MICROSCOPIA

MICROSCOPIA
El ojo humano no logra distinguir objetos de menos de 50 micras de diámetro ni consigue resolver dos líneas
separadas por menos de 100 micras (es decir, las ve como una sola línea).
Para observar elementos tan pequeños es necesario disponer de lentes de aumento. Estas lentes se conocen
desde tiempos de Arquímedes, pero la óptica como disciplina se comenzó a desarrollar en el siglo XIII con el
monje franciscano Roger Bacon.
Anton Van Leeuwenhoek (Holanda, 1632-1723), un pulidor de lentes aficionado, logró fabricar lentes lo
suficientemente poderosas como para observar bacterias, hongos y protozoos, a los que llamó "animálculos".
El primer microscopio compuesto fue desarrollado por Robert Hooke. A partir de éste, los avances tecnológicos
permitieron llegar a los modernos microscopios de nuestro tiempo, los que existen de varios tipos y son
usados con diferentes fines.
Microscopio de Leeuwenhoek
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MICROSCOPIOS ÓPTICOS
Microscopio de campo claro: es el microscopio óptico compuesto utilizado en la mayoría de los aboratorios.
Para formar una imagen a partir de un corte histológico usa luz visible, por esto la muestra debe ser lo
bastante fina como para que los haces de luz puedan atravesarla. También se usan métodos de tinción, según
las necesidades, con el fin de aumentar los detalles en la imagen.
Microscopio de fluorescencia: permite la observación de estructuras fluorescentes, ya sea naturales o
artificiales.
Microscopio de barrido confocal: se usa para estudiar la estructura de sustancias biológicas. Combina
partes de un microscopio de campo claro con equipo fluorescente y un sistema de barrido que emplea un rayo
láser. A través de una computadora se reconstruye la imagen tomada por planos, a una imagen
tridimensional.
Microscopio de luz ultravioleta: sus resultados se registran fotográficamente ya que la luz U.V. no es
visible y daña la retina. Se utiliza en la detección de ácidos nucleicos, que absorben esta luz.
Microscopio de luz polarizada: es una modificación del microscopio de campo claro. Debido al fenómeno de
birrefringencia se pueden observar sustancias cristalinas y moléculas fibrosas.
MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS
Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza un haz de electrones para producir la imagen.
Permite la observación de detalles a escala macromolecular.
Microscopio electrónico de barrido (MEB): en este caso el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino
que choca contra su superficie. Permite una gran magnificación de las imágenes.
M.E.B.
EL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO
Es el principal medio que utilizaremos a lo largo de toda la materia para observar la morfología de los tejidos a
estudiar, por lo que debemos conocer en detalle sus partes y el funcionamiento de cada una de ellas.
Sistema Mecánico
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Pie
Vastgo o columna
Tornillos de ajuste macrométrico
Micrométrico
Tubo
Platina
Subplatina
Sistema Óptico
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De Observación Ocular
Objetivo
De iluminación condensador
Espejo
Fuente de luz
SISTEMA MECÁNICO
Este sistema sostiene al sistema óptico y aloja los elementos necesarios para la iluminación y enfoque del
preparado.
Pie: brinda apoyo y estabilidad al aparato.
Vástago: soporta la platina, tubo y tornillos de ajuste macro y micrométrico.
Tornillo de Ajuste: provocan el desplazamiento del tubo o la platina en sentido vertical, lo que permite el
enfoque.
Tubo: en su extremo superior se halla el ocular, y en el inferior el objetivo. Se trata de un cilindro metálico
cuyo interior se encuentra pintado de negro, lo que evita la reflexión de la luz. Normalmente tiene una
longitud de 170 mm.
Platina: es una plataforma horizontal sobre la cual se coloca y sujeta el preparado a observar, tiene un orificio
central que permite el paso de la luz y un venier que posibilita la relocalización de los detalles de interés.
Subplatina: sostiene al condenador y se ubica por debajo de la platina.
SISTEMA ÓPTICO
Se compone de un sistema óptico de observación y un sistema óptico de iluminación; el primero consta de:
Objetivo: está formado por un sistema de pequeñas lentes ubicadas muy cercanas una de la otra, la que se
halla en el extremo distal del objetivo se denomina lente frontal. Los objetivos pueden ser objetivos a seco (no
hay ninguna sustancia interpuesta entre la lente frontal y el preparado), u objetivos de inmersión (entre la
lente frontal y el preparado se coloca una sustancia cuyo índice de refracción es muy similar al del vidrio).
Ocular: es un tubo cilíndrico con un diafragma fijo en el centro y una lente en cada extremo, la superior se
denomina lente ocular y la inferior lente colectora.
El sistema óptico de iluminación consta de:
Condensador: concentra el haz de luz sobre el plano del objeto que se encuentra en la platina. Debajo de él
se encuentra el diafragma iris que regula la cantidad de luz que llega al condensador.
Fuente de Luz: es una lámpara que está ubicada en la parte inferior del aparato, en caso de no poseerla
debe ubicarse una fuente de luz externa (lámpara incandescente común) aproximadamente a 30 cm. del
espejo.
CARACTERISTICAS DE LOS OBJETIVOS:
 ESCALA DE REPRODUCCIÓN: relación lineal que existe entre el tamaño del objeto y su imagen, por ejemplo,
4:1, 40:1, 65:1, etc.
 PODER DEFINIDOR: es la capacidad del objetivo de formar imágenes de contornos nítidos.
 LÍMITE DE RESOLUCIÓN: es la menor distancia que debe existir entre dos objetos para que puedan
visualizarse por separado.
 PODER DE RESOLUCIÓN: es la capacidad de mostrar la imagen en sus detalles más finos. Está en relación
inversa con el límite de resolución.
 PODER DE PENETRACIÓN: es la propiedad de permitir la observación simultánea de varios planos del
preparado. Es inversamente proporcional a la escala de reproducción o aumento.
 AUMENTO TOTAL: Debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de
la imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular. Ejemplo: si tenemos
colocado el objetivo cuya escala de reproducción es 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces
el aumento total será 40 x 10 = 400.
USO CORRECTO DEL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO
1. Lo primero es conseguir una buena fuente de iluminación. Si la misma está incorporada al microscopio,
enfocamos con el objetivo de menor aumento, cerramos el diafragma de campo y movemos el condensador
hacia arriba y hacia abajo hasta que el contorno del diafragma se vea nítido. El diafragma se centra con los
tornillos que lo sujetan a la subplatina. Luego se quita el ocular y se verifica que la luz esté centrada. A
medida que se abre el diafragma su contorno desaparece del campo observado. Si la fuente de luz es externa,
se quita el ocular, se coloca el objetivo de menor aumento, y se mueve el espejo hasta centrar la luz.
Recordemos que si tenemos condensador debemos usar la cara plana del espejo.
2. Volvemos a colocar el ocular y, siempre con el objetivo de menor aumento, colocamos el preparado sobre la
platina. Utilizando el tornillo el ajuste macrométrico enfocamos lo más claramente posible.
3. El condensador debe estar en la posición más alta y el diafragma abierto. Esto si el preparado está
coloreado, sino el diafragma debe estar cerrado.
4. Con el tornillo micrométrico se logra el enfoque fino según nuestra visión.
5. Modificamos la apertura del diafragma hasta obtener la cantidad de luz deseada.
6. Luego de estudiado el preparado con este objetivo, podemos pasar gradualmente a objetivos de mayor
aumento, corrigiendo la apertura del diafragma para cada uno de ellos.
7. En caso de utilizar el objetivo de inmersión, se coloca una pequeña gota de aceite sintético sobre el
preparado y luego se enfoca con sumo cuidado, recordando que este objetivo es el de menor distancia frontal
y corremos el riesgo de estropear el preparado y la lente frontal. Al finalizar el uso de este objetivo se deben
retirar los restos de aceite con un papel de carilina o una gasa embebida en xilol o solvente especial para
limpieza de lentes, nunca se debe dejar sucio el objetivo.
8. Cuando se termina de utilizar el microscopio se lo debe dejar de la siguiente manera:
- fuente de luz apagada
- condensador al tope
- diafragma abierto
- platina alta
- objetivo de menor aumento en posición
- todas las lentes limpias.