• GENERALIDADES 1.1 QUÉ ES EL CONTROL BIOLÓGICO Es la eliminación de insectos, plantas o animales que se comportan como plagas, mediante organismos vivos considerados sus enemigos bajo condiciones naturales, mismos que el hombre cultiva y pone en contacto con las plagas. 1.2 QUÉ ES UNA PLAGA Con el término plaga se señala la existencia de organismos de muchos tipos, los hay vegetales y animales, quienes se caracterizan por atacar y destruir a otros organismos de utilidad para el hombre. Conforme se mejora genéticamente para la productividad a estos últimos, su protección contra las diferentes plagas disminuye, viéndose fácilmente atacados y destruidos. 1.3 QUÉ SE ENTIENDE POR ENEMIGO NATURAL Este organismo es similar en su origen a los que producen las plagas, sin embargo, los enemigos naturales no atacan a los organismos de utilidad para el hombre sino que atacan y matan a los organismos que producen las plagas. Bajo condiciones naturales, el número de enemigos naturales no es tan alto como el de los organismos plaga, por lo que el hombre los cultiva y posteriormente confronta con los organismos dañinos. 1.4 CÓMO SE ORIGINÓ EL CONTROL BIOLÓGICO Desde que el hombre comenzó a cultivar la tierra para obtener sus alimentos, involuntariamente dio lugar a la proliferación de insectos y plantas que se transformaron en plagas, destruyendo todo lo que se cultivara. En el siglo XVII, se concibió la idea de atacar a los organismos perjudiciales mediante organismos que actuaran como enemigos de ellos bajo condiciones naturales. 1.5 QUÉ FACTORES PROPICIAN EL ESTABLECIMIENTO DE PLAGAS EN EL AGOSTADERO 1 Son muchas las causas, pero una de las más importantes es el uso de químicos. Estos productos provocan el desequilibrio ecológico al eliminar junto con las plagas, a los organismos benéficos, que bajo condiciones naturales son los responsables del control de las plagas. La utilización frecuente de plaguicidas químicos, selecciona individuos resistentes a esos productos, y la resistencia es transmitida a las generaciones posteriores; otra causa importante en la proliferación de poblaciones plaga, es la utilización o introducción de una sola especie de forraje o zacate (monocultivo). 1.6 QUÉ ORGANISMOS SE UTILIZAN EN EL CONTROL BIOLÓGICO Entre los organismos que pueden utilizarse en el control de diversas plagas, tales como insectos, plantas, vertebrados, etc., se tiene a: • Insectos predatores. Animal artropodo, de respiración traqueal, cabeza provista de antenas y tres pares de patas. • Nemátodos parásitos. Dicese de los gusanos nematelmintos provistos de tubo digestivo, casi todos se alimentan o crece con sustancias producidas por otro a quien vive asido. • Vertebrados predatores. Aplicase a los animales que tienen vertebras. Tipo de reino animal que forman estos animales y comprende los peces, los reptiles, los batracios, las aves y los mamíferos. • Protozoarios. Dicese de los animales de cuerpos unicelular y de forma rudimentaria, como los ciliados o infusorios, los flagelados, los rizopodos, el hematozoario del paludismo. • Hongos parásitos. Cualquier planta talofita, sin clorofila que vive como saprofita, parasita o en simbiosis. 1.6.6 Bacterias. Microorganismo vegatal unicelular, de forma alargada o esferica. • Virus. Microbio invisible con el microscopico ordinario, responsable de las 2 enfermedades contagiosas. 1.7 CUÁLES SON LOS PRINCIPALES OBJETIVOS DEL CONTROL BIOLÓGICO El control biológico persigue objetivos definidos como son combatir plagas sin provocar contaminación ambiental, disminuir el uso de productos químicos que generen acumulación de residuos tóxicos, evitar resistencia en organismos y proteger a los organismos benéficos o enemigos naturales de las plagas. Insecto parásito; larva de una avispita Apanteles fulvipes, saliendo del cuerpo del hospedero aun vivo, pero sentenciado a muerte. (Un gusano medidor de la palomilla gitana), después de haberse alimentado del interior de su cuerpo durante varias semanas (De U.S.D.A., Bur. Bul.91). 1.8 VENTAJAS. Permanece bastante tiempo. Fácil manejo. Es muy seguro pues no produce toxicidad, No contamina el ambiente. Es muy económico comparado con el Control químico. 1.9 CÓMO SE IMPLEMENTA Introducción de especies exóticas. Conservación de especies nativas. Cría e incremento de los parasitoides para Su posterior liberación. • QUÉ PLAGAS DEL AGOSTADERO SONORENSE PUEDEN CONTROLARSE BIOLÓGICAMENTE En el agostadero de Sonora, es factible encontrar plagas de diversos tipos, que en un 3 momento dado pueden ser controladas biológicamente, tal es el caso de la especie arbustiva llamada rama blanca, y el insecto conocido como mosca pinta o salivazo de los pastos. 1.11 EXISTEN RESULTADOS DE CONTROL BIOLÓGICO SOBRE INSECTOS En algunos países de los antes mencionados, ya hay resultados que indican la efectividad del control biológico sobre insectos, por ejemplo: En Brasil, se ha utilizado una especie de hongo que ataca a plagas de la caña de azúcar, obteniendo mortalidades de hasta 66% e inclusive, existe ya una preparación comercial que es utilizada en las prácticas agrícolas. En nuestro país, en el Estado de Colima particularmente, se han realizado pruebas de control biológico usando diversas especies de hongos contra el gusano cogollero, logrando resultados muy alentadores. • HAY RESULTADOS EN CUANTO AL CONTROL BIOLÓGICO CON CABRAS SOBRE ESPECIES ARBUSTIVAS INDESEABLES En el CIPES, se llevó a cabo un experimento utilizando ganado caprino para el control de la planta conocida como rama blanca, hierba ceniza o hierba del vaso, especie del tipo indeseable en los agostaderos sonorenses, práctica con la cual se obtuvieron resultados de hasta un 70% de control sobre la misma. El escarabajo europeo de tierra, Colosoma aycophanta. Adulto, arriba alimentándose de una pupa de la palomilla gitana, y la larva abajo, alimentándose de un gusano medidor de la palomilla gitana. (De Mass. State Forester). Mosca Sirfida. A, adulto de Didea fasciata; x, la falsa vena en el ala, que caracteriza a las moscas de esta familia. (De metcalf, Maine Agr.Exp.Sta.Bul.253); C.larva alimentándose de un pulgón (Tomado de un dibujo de Jones, Colo. Agr. Exp.Sta.); D. purparium de Didea fasciata (De metcalf, from Ohio Naturalist). Una avispa esfécida, Ammophila sp., introduciendo en su galería un gusano medidor paralizado para que sirva como alimento de su descendencia. Cuando el nido es completado y los huevecillos puestos, la avispa toma una pequeña piedrecita en sus mandíbulas y 4 empaca la tierra, con la cual cierra su galería. (De Kellogg, "American Insects"). Una avista, Lysiphlebus testaceipes, depositando sus huevecillos en el cuerpo del pulgón de la alfalfa. Muy aumentados. (De Essig. "Insects of Western North America"). En el CIPES, se llevó a cabo un experimento utilizando ganado caprino para el control de la planta conocida como rama blanca, hierba ceniza o hierba del vaso, especie del tipo indeseable en los agostaderos sonorenses, práctica con la cual se obtuvieron resultados de hasta un 70% de control sobre la misma. • LAS CABRAS: HERRAMIENTA EFECTIVA PARA EL CONTROL DE PLANTAS INDESEABLES Cuando se utiliza el término "plantas indeseables" generalmente se piensa que se hace referencia únicamente a aquellas que no consume el ganado o a las que por su toxicidad provocan problemas y hasta la muerte del animal que las consume. Sin embargo, en esta categoría también se incluyen algunas especies que tienen valor forrajero pero que son poco consumidas por los bovinos, pero que al volverse tan abundantes limitan la producción de mejores especies asociadas al competir por aire, agua, luz y nutrientes, lo que resulta también en una menor calidad del forraje disponible. Foto, la utilización de cabras en las praderas de zacate buffel, puede solucionar los problemas de plantas indeseables, permitiendo recuperar la inversión realizada. Este problema afecta tanto a los agostaderos nativos como a las praderas establecidas de zacate buffel, por lo que se han venido realizado una serie de prácticas para tratar de solucionarlo. Entre las más comúnmente usadas podemos mencionar la aplicación de métodos mecánicos como el desmonte, el chapeo, etc., píricos, o uso del fuego en quemas controladas, y químicas, con el empleo de diferentes tipos de herbicidas, diesel, etc. Foto, los hábitos alimenticios de las cabras, diferentes a los del ganado bovino, les permiten consumir plantas que éste no incluye en su dieta. 5 Desafortunadamente la mayoría de estas prácticas son costosas y no están al alcance de muchos productores puesto que su aplicación requiere de equipo especial y ciertas medidas preventivas. Además algunos de estos métodos eliminan el problema sólo en forma temporal, y a la vuelta de algunos años, las plantas indeseables generalmente vuelven a brotar y se multiplican hasta poblar los predios, sobre todo aquellos que siguen soportando una carga animal más alta que la recomendada. Una opción con potencial para solucionar estos problemas, que permita recuperar la inversión realizada y en algunos casos una ganancia extra, la podría propiciar el uso de las cabras, que aunque no son muy comunes en esta región, de todos es sabido que sus hábitos alimenticios son diferentes a los del ganado bovino, consumiendo plantas que éste no incluye en su dieta. En muchas partes del mundo, con diferentes condiciones climáticas, topográficas y distintos tipos de vegetación se han realizado estudios, donde se han observado que las cabras poseen una gran habilidad para cambiar de dieta y utilizan más eficientemente los pastizales con alta población de arbustos tales como gatuno, vinorama, chírahui, gobernadora, chiricua, etc., sin dañar a las especies forrajeras. También tienen la ventaja de no ser una diseminadora natural de semillas porque mastica muy bien y tiene una gran capacidad para digerir sus alimentos, de tal manera que las semillas que la cabra consume, pierden su capacidad para germinar. En el PATROCIPES se han llevado a cabo estudios tendientes a determinar el efecto del ramoneo por las cabras sobre los arbustos tomando en cuenta la estación del año, que tiene un efecto directo sobre la vegetación y la disponibilidad de forraje, y por lo tanto, afectan la selección y consumo por parte de los animales. En estos estudios se observó que aunque las cabras consumen arbustos durante todo el año, la utilización en los meses de invierno es más intensa debido a la falta de zacates verdes y suculentos. 6 Esto influye en la sobrevivencia de los arbustos al eliminárseles una gran cantidad de hojas y corteza de los tallos. En una pradera de zacate buffel con una alta población de rama blanca (Cuadro 1) se realizó un estudio durante tres años consecutivos, pastoreando con cabras adultas cuatro potreros de una hectárea cada uno en forma rotacional−estacional de tal manera que cada uno de éstos fue utilizado siempre en la misma estación. Las cabras pueden ser utilizadas en combinación con el ganado bovino para aprovechar la vegetación que no es consumida por éste. El número de cabras por hectárea que en promedio fue de 12, establecido de acuerdo a la disponibilidad de forraje determinada al inicio del período y al tiempo de pastoreo, que era de 90 días en cada potrero. CUADRO 1. Densidad de la rama blanca por potrero pastoreado en cada estación durante los tres años de estudio. AÑO DE PASTOREO (Plantas por hectárea) 1987 1988 1989 PRIMAVERA VERANO OTOÑO INVIERNO 2653 1980 1367 1343 1313 956 4306 2172 2192 1389 586 106 Los resultados obtenidos muestran una fuerte utilización de la rama blanca durante todo el año, siendo la más alta en el potrero pastoreado durante el invierno, donde fue de 67% para tallos y más del 80% de las hojas y la mortalidad de las plantas fue arriba del 90% para el tercer año, sin efectos negativos para la población de zacates. El pastoreo con cabras también puede ser usado en combinación con otras prácticas de mejoramiento, para hacer más efectivo el control, pues se ha visto que las cabras pueden mantenerse después de la aplicación de estos métodos, sin afectar negativamente la 7 condición del pastizal. También pueden ser utilizadas en combinación con el ganado bovino para aprovechar la vegetación que no es usada por éste, haciendo más eficiente el uso de este recurso. En el estado de Sonora la explotación de la cabra es muy reducida debido quizás a que en esta región existe poco mercado para los productos que de ella se pueden obtener como carne, leche, pieles, pelo y abono orgánico de excelente calidad, que en algunos estados de la República Mexicana y en otros países son muy apreciados. Por otra parte, se le ha dado más énfasis a las desventajas que presenta el uso de cabras que a los beneficios de su explotación. Sin embargo, existen reportes de que en algunas otras partes, como en Texas, E.U.A., la adición de cabras a los sistemas tradicionales de pastoreo ha mejorado substancialmente la utilización total del forraje y ha diversificado la fuente de ingresos para los rancheros. Lógicamente, el uso de las cabras debe hacerse tomando en consideración la disponibilidad de forraje, puesto que aun cuando prefieren consumir arbustos también consumen zacates, sobre todo cuando están verdes suculentos, y un número excesivo de animales puede ocasionar más problemas que los que pudiera resolver. Y, que por su tamaño, las cabras son fácil presa de depredadores, por lo que se debe contar con un pastor o con perros para su cuidado. 2. METODOLOGÍA PARA OBTENER CULTIVOS DE CONTROL El control biológico se presenta como una alternativa relevante en el manejo de insectos plagas en el mundo. En la actualidad existen más de 400 especies de hongos que atacan insectos y ácaros, lo cual indica un gran potencial para el uso de estos organismos como insecticidas biológicos. Los hongos son marcadamente superiores a otros microorganismos puesto que generalmente no son específicos en su acción sobre insectos, razón que les confiere importancia en el control de un amplio rango de insectos plagas. 8 Beauveria bassiana es uno de los entomopatógenos más estudiados. En China se produce en comunas para el control del perforador europeo del maíz (Ostrinia nubilalis Hubner), saltamontes verde (Turpilia opaca Brunn.) y la oruga de los pinos (Lymanthria dispar L.). En la Unión Soviética se produce con el nombre de Boverin como agente biológico de control de la polilla del manzano (Cydia pomonella L.). Actualmente Cenicafé produce masivamente el hongo B. bassiana para el control de la broca del café, Hypothenemuis hampei, a partir de un cultivo multiespórico mediante pases sucesivos en arroz, utilizado como sustrato. En este medio artificial se ha registrado pérdida de la patogenicidad del hongo luego de cultivarse por tres o más generaciones, por lo cual, se recomienda reactivar la patogenicidad mediante pases o procesos de reinfección en el insecto Un aislamiento monoespórico es aquel que se obtiene a partir de una espora, con un contenido genómico único, que corresponde a un clon genéticamente uniforme de una célula individual. Contrario sucede con un cultivo multiespórico, el cual presenta una continua variación genética del ADN, debido a que cada espora suministra información relacionada con la producción de esporas, toxinas, pigmentación, producción de enzimas y patogenicidad, entre otras, lo cual genera constantemente una recombinación genómica. En los hongos imperfectos se presenta la heterocariosis, fenómeno en el cual ocurre la unión de núcleos de diferentes hifas sin que ocurra fusión de los mismos, es decir, la reproducción que se efectúa es asexual. Este fenómeno juega un papel importante en el aumento de la variabilidad genética, la cual puede ser reducida mediante la obtención de cultivos monoespóricos. Hall, afirma que con el uso de los cultivos monoespóricos del hongo Verticilliium lecanni se deberían minimizar los riesgos de variación por la naturaleza mononuclear de estas conidias. Sin embargo, los monocultivos evaluados en este estudio experimentaron cambios relevantes para las variables patogenicidad, morfología y tasa de crecimiento radial. 9 Samsinakova y Kalalova evaluaron la virulencia del hongo B. bassiana sobre larvas de Galleria melonela. Estos estudios mostraron que algunos aislamientos de este hongo pueden sufrir pérdida de virulencia a pesar de una estricta observación en todos los procedimientos estandarizados de cultivo, aspersión y almacenamiento. En general, se encontró que el uso de cepas no uniformes o multiespóricas de este entomopatógeno, fue la causa de la atenuación en su virulencia. Según Tuite, un aislamiento inicial de células individuales asegura pureza en las especies y es probablemente con la mayoría de hongos y bacterias, la manera de producir pureza genética. Sin embargo, existen hongos que producen esporas heterocarióticas lo cual no garantiza su pureza genética; tampoco se asegura ésta en las siguientes generaciones, puesto que pueden presentarse mutaciones. French y Hebert ecomiendan utilizar técnicas de purificación genética mediante cultivos de puntas de hifa o monoespóricos, aunque esto es relativo ya que la célula puede ser multinucleada. 2.1 TÉCNICAS PARA OBTENER CULTIVOS MONOESPÓRICOS Dentro de las metodologías para obtener monocultivos se han propuesto varios procedimientos: Kienholz, propuso un método en el cual se obtiene una suspensión de 2x102 esporas/ml y no se utilizan equipos especializados. Para ello, se sumerge el asa y se deposita este inóculo en cada uno de diez círculos demarcados previamente en la cara inferior de una caja de petri con medio de agar. Una vez ubicada la espora germinada en el campo microscópico, se procede a transferirla a un medio nutritivo apropiado para su crecimiento. Instituto Micológico Internacional (IMI−CAB) de Inglaterra, propone la utilización de unas líneas−guía en forma de "W" o "E" por el reverso de las cajas de petri con medio de agar, con el fin de facilitar la lectura en el microscopio. Sobre estas estrías se dispersa el inóculo y luego de ser ubicada la espora germinada, con la ayuda del microscopio, se corta el bloque de agar y se lleva a un medio nutritivo. 10 La Rue fue uno de los pioneros en describir un método para aislar esporas, el cual consistía en adaptar un cilindro en forma fija al objetivo del microscopio (11, 13); sin embargo presentaba el inconveniente de tener que remover contínuamente el cilindro para su esterilización. Messner propuso una metodología similar, utilizando una resina sintética para adaptar un cilindro cortante al objetivo del microscopio. Con este dispositivo se obtuvieron monoesporas de hongos hyphomycetos, al igual que ascosporas, basidiosporas, células de levaduras y de algas. Keyworth mejoró este sistema de tal manera que el instrumento pudiera ser flameado sin necesidad de retirarlo del objetivo. French y Hebert, y Gorgue estudiando hongos fitopatógenos y otros causantes de micosis superficiales, respectivamente, encontraron que al adaptar al objetivo de menor aumento del microscopio un pequeño cono de vidrio cortante en forma de sacabocado, se podían obtener monoesporas de los géneros Trichophyton sp., Fusarium sp. y Rhizoctonia sp. Una vez ubicada la espora germinada en el campo microscópico se procedía al corte del bloque de agar con la ayuda del dispositivo y se transfería a un medio nutritivo. Gorgue recomendó el medio Corn Meal, para conseguir una germinación rápida de las esporas aisladas y la observación fácil de éstas en el microscopio. Constantinescu presenta el resultado de numerosos intentos por construir un equipo donde el diámetro del cilindro cortador fuera inferior a 1 mm, y que éste a su vez fuera estable al adaptarse al objetivo del microscopio, con lo cual no se hiciera necesario reenfocar cada vez que se esterilizara; así mismo, que pudiera ser retirado del objetivo con el fin de no interferir en los trabajos de rutina. Teniendo en cuenta la combinación de estas características en el equipo, se logró aislar ascosporas y conidias con un diámetro de 4 ðm. Mac Leod obtuvo cultivos monoespóricos de Beauveria sp y otros géneros de hongos entomopatógenos a partir de una concentración de 100 a 200 esporas /ml; para tal propósito, depositó 1ml de esta suspensión en un medio nutritivo y luego de 16 a20 horas procedió a aislar la espora germinada, según la metodología empleada por Lambert. 11 La dilución, es uno de los métodos propuestos para obtener monocultivos, que consiste en desprender las esporas del cultivo original con la ayuda de un asa y un estereoscopio. Este inóculo se diluye de gota en gota y a partir de aquella que contenga una cantidad mediana de espora. También se obtuvieron cultivos monoespóricos de hongos fitopatógenos a partir de una suspensión con una concentración de 2,5x103 esporas/ml. De esta forma, una vez ubicada la espora con el objetivo de menor aumento, se cerró el diafragma del condensador, quedando concentrado un haz de luz y se bajó el objetivo para cortar el bloque de agar con la monoconidia. Hanna diseñó una aguja que se ajusta en forma mecánica a la plataforma del microscopio, de modo que puede desplazarse fácilmente para sujetar la espora aislada. Esta investigación tuvo como propósito desarrollar una metodología para aislar esporas individuales del hongo B. bassiana en forma rutinaria y confiable, con el fin de llevar a cabo estudios de caracterización de éstas en la búsqueda de cepas mejoradas utilizables para el control biológico de la broca del café. • MATERIALES Y MÉTODOS • Origen del hongo. Los aislamientos monoespóricos fueron obtenidos a partir de un aislamiento multiespórico Bb 9205 de B. bassiana previamente reactivado en broca, procedente del hospedante Diatraea saccharalis Fabricius (Lepidoptera:Pyralidae), cultivado en SDA acidificado (1 ml de ácido láctico al 44% por cada 100 ml de medio), con una edad del cultivo no superior a 30 días. • Procedimiento. Una vez esporulado el cultivo original, lo cual se logró entre los 15− 30 días siguientes a la siembra, en el medio SDA acidificado, a una temperatura promedio de 25ðC, se procedió a obtener una suspensión de esporas con una concentración de 3x105 esporas/ml(Figura1). 12 Figura 1. Metodología para obtener cultivos monoespóricos Previamente, con un marcador se hicieron 6 estrías por el reverso de las cajas de petri esterilizadas, con el fin de facilitar la lectura al microscopio. Luego de servir una fina capa del medio de cultivo SDA acidificado en las cajas de petri, se tomaron 3 ðl de la suspensión de esporas (3x105 esporas/ml) y se depositaron en el extremo superior de la estría. Con un asa en argolla y sin cambiar el lado del asa que se venía utilizando, se esparció el inóculo. La incubación se hizo a temperatura ambiente durante 24 horas y se observó la germinación de esporas al microscopio con el objetivo de 10X. Con un bisturí #3 y una cuchilla #10, debidamente desinfestados en alcohol y flameados, se cortaron y colocaron las estrías sobre un portaobjeto estéril, teniendo en cuenta el orden en que fueron cortadas. Se observaron al microscopio y una vez se ubicó la espora germinada fue demarcada el área con el objetivo de 40X y se cortó el bloque de agar con el bisturí. Antes de ser transferida al medio SDA acidificado, se observó de nuevo el bloque de agar para asegurar el aislamiento de una sola espora y se llevó a incubación a 25ðC en luz constante (Figura 2). Todo este proceso se realizó asépticamente, en cámara de flujo laminar. 13 Figura 2. Bloque de agar con una conidia del hongo Beauveria bassiana • RESULTADOS Y DISCUSIÓN No existe una metodología general para el aislamiento de conidias individuales. Es así como hay técnicas que emplean equipos especializados (3, 6, 8, 11, 13, 15) o micro− manipuladores (5, 10,15, 18) adaptados al objetivo del microscopio, que requieren cierta destreza del usuario para su manipulación adecuada e incluyen un costo adicional al proceso de aislamiento de esporas en forma individual. La metodología sugerida en este estudio no incluye la utilización de equipos adicionales sino el empleo del objetivo de 40X, el cual demarca el área exacta en la cual debe hacerse el corte del bloque de agar con el bisturí. Una vez se realiza el acercamiento del objetivo al medio de cultivo y la remoción del bloque de agar, el objetivo debe limpiarse para evitar contaminación del lente; sin embargo, cabe anotar que en este proceso la parte metálica externa del lente es la que se pone en contacto con la superficie del agar. En relación con el medio de cultivo empleado para el crecimiento de la espora aislada, Gorgue y French y Hebert, recomiendan los medios de cultivo Corn meal y Agar agua para facilitar la germinación y observación de las esporas en el microscopio. En el presente estudio no se obtuvieron buenos resultados con los medios mencionados puesto que presentan opacidad que interfiere con la observación microscópica de las esporas. El medio enriquecido SDA empleado en este trabajo, facilitó la identificación rápida y el 14 aislamiento posterior de la espora debido a su transparencia. La concentración de esporas de las suspensiones a partir de las cuales se obtiene la espora aislada, depende del género y de las estructuras del microorganismo en estudio, es así como Kienholz recomienda una suspensión con una concentración de 2 x102 esporas/ml para la obtención de esporas de Ascomycetos. French y Hebert obtuvieron cultivos monoespóricos de hongos fitopatógenos a partir de suspensiones con una concentración de 2 x103 esporas/ml. En el presente trabajo, se llevó a cabo el aislamiento de esporas individuales del hongo B. bassiana partiendo de una suspensión con una concentración 3x105 esporas/ml. MacLeod obtuvo monoesporas de Beauveria sp luego de 16−20 horas de siembra. French y Hebert afirman que la ubicación de la espora puede facilitarse si se deja transcurrir el tiempo necesario para que se desarrolle ligeramente el tubo germinativo o una ramificación micelial mayor, siempre y cuando se puedan distinguir todos sus detalles para asegurarse que la colonia se origina a partir de una sola célula. En esta técnica propuesta se obtuvieron buenos resultados con tiempos de germinación de 24horas. En este estudio se presenta una metodología de obtención de cultivos monoespóricos, la cual permite la recuperación de un gran número de esporas individuales de manera confiable y rutinaria. Con esta técnica se evidencia en forma macroscópica, la presencia de una o más esporas en el bloque de agar (Figura 3). 15 Figura 3. Bloque de agar con dos conidias del hongo Beauveria bassiana Dicha metodología permitió la obtención de cultivos monoespóricos del aislamiento Bb 9205 de B. bassiana, lo cual constituye una herramienta importante para estudios de biología y caracterización del hongo, debido a que se parte de una información genómica individual , lo cual puede originar una menor variación genética. Con la técnica descrita para la obtención de esporas individuales del hongo B. bassiana, es posible realizar estudios de variación genética a nivel del ADN, así mismo, evaluar la producción de enzimas y su relación con la virulencia a la broca del café y el comportamiento germinativo y patogénico del hongo. De otro lado, con la obtención de esporas individuales se pueden realizar estudios acerca de la biología de otros hongos entomopatógenos tales como Metarhizium anisopliae, Paecilomyces lilacinus, Fusarium sp., Hirsutela sp., Nomuraea sp., entre otros. De igual manera, hongos antagonistas de utilidad en control biológico de fitopatógenos como Trichoderma sp., Verticillium lecanii y hongos patógenos al café y otros cultivos asociados a éste, tales como Colletotrichum sp., Ceratocystis fimbriata y Phytophtora sp. 2.4 MÉTODOS DE CONTROL DE PLANTAS INDESEABLES EN PRADERAS El sobrepastoreo al que han sido sometidos los pastizales en los últimos años ha traído como consecuencia una baja en el potencial forrajero de estos; en donde la vegetación, con el paso del tiempo, tiende a disminuir el porcentaje de las plantas forrajeras o deseables, concordando con el aumento considerable de la población de las plantas indeseables. El Estado de Sonora no esta exento de este problema, ya que la invasión de plantas indeseables por el sobrepastoreo es notoria, tanto en praderas establecidas de zacate buffel por arbustos, como la vegetación nativa por plantas tóxicas. • Arbustos indeseables en praderas. En Sonora existen actualmente cerca de 300 mil hectáreas resembradas con zacate buffel, siendo susceptible a establecerse hasta 5 millones de hectáreas. Esta gramínea es de gran relevancia para la ganadería sonorense, ya que se 16 necesitan de 4 a 6 hectáreas por unidad animal (Ha/U.A.) en praderas bien manejadas mientras que en la vegetación nativa es necesario de 30−40´Ha/U.A. Sin embargo una pradera sobrepastoreada o mal manejada tiende a presentar problemas de invasión de arbustos, los cuales por lo regular proporcionan menor cantidad de forraje que el buffel, además de reducir la densidad de esta gramínea debido a la competencia por espacio, luz, agua y nutrientes del suelo. Se estima que alrededor del 60% de las praderas establecidas con dicho zacate están invadidas por arbustos indeseables. en el cuadro 1, se muestran algunos de los principales arbustos invasores que se presentan en el Estado de Sonora. Cuadro 2. Plantas invasoras en praderas de buffel. NOMBRE CIENTIFICO Encelia farinosa Acacia oligochanta Prosopis juliflora Baccharis sarothroides Acacia farnesiana Acacia occidentalis NOMBRE COMUN Rama blanca Chírahui Mezquite Romerillo Vinorama Huizache Para la rehabilitación de estos pastizales invadidos por arbustos es necesario la aplicación de algún método de control, los cuales pueden ser los siguientes: • Control pírico. Este método esta relacionado con el uso de quemas prescritos para el control de arbustos indeseables. • Control biológico. Control que es ejercido por organismos tales como cabras, insectos, hongos, bacterias, etc. • Control integrado. Dicho control se refiere a la utilización de dos o más de los métodos antes mencionados. El uso adecuado de cualquier método de control va a depender de las condiciones topográficas, edáficas, tipo de plantas a controlar o, en un momento dado, las posibilidades del propietario en cuanto a maquinaria y equipo. 17 2.5 APLICACIÓN DE QUEMAS. La aplicación del fuego se ha acentuado en los últimos años en el Estado, ya sea para mantenimiento de las praderas de buffel o bien para control de arbustos o insectos. La quema es un método muy efectivo para el control de arbustos, además de mejorar la pradera de buffel aumentando la calidad nutritiva de este, eliminando material viejo y duro el cual no es consumido por el ganado e incrementando la cantidad de forraje permitiendo una carga adicional de 30 a 100%. Para la realización de esta práctica en el control de arbustos es necesario que exista zacate seco disponible que sirva como combustible, con el fin de crear un fuego mas intenso, ya que los árboles y arbustos, en sí, son malos combustibles; esto es, entre mayor cantidad de combustible exista en la pradera, es mayor el porcentaje de mortandad de arbustos. Se ha observado que en praderas con 2,300 kg de combustible por hectárea, se ha logrado controlar en un 55% la rama blanca y en un 31% de mezquite; por otra parte, con 4,500 kg de combustible por hectárea se ha controlado en un 100% la rama blanca y en el caso del chírahui un 72%. La quema ha dado buenos resultados en el control de pequeños arbustos, siendo un poco menos efectiva en el control de árboles con tronco grueso o de gran altura, ya que en estos casos es necesario aplicar dos o tres quemas consecutivas. Hay que tener atención especial a las praderas donde se haya aplicado fuego; ya que es recomendable permitir que el zacate alcance su tamaño normal antes de iniciar el pastoreo, o solamente utilizar un 30 ó 40% de su producción, es decir en pastoreo ligero; esto con el fin de que al siguiente año, si las condiciones son óptimas, la pradera se reestablezca completamente. 2.6 PLANTAS TÓXICAS EN VEGETACIÓN NATIVA. Las plantas tóxicas constituyen uno de los principales problemas en los agostaderos ya que además de reducir la calidad de forraje puede causar pérdidas en la producción de carne en 18 aquellos animales que hayan consumido este tipo de plantas, provocándoles una disminución de peso, abortos en animales cargados o bien hasta la muerte en aquellos animales altamente intoxicados. Se le considera planta tóxica a aquella que contenga una sustancia química específica (principio tóxico) que al ser consumido por los animales cause cambios fisiológicos y bioquímicos a los mas susceptibles. Este tipo de plantas por lo regular se le encuentra en mayor densidad en áreas sobrepastoreadas, lugares con algún disturbio como terracerías, aguajes o bien en resiembras sin éxito; sin embargo, en pastizales con buena condición, estas plantas, aunque en menor densidad, también están presentes formando parte de los ecosistemas. En los agostaderos donde se presentan plantas tóxicas, en la mayoría de los casos, los ganaderos han aprendido a convivir con ellas; para esto es necesario que el ganadero conozca algo sobre este tipo de plantas como: cuales son las principales plantas tóxicas, cuando aparecen estas, en que lugares se encuentra y cual es su principio tóxico. En la tabla 1 se enlistan algunas de las principales plantas tóxicas, que se presentan después de las lluvias de verano o bien están presentes durante todo el año debido a que son perennes. Tabla 1. Plantas tóxicas perennes y anuales que se presentan de las lluvias de verano. NOMBRE CIENTIFICO Amaranthus spp. Chenopodium spp. Salsola kali Astragalus spp. Lupinus spp. Crotalaria pumila Eritrina flabelliformis Datura spp. Nicotiana spp. NOMBRE COMUN Quelites Choales Chamizo volador Hierba loca Lupinos Garbancillo Chilicote Toloaches Tabaquillo,Juan Loco SUSTANCIA TOXICA Nitratos Nitratos Nitratos y oxalatos Alcaloides Alcaloides Alcaloides Alcaloides Alcaloides Alcaloides DURACION Anual Anual Anual Anual y Perenne Anual y Perenne Anual Perenne Anual y Perenne Anual y Perenne De las plantas antes mencionadas existen algunas que son fuertemente tóxicas, tal es el caso de Nicotiana glauca (JUAN LOCO) que inmediatamente después de consumida se 19 presentan los síntomas de intoxicación. También existen algunas plantas que solo algunas partes son tóxicas, casos específicos el de Erytrina flabelliformis (chilicote) en la que los frutos son tóxicos; o bien Acacia constricta (vinorama) en donde la sustancia tóxica la presenta en las hojas. En el tabla 2 se enlistan algunas plantas que se presentan después de las lluvias de invierno; por lo regular en esa época la producción de zacates nativos es mínima y en lugares sobrepastoreados pueden alcanzar grandes densidades. Tabla 2. Plantas tóxicas que se presentan en las lluvias de invierno. NOMBRE CIENTÍFICO Cryptantha grayi Lepidium lasiocarpum Descurainia pinnata Sisymbrium irio Senecio longilobus NOMBRE COMUN Peludita Cucharita Pamitón Pamita Hierba ceniza SUSTANCIA Nitratos Nitratos Nitratos Nitratos Alcaloides DURACION Anual Anual Anual Anual Anual En el caso de que en los agostaderos se presenten este tipo de problema, una de las formas para prevenirlo es por medio del manejo del ganado en los potreros; algunas de las recomendaciones son las siguientes: Evite sobrepastorear, ya que esto induce a un consumo exagerado de plantas forrajeras tendiendo estas a disminuir su población y estos lugares son ocupados por plantas indeseables incluyendo las tóxicas. Procure no poner animales hambrientos en lugares infestados, ya que la necesidad de satisfacer sus necesidades alimenticias hace que el ganado consuma todo tipo de plantas sin hacer una selección de las plantas deseables, por eso cada vez que haga cambio de potrero cerciórese de que el ganado esté bien alimentado. Hay que poner atención especial en animales que provengan de otra región o Estado, ya que estos desconocen la vegetación de los potreros y pueden consumir plantas tóxicas. Procure suministrarle todo el tiempo sal y minerales, porque una deficiencia de estas incita 20 a los animales a consumir plantas que normalmente no comen. Cuando empiece a notar síntomas de intoxicación en el ganado, cámbielo inmediatamente a otro potrero libre de plantas tóxicas. En animales intoxicados consulte un médico veterinario, aunque este le solucionará el problema del animal, no es la solución para el problema de las plantas tóxicas; por eso lo mas recomendable es mantener sus potreros en buena condición y asi evitar el problema de las plantas tóxicas. 2.7 QUÉ ES UNA PLANTA INDESEABLE Son aquellas que se presentan en lugares donde se ha hecho un mal uso del agostadero y desde el punto de vista ganadero no tiene ningún beneficio. Enfocándose a nivel ganadero, existen dos tipos; plantas invasoras son aquellas plantas de bajo valor forrajero que debido a su agresividad tienden a desplazar a las plantas forrajeras y plantas tóxicas son aquellas que presentan una sustancia tóxica específica (principio tóxico) que al ser consumidas por los animales cause daño a los más susceptibles. 2.7.1 Cuáles son las principales causas por las que se presentan las plantas indeseables. Una de las causas es el sobrepastoreo se observa como a medida que pasa el tiempo en lugares sobrepastoreados se presenta una disminución en las plantas deseables y un aumento en las indeseables. La reducción de fuegos por el hombre es otra de las posibles causas, ya que en forma natural el fuego ha mantenido en equilibrio las poblaciones de los arbustos. Las fluctuaciones climáticas como sequías prolongadas, aunadas con el sobrepastoreo, son otra causa de la invasión de plantas indeseables. Resiembras sin éxito, abandono de áreas e infraestructura como terracerías o corrales, dejan el suelo desnudo favoreciendo el crecimiento de plantas indeseables. • Cuáles son los diferentes métodos para controlar las plantas indeseables. Existen varias formas para controlar este tipo de plantas, el tipo de control a utilizar va a depender 21 de las condiciones tanto vegetativas como topográficas, estos métodos son: 2.7.2.1 Biológico. Control ejercido por algún organismo 2.7.2.2 Integrado. Es la combinación de dos o más métodos. • CUÁLES SON LOS DAÑOS DIRECTOS QUE CAUSAN LAS PLANTAS TÓXICAS Al hablar de daños directos se refiere a los causados sobre el ganado y éstos son: • Muerte de animales por intoxicación debido al consumo exagerado de este tipo de plantas. 2.8.2 Disminución en la ganancia de peso ya que al consumir cierto tipo de plantas tóxicas crean hábitos en el consumo de éstas, las cuales por lo regular son de bajo valor forrajero. • Disminución en el porcentaje de preñez o bien pueden causar aborto en vacas cargadas, lo cual trae como consecuencia una baja en la producción animal. • CUÁLES SON LOS DAÑOS INDIRECTOS QUE CAUSAN LAS PLANTAS TÓXICAS A LA GANADERÍA Los daños indirectos se consideran a los causados sobre la vegetación y son: 2.9.1 Disminución en la producción forrajera. • Al disminuir el forraje se tiene que reducir la carga animal y por lo tanto se presenta una baja en la producción de carne. 2.9.3 Los potreros infectados con plantas tóxicas deben de ser excluidos, además de que se tiene que ejercer un control sobre estas plantas lo cual trae pérdidas económicas. • QUÉ DEBE CONOCER EL GANADERO ACERCA DE LAS PLANTAS TÓXICAS En muchos casos el ganadero ha aprendido a convivir con este tipo de plantas, ya que por lo regular están presentes en los potreros debido a que son parte del ecosistema; para convivir con estas el ganadero debe conocer principalmente: 2.10.1 Cuáles son las plantas tóxicas de sus potreros. 22 2.10.2 Conocer el principio tóxico (sustancia química) • Saber en qué época del año se presentan o pueden causar daño, además de los lugares específicos donde se encuentran. • Qué tratamiento aplicar al ganado con problemas de intoxicación. Todo ésto con el fin de estar prevenido en caso de que se pueda presentar un problema de intoxicación. 2.11 QUÉ SE RECOMIENDA HACER EN CASO DE PRESENTAR PROBLEMAS DE INVASIÓN CON PLANTAS TÓXICAS • Evite poner animales hambrientos en lugares infestados con plantas tóxicas, sobre todo en épocas secas, ya que con tal de satisfacer sus necesidades alimenticias, tienden a consumir cualquier tipo de plantas incluyendo las tóxicas. • Suministre sal y minerales durante todo el año, ya que la ausencia de éstos incita a los animales a consumir plantas que por lo regular no consumían. • A los primeros síntomas de intoxicación en el ganado, cámbielos a otro potrero que no esté invadido con plantas tóxicas o bien meterlos en corrales dándole otro tipo de alimento. En caso de altas intoxicaciones consulte a su médico veterinario. Una vez resuelto el caso de intoxicación del ganado, el problema seguirá latente en los potreros, por eso es muy importante tener un buen manejo de los potreros recomendadas. 23