masculina se presento en fechas uniformes dentro de las plantas en tratamiento mientras que la inflorescencia femenina se retrazo considerablemente. 2 Figura 1 A)Gráfica de crecimiento total : Desde el día cero de tratamiento al día 26. B)Gráfica de la Tasa de Crecimiento Relativo C)Gráfica de conductancia estomal D)Gráfica del porcentaje de clorofila foliar. Las mediciones de conductancia estomal y porcentaje de clorofila fueron tomadas a media hoja en la cuarta hoja de la punta hacia la raíz. Para el cálculo de la altura, se tomo como punto más alto la altura de la última hoja en reposo. Se utilizó el error estándar para determinar las barras de error. Figura 2 A) Gráfica de los promedios de la temperatura en la superficie de la hoja B) Foto térmica de 2 genotipos bajo condiciones normales y de estrés hídrico. La planta de la derecha se encuentra estresada por sequía. Se puede observar que la temperatura foliar de la planta es mayor que la temperatura de la planta de la izquierda. La coloración muestra la temperatura externa de la planta. Amarillo = 37ºC, Cyan= 31ºC. Comparación Sequía vs Riego FIGURA 3 La serie 1 representa el promedio de conductancia estomal de 140.00 las plantas en condiciones normales, mientras que la serie 2 las variaciones observadas entre las plantas con riego en los diferentes días fueron producidas por el horario en el que se realizaron las mediciones. para disminuir errores sistemáticos se realizaron mediciones de manera alternada. En el gráfico se aprecian diferencias significativas entre los tratamientos de estrés y el control. Las barras de error corresponden a los valores del error estándar. Serie1 120.00 Tranpiración mM COS / m2s representa las plantas sometidas a estrés. Serie2 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 Riego día -5 Riego día 0 Riego Día 3 Riego día 7 Día de tratamiento 3 Al analizar el contenido de azucares solubles en cuatro genotipos diferentes de maíz de diferentes edades se apreció que la síntesis de estos azucares es independiente al genotipo o a la edad. Ya que no se observaron diferencias significativas entre los genotipos. FIGURA 4 FIGURA 4 SUCROSE Muestra las gráficas del contenido de azucares solubles. La primera gráfica muestra 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 el contenido de sacarosa, la segunda de fructosa y la tercera gráfica el contenido de glucosa. No se observaron diferencias significativas entre las diferentes variedades de maíz TL 08B 47 días TL 08B 47 días TL 08B 47 días TL 08B 47 días TL 08B 47 días TL 08B 47 días CML 495*CML494 47 días CML 495*CML494 47 días CML 495*CML494 47 días CML 495*CML494 47 días Puma 61 Días Puma 61 Días OSO 61 días OSO 61 días analizadas. FRUCTOSE CML 495*CML494 47 días Puma 61 Días Puma 61 Días OSO 61 días OSO 61 días 80 70 60 50 40 30 20 10 0 GLUCOSE CML 495*CML494 47 días Puma 61 Días Puma 61 Días OSO 61 días OSO 61 días 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 CONCLUSIONES El ambiente ejerce una gran influencia en el desarrollo vegetal. Cuando los cultivos se mantienen dentro del rango de su temperatura óptima presentan una tasa de crecimiento mayor. Sin embargo no hay diferencias fisiológicas y bioquímicas considerables, el proceso de transpiración y contenido de clorofila no se ven afectados con niveles de estrés moderado, producido por fluctuaciones temporales de temperatura. En casos de estrés por agua severo, la bioquímica de la planta se modifica para lograr un uso más eficiente del agua, la transpiración se reduce significativamente y esto provoca un incremento en la temperatura e4xterna de la planta. Esto puede provocar daños severos a la planta que pueden afectar el rendimiento del cultivo. La síntesis de metabolitos como azucares solubles es dependiente del propio genotipo de la planta. Sería conveniente realizar un estudio mas a fondo en donde se midan los niveles de producción de estos metabolitos en plantas sometidas a distintos tipos de estrés para así determinar la influencia que tiene el ambiente en su síntesis. Conociendo los rangos óptimos de un cultivo específico se puede lograr un mayor rendimiento en condiciones controladas y permite entender la fisiología de la especie para que en un futuro se pueda lograr un mejoramiento genético de la especie que genere un mayor rendimiento en campo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS JJ (US Agricultural department) Variation among species in the temperature dependence of the reappearance of variable fluorescence following illumination. Plant Physiology journal 93: 652-656 1Burke 2 J. Flexas (Universidad de Barcelona) Effects of Water Stress on Respiration in Soybean Leaves1 Plant Physiology Journal vol. 139 2005 3 M.R. Kaufman (US Department of agriculture) Evaluation of Season, Temperature, and Water Stress Effects on Stomata Using a Leaf Conductance Model Plant Physiology journal vol. 69 1982 4 J.J. Burke (US department of agriculture) Influence of Water and Temperature Stress on the Temperature Dependence of the Reappearance of Variable Fluorescence following Illumination Plant Physiology Journal vol. 97 1991 4