TP 5 Anestesia y Ansiedad

TP 5: ANESTESIA – EXCITACIÓN – ANSIEDAD
Objetivos: Diseñar experimentos de psicofarmacología. Realizar pruebas de
psicofarmacología experimental, con observaciones y registros comportamentales
sencillos.
a) Anestesia
Para la realización de todo procedimiento quirúrgico experimental o terapéutico es
necesario contar con anestésicos que garanticen la analgesia completa del sujeto de
experimentación y la seguridad del experimentador. La anestesia se define como la
supresión total o parcial, en forma temporal, de la sensibilidad y la movilidad de los
animales sin comprometer las funciones vitales de los mismos, mediante la acción de
fármacos aplicados según procedimientos especiales. Los anestésicos pueden tener
efectos locales, troncales (regionales) o generales.
Clasificación de anestésicos:
Según vías de administración:
Inhalatorios
- por circuitos cerrados
- por circuitos semicerrados
- por circuitos abiertos
Parenterales - administración subcutánea (SC)
- intramuscular (IM)
- intraperitoneal (IP)
- endovenosa (EV, IV)
Según grados de control:
Controlables
Semicontrolables
No controlables
Procedimiento:
Se estudiarán los efectos de anestesia en ratones por inhalación (éter sulfúrico), por
administración IP de un cóctel de clorhidrato de ketamina y xilacina, o pentobarbital
sódico, en cuanto a:

tiempo de inducción

dosis requerida

tiempo de mantenimiento

reflejos oculares

tiempo de reflejo de enderezamiento
El reflejo de enderezamiento se utiliza comúnmente como una variable para determinar
el efecto anestésico de diversas drogas. Se registra el tiempo necesario para que los
animales recuperen su posición normal luego de haber sido colocados de espaldas.
Proponemos que diseñen (junto con los simpáticos e incansables profesor e instructor)
el experimento destinado a comparar los anestésicos disponibles, teniendo en cuenta
la necesidad de grupos controles, los tiempos de registro, etc.
NOTA: Las dosis de 75 mg/kg de ketamina, y 10 mg/kg de xilacina comúnmente
reportadas, producen anestesia profunda y sostenida por aproximadamente 1 h. A los
fines del práctico, es conveniente aplicar dosis sub-anestésicas.
b) Prueba de ansiedad
En un grupo de investigadores ingleses construyó un laberinto con cuatro ramas en
forma de cruz, y demostraron que el estado de ansiedad de un animal era mayor en
las ramas abiertas, y que,efectivamente, la proporción de entradas y de tiempo pasado
en cada rama reflejaba más que sólo un cambio en la tendencia exploratoria (Pellow y
File, 1986; Pellow et al., 1985).
Si un comportamiento está relacionado con la ansiedad, puede
entonces ser
modificado con drogas que afecten la ansiedad, y no con drogas que afecten otras
respuestas conductuales. Es decir, drogas con efecto ansiolítico aumentan la
exploración de las ramas abiertas, mientras que las ansiogénicas lo disminuyen. La
prueba del laberinto en cruz elevado es uno de los modelos más utilizados, por varias
razones: es el modelo mejor validado, en forma conductual, farmacológica y
fisiológica; es capaz de detectar cambios en el estado de ansiedad de un animal en
ambas direcciones (ansiolisis y ansiedad); es de fácil construcción y no involucra
entrenamiento previo de los animales, ya que se observa el comportamiento
espontáneo de los mismos, no sometidos a estímulos nocivos como shocks eléctricos o
deprivación de alimentación o bebida.
Procedimiento
El laberinto es una construcción de madera, con dos ramas abiertas de 50 x 10 cm y
dos cerradas de 50 x 10 x 40cm con el techo descubierto, arreglada de tal modo que
las ramas abiertas quedan opuestas, al igual que las cerradas. El laberinto está elevado
50cm del suelo, y el observador se ubica a 2.5m enfrentando una rama abierta. En
cada sesión experimental, los animales son trasladados con anticipación a la habitación
donde se realiza la prueba, se los coloca en celdas individuales y se los inyecta con
droga o vehículo. A los 15 min, se colocan en forma individual en el centro del
laberinto, enfentando una rama abierta, y se los observa durante 5 min de exploración
libre. Se registran los siguientes parámetros: porcentaje de tiempo de permanencia en
ramas abiertas respecto del tiempo total de observación (%T.R.A); el cociente entre
las entradas a las ramas abiertas y las entradas totales a ambas ramas (%A/T); y las
entradas totales a ambas ramas (Ent.Tot). Para ensayar el efecto de las drogas
utilizadas (benzodiacepinas: diazepam 1 mg/kg, flunitrazepam 0.5 mg/kg), se
inyectarán grupos de animales, siempre bajo la supervisión de los atentos y elegantes
profesor e instructor del curso. Nuevamente, el diseño experimental será realizado por
los grupos de alumnos, previa consulta con ya se imaginarán quienes.
c) Excitación
Se determinará el efecto de un agente excitador como la anfetamina sobre la actividad
locomotora de ratones. Como paso previo se construirá el llamado “open field” sobre
una cartulina de 50x50 cm, con una cuadrícula con rayas separadas por 10 cm. Esta
cartulina será colocada en una caja de cartón del mismo tamaño. Los animales serán
inyectados IP con anfetamina ¿dosis? (no jalar!!!! Los intrépidos y modernos profesor e
instructor del curso les recordarán la famosa escena de la película Pulp Fiction en la
cual la joven Uma Thurman –conocida personalmente por los seductores y mundanos
docentes- sufre las consecuencias de introducir en sus delicados orificios nasales cierta
sustancia de dudoso origen) y colocados en la arena de experimentación durante 5
minutos. Los grupos de estudiantes registrarán los pasajes a través de las rayas del
open field, previa determinación del criterio a utilizar.
Entonces:
¿Qué nos dicen estos experimentos acerca de la acción de las drogas utilizadas? ¿Qué
se sabe del modo de acción de estas drogas?
Casi todo lo que sabemos de la acción de psicofármacos viene de este tipo de pruebas.
¿Te parece que es condición suficiente para probar estas drogas en humanos? ¿Qué
otras pruebas se te ocurren?
¿Qué variables hay que tener en cuenta para estos ensayos?
Ya que estamos:
Se adjuntan copias de prospectos de psicofármacos de uso relativamente común en
Argentina.
¿Qué conclusiones podés sacar de la información que figura en las secciones de
mecanismo de acción, administración y efectos secundarios?
Bibliografía adicional:
Brailowsky, S. Las sustancias de los sueños: Neuropsicofarmacología. Fondo de Cultura
Económica, México, 1995.
Castaneda, C. Las enseñanzas de don Juan. Fondo de Cultura Económica, 1991.